猪肉中β-受体激动剂AlphaLISA检测方法的建立

建立了快速检测猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林4种β-受体激动剂的光激化学发光纳米均相时间分辨荧光免疫(Alpha LISA)分析方法。样品经乙酸铵和β-葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶酶解提取过柱,浓缩至干后,用缓冲溶液定容。样品与生物素化抗原、抗体、供体微珠和受体微珠进行酶联免疫,Alpha LISA进行检测,基质标准曲线定量。结果表明:沙丁胺醇、克伦特罗、溴布特罗和特布他林在0.1~500ng/m L范围内呈良好线性,相关系数均大于0.98,沙丁胺醇与克伦特罗、溴布特罗和特布他林的交叉反应率分别为143.3%,179.2%和95.6%,检出限为0.03~0.08 ng/m L。在0.5,10,20μg/kg 3个添加水平下,4种化合物的平均回收率为82.5%~115.9%,相对标准偏差(RSD)均小于12.0%。该方法操作简单,快速准确,适用于猪肉中β-受体激动剂的筛选与检测。     

伏马菌素B1单克隆抗体制备及化学发光免疫检测方法的建立

制备了高亲和力的伏马菌素B₁（FB₁）单克隆抗体,进而建立了谷物中FB₁的直接竞争化学发光酶联免疫检测方法（dc-CLEIA）。采用碳化二亚胺法成功合成了FB₁人工抗原,经杂交瘤技术获得分泌FB₁特异性抗体的细胞株,高碘酸钠法酶标单克隆抗体后,建立了FB₁的dc-CLEIA,本方法的IC₅₀值为1.43μg/L,线性范围为0.32～8.40μg/L,检出限为0.13μg/L,竞争反应时间仅需20 min。玉米样品加标回收率为100.2%～115.4%,相对标准偏差小于8.7%,谷物样品的检测结果与高效液相色谱法及商业化ELISA试剂盒检测结果相符。     

化学发光酶免疫方法检测克伦特罗残留

建立了间接竞争化学发光酶免疫法(competitive indirect chemilumine scent enzyme immunoassy,ic-CLEIA)检测猪尿中残留克伦特罗(clenbuterol,CLB)的方法,并优化了竞争反应时间,Tween-20含量,PBS离子强度与pH4个参数。优化后的ic-CLEIA检出限可达0．01μg/L,检测范围为0．04～25．8μg/L,ED50为0．54μg/L;尿样检测的平均回收率为98％～120％,批内与批间相对标准偏差(variation of coefficent,CV)均小于10％。这些参数均优于目前广泛使用的ELISA方法,说明本CLEIA方法可替代ELISA法,用于实际尿样的检测。     

微板式化学发光酶免疫分析法测定人血清中癌胚抗原

采用辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺(luminol)-H2O2化学发光体系,建立了一种测定人血清中癌胚抗原(CEA)的高灵敏度、高特异性、简便快速的微板式化学发光酶免疫分析方法。对免疫反应条件、酶结合物稀释度、发光反应时间、封闭液等进行了考察和优化。采用双抗体夹心法,室温静置1h,洗涤后加入100μL发光底物液,10min后检测。该方法的线性相关系数为0.9998;最低检出限为0.57μg/L;批内和批间变异均在10%之内;低、中、高3个不同浓度值样品的平均回收率分别为107.4%、93.3%和104.5%。使用本方法与进口发光试剂盒对40份人血清样品进行测定,结果表明,本方法显示了良好的相关性,其相关系数为0.9115。表明本分析体系稳定可靠,可用于商品化诊断试剂盒的开发和应用。     

限进印迹柱在线净化/液相色谱-串联质谱法检测动物源食品中克伦特罗与莱克多巴胺残留量

利用针对β-受体激动剂的限进型分子印迹整体柱,通过切换阀的组合和在线净化条件的优化,建立了检测动物源食品中克伦特罗和莱克多巴胺残留的在线净化/液相色谱-串联质谱法。样品经酶解和乙酸铵缓冲液提取后,由在线分子印迹柱净化,CAPCELL PAK C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,5μm)分离,多反应监测模式测定,内标法定量。克伦特罗和莱克多巴胺的定量下限分别为0.02μg/kg和0.09μg/kg。在猪肉、牛肉、香肠和奶粉中添加0.05~0.20μg/kg克伦特罗和0.5~2.0μg/kg莱克多巴胺,回收率为84.0%~103.8%,相对标准偏差小于12%。     

低延迟体积模式液相色谱-串联质谱法检测猪肉中盐酸克伦特罗残留量

应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS),在液相部分采用低延迟体积模式,以盐酸克伦特罗-D9为内标,建立了快速测定猪肉中盐酸克伦特罗残留的检测方法。样品经过提取纯化后,采用C18色谱小柱进行梯度洗脱分离,电喷雾正离子MRM质谱检测。低延迟体积模式可实现洗脱液的快速梯度变换,仪器检测时间为2.0min;盐酸克伦特罗的保留时间为0.82min,其保留时间重现性好,所建立的标准曲线线性较好(R2=0.9993)。该方法的定量限(LOQ)为0.5μg/kg;当加标量为0.5、5、10μg/kg时,其回收率为81.2%～114.2%,相对标准偏差为6.4%～11.1%(n=6)。该方法检测速度快、灵敏度高、结果准确,可以满足实验室对猪肉中盐酸克伦特罗残留的高通量测试。     

动物源性食品中56种兽药残留物的UPLC-MS/MS高通量分析

建立了超高效液相色谱串联质谱法同时测定56种动物源性兽药残留物的分析方法。以乙腈-0.5%乙酸水溶液(85:15,V/V)为提取溶剂,采用固相萃取柱(Oasis PRi ME HLB)进行样品净化,通过UPLC-MS/MS分析测定,基质曲线外标法定量。方法定量限为1.0μg/kg(喹诺酮类)、1.5μg/kg(糖皮质类)、10μg/kg(磺胺类)、1.0μg/kg(β-受体激动剂类)。56种兽药残留物在牛肉、猪肉、鸡肉和奶等基质样品中回收率范围为63.2%~101.5%,基质标准工作曲线线性相关系数大于0.937,精密度RSD15%(n=3)。方法适用于动物源性食品中兽药残留物的分析。     

GC–MS法测定猪肉样品中盐酸克伦特罗残留

建立了乙酸乙酯提取、SCX小柱净化、GC–MS分析、外标法定量的猪肉样品中盐酸克伦特罗残留的检测方法。盐酸克伦特罗在10.24~512.0 ng/mL的范围内线性关系良好,相关系数r=0.999 7。在1.92,5.12,12.80μg/kg添加水平下的回收率为73.0%~84.8%,测定结果的相对标准偏差为4.3%~8.2%(n=6)。2日间3浓度点的日间平均回收率在77.1%~81.2%之间,相对偏差在1.3%~5.3%之间。该方法简便、快速,精密度和准确度较好,能满足日常大批量猪肉样品中盐酸克伦特罗残留的检测要求。     

流动注射化学发光免疫分析检测猪肉中的盐酸克伦特罗残留

设计了一种快速检测猪肉中盐酸克伦特罗的流动注射-化学发光免疫分析方法.采用过氧化脲作为luminol-CH<,4>N<,2>O·H<,2>O<,2>-HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为增强剂,流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物.在最优条件下,测定克伦特罗的线性范围0.05～9μg/L(r=0.99...     

亚临界水萃取及液相色谱-串联质谱法检测猪肉中β-受体激动剂与氯霉素残留

建立了亚临界水萃取及液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测猪肉中β-受体激动剂和氯霉素的方法。样品酶解后,经亚临界水萃取,C18粉未净化,目标物经Agilent XDB-C18柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm)分离,采用液相色谱-串联质谱法多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配溶液内标法定量。优化条件下,沙丁胺醇和莱克多巴胺在1.0～32.0μg/L范围内线性关系良好,其定量下限(S/N>10)为0.5 ng/g,检出限(S/N>3)为0.25 ng/g;克伦特罗和氯霉素在0.2～6.4μg/L范围内线性关系良好,其定量下限(S/N>10)为0.1 ng/g,检出限(S/N>3)为0.05 ng/g,相关系数均大于0.99。猪肉基质在3个加标水平下,回收率为79.2%～113.6%,相对标准偏差(RSDs)为3.2%～12.0%。该方法的灵敏度、准确度和精密度均符合兽药残留测定的技术要求,适用于猪肉中β-受体激动剂和氯霉素残留的检测。     

化学发光酶免疫法检测猪肉中氯丙嗪残留

采用棋盘滴定法确定包被抗原浓度和抗体稀释倍数,通过单因素实验优化了竞争反应时间、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、pH值等参数,建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度和稳定性.结果表明,最佳反应条件为包被抗原浓度为0.05 μg/L;氯丙嗪抗体稀释32000倍;体系缓冲液为含10％甲醇、0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0).本方法的IC50为0.12 μg/L;检出限为0.02 μg/L;线性范围0.02～24.78 μg/L;批内和批间相对标准偏差均小于10％.与其它结构类似物没有明显交叉反应.猪肉检测的平均回收率为87.4％～105.6％,与高效液相色谱方法的相关性良好.本方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性.     

基于纳米金固定半抗原的电化学免疫传感器灵敏检测克伦特罗

研制了一种基于纳米金固定半抗原的间接竞争电化学免疫传感器,可灵敏检测克伦特罗.在金电极表面组装1,6-己二硫醇单分子膜,通过Au-S共价作用连接纳米金颗粒,通过吸附作用固定克伦特罗牛血清白蛋白偶联物.样品中的待测组分与固定化的克伦特罗偶联物竞争结合单克隆抗体,碱性磷酸酯酶标记的二抗选择性地与电极表面捕获的一抗反应,进而催化底物1-萘酚磷酸酯水解生成1-萘酚,在电极表面氧化产生电信号.在优化的实验条件下,克伦特罗浓度在0.1～1000 μg/L范围内与电流强度线性相关,线性方程为I(A)-8.79× 10-7-2.66× 10-7logC (μg/L),相关系数0.9960,检出限达20 ng/L.同时测定了猪肉及猪肝样品中克伦特罗含量,相对标准偏差平均值为7.0％,加标回收率在89.1％～105.6％之间,与传统的间接竞争酶联免疫吸附法对照,结果无显著性差异.     

毛细管电泳电化学法分离检测盐酸克伦特罗、特布他林和沙丁胺醇

建立了毛细管电泳电化学法对盐酸克伦特罗、特布他林和沙丁胺醇进行分离检测。方法采用胶束电泳体系,以铂圆盘为工作电极,考察了检测电位、缓冲液浓度和pH、十二烷基硫酸钠(SDS)浓度、分离电压等因素的影响。3个分离物在10 kV的分离电压、缓冲体系为15 mmol/L(pH 9.0)硼砂+20 mmol/L SDS条件下得到分离。盐酸克伦特罗、特布他林和沙丁胺醇的线性范围分别为2.0～400,3.5～700,5.0～1000μg/L。方法已用于猪肉样品的检测。     

CdTe量子点荧光猝灭法测定奥沙利铂中微量银

以谷胱甘肽作为稳定剂,100℃恒温回流,直接合成水溶性CdTe量子点。基于Ag+对合成的CdTe量子点的荧光猝灭效应,建立了测定抗癌药物奥沙利铂中微量银的方法。考察了量子点浓度、缓冲液种类、缓冲液浓度、缓冲液pH和反应时间对银离子测定的影响。当量子点浓度为0.004 g/L时,在0.10 mmol/LpH7.4的磷酸缓冲溶液中,反应时间为5 min,体系的相对荧光强度与Ag+的质量浓度呈良好的线性关系,其线性范围为16.42～98.50μg/L,线性相关系数为0.9975,检出限为0.12μg/L。     

微芯片毛细管电泳快速测定盐酸洛美沙星

采用微芯片毛细管电泳非接触电导检测法快速测定了盐酸洛美沙星胶囊中盐酸洛美沙星的含量。探讨了缓冲液类型、浓度,添加剂种类、浓度及分离电压、进样时间等因素对分离检测的影响。实验采用5.0mmol/L HAc(pH=2.5)+5%乙醇为缓冲溶液,分离电压3.0 kV,在1 min内实现了盐酸洛美沙星的快速分离测定。优化条件下盐酸洛美沙星的线性范围为20.0～250.0μg/mL,检出限为10.0μg/mL(S/N=3),RSD=2.0%,加标回收率为98.6%～103%。     

多壁碳纳米管净化/超高效液相色谱串联质谱同时测定动物组织中四环素与喹诺酮多残留

采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)在正离子模式下通过多反应监测(MRM)方式同时测定了猪肉和鸡肉中3种四环素和2种喹诺酮类药物的残留量.残留药物经Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液(pH4.0)提取后,采用多壁碳纳米管(WMCNTs)固相萃取柱净化,甲酸-乙腈(体积比5:95)洗脱,UPLC-...     

草甘膦的邻硝基苯磺酰氯柱前衍生高效液相色谱分析

以邻硝基苯磺酰氯(NBSC)为衍生化试剂,建立了柱前衍生草甘膦的反相高效液相色谱紫外检测法,并对衍生化条件进行了优化.最佳衍生化条件为:衍生温度25℃,反应时间10 min,硼砂缓冲溶液浓度0.25 mol/L(pH 9.0),草甘膦与NBSC的摩尔比为1:5.HPLC分析条件为:采用Lichrospher C18柱,...     

毛细管电泳-电致化学发光法测定兔血浆中的羟考酮

基于稀土Eu(Ⅲ)掺杂的类普鲁士蓝膜修饰的铂电极为工作电极,建立了测定羟考酮的毛细管电泳-电致化学发光分析方法。考察了检测电位、运行缓冲溶液的酸度及浓度、分离电压、进样条件等对电泳分离效果及检测灵敏度的影响。在最佳的实验条件下,羟考酮可在4 min内得到分离,其ECL强度值与羟考酮的质量浓度在7.0×10-2～7.0μg/mL和7.0～70.0μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为4.2×10-2μg/mL(3σ),峰高和迁移时间的相对偏差分别为3.6%和0.48%(n=6)。方法用于兔血浆中羟考酮含量的检测,加标回收率在99.7%～101.0%之间。     

柱前衍生/高效液相色谱法测定果蔬中仲丁胺残留

建立了高效液相色谱(HPLC)测定仲丁胺的分析方法。试样采用全自动凯氏定氮仪蒸馏,蒸馏液经碱中和,以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)为衍生剂在碱性条件下衍生,衍生产物经C18柱分离,紫外检测器(265nm)检测。实验考察了衍生剂浓度、硼酸盐缓冲溶液的p H值、反应温度与时间等因素对衍生反应的影响,结果表明,最优的衍生剂浓度为0.50 g/L,缓冲溶液p H值为8.0,反应温度为室温,反应时间为15 min。在此条件下,仲丁胺在0.001~1.000 mg/L浓度范围内与其响应信号呈良好的线性关系,相关系数为0.999 8,加标回收率为82.4%~95.2%,相对标准偏差为1.3%~6.8%,方法检出限为0.1μg/kg,定量下限为0.5μg/kg。该方法快速、简便、安全、灵敏度高、重现性好,可用于果蔬中仲丁胺残留的测定。     

三相中空纤维膜液相微萃取-高效液相色谱法测定水中痕量双酚A

建立了三相中空纤维膜液相微萃取-高效液相色谱(HF-LPME-HPLC)方法,用于分析测定水中痕量双酚A的含量.设计了三相中空纤维膜液相微萃取系统,优化的HP-LPME最佳萃取条件为:萃取剂为正辛醇,接受相NaOH浓度为0.09 mol/L,样品溶液pH=4.0,NaC1加入量为30 g/L,搅拌速度为900 r/min,萃取时间为60 min.萃取后取20 μL接受相进行色谱分析.在最佳萃取条件下,方法的线性范围为0.5～200 μg/L(r＞ 0.999),检出限(信噪比为3)为0.2 μg/L;富集因子为241;方法RSD＜3.2％ (n=3).在实际环境水样中添加5,20和50μg/L的双酚A标准物质,加标平均回收率为92.8％～101.9％.表明本方法可用于水中痕量双酚A的快速准确测定.