用原位PCR方法检测培养细胞中的单拷贝SRY基因

以原位ＰＣＲ方法在培养的ＨＩＣＭＡ细胞中进行了Ｙ染色体上单拷贝ＳＲＹ基因的原位扩增，并使用ＰＣＲ方法制备的地高辛标记探针原位检测了所扩增的片段．比较研究表明，原位ＰＣＲ法较之直接的原位杂交法，其灵敏度提高５倍以上     

限制酶Sma I参与的PCR产物克隆技术

介绍了一种增加连接效率的ＰＣＲ产物克隆技术，即ＳｍａＩ内切酶参与的ＰＣＲ产物与ＳｍａＩ酶切的载体的连接；并通过克隆黄鳝基因组中一段约２５０ｂｐ的ＰＣＲ产物的实例证实了该技术的可靠有效性．     

采用16S rRNA基因PCR检测病原菌的研究进展

细菌核糖体小亚基ＲＮＡ基因为所有的细菌共有，且其与细菌整个基因组的变化相比，具有高度的保守性。通过１６ＳｒＲＮＡ基因保守区引物进行ＰＣＲ扩增，可早期、快速检测细菌。通过进一步分析，可鉴定菌种。本文就细菌１６ＳｒＲＮＡ基因ＰＣＲ检测对病原菌感染判断，病原菌的快速检测，病原菌的分类，鉴定及流行病学研究等方面作一综述。     

用PCR技术检测生物硝化池污水中硝化细菌(Nitrobacteria)的研究

从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌ＤＮＡ,以其为模板,针对其１６ＳｒＲＮＡ基因及２３ＳｒＲＮＡ基因而设计合成了两对引物并分别进行了ＰＣＲ扩增,扩增产物的２％琼脂糖凝胶电泳结果显示,硝化细菌ＤＮＡ模板得到了特异性扩增．参照分子量标准（Ｍａｒｋｅｒ）的电泳结果,被扩增的ＤＮＡ条带大小分别约为４００ｂｐ和７３０ｂｐ．实验结果表明ＰＣＲ技术可用于污水中硝化细菌的快速检测     

基于纳米金/多孔硅基底的荧光标记法对生物分子的检测

为制做一种低成本、易标记、稳定性好、灵敏度高的生物传感器,本文制备了一种具有较强荧光信号及生物兼容性的多孔硅生物传感器材料.利用纳米金的等离子体效应增强多孔硅中荧光标记物的荧光信号,在纳米金修饰的多孔硅中采用罗丹明6G荧光标记法对生物分子进行检测.通过链接生物荧光探针后荧光信号强度的变化实现生物浓度检测,其检测极限为121 nM,对生物大分子成功实现了低成本、易标记、稳定性好、灵敏度高的检测.     

PCR检测伪狂犬病病毒的研究

用ＰＣＲ的方法，扩增了伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）ｇｐ５０基因的一段较为保守区（２１６ｂｐ）．检测了不同ＰＲＶ毒株感染的ＢＨＫ细胞以及接种的家兔，并对ＰＣＲ检测的灵敏性作了初步研究，结果表明，ＰＣＲ法扩增ｇｐ５０基因具有较高特异性和灵敏性，是检测ＰＲＶ的有效方法     

反向PCR扩增问号赖型钩体重组质粒pDJH2插入片段

钩端螺旋体赖型赖株（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓＳｅｒｏｖａｒｌａｉ）ＤＮＡ分别经ＢａｍＨＩ,ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ３种内切酶酶切完全消化,通过设计１对引物,反向ＰＣＲ扩增问号赖型钩体重组质粒ｐＤＪＨ２插入片段两端的未知序列．结果显示不同酶切环化连接,经反向ＰＣＲ扩增均可得２条大小相等的扩增带．结果提示反向ＰＣＲ技术可以用于问号赖型钩体重组质粒插入片段两端的未知序列的研究,为获得钩体完整基因序列提供新的途径．     

白缘缺微卫星分子标记的筛选

用磁珠-生物素标记的微卫星探针（ACA）15与白缘缺（Leiobagrus marginatus）基因组酶切片段杂交，捕获含有微卫星序列的DNA片段，连接到T载体中，构建富集微卫星序列的小片段插入文库，再用γ^-32P标记的探针进行二次筛选，获得阳性克隆785个，对其中的140个克隆进行了测序，获得完整的微卫星序列132个．用引物设计软件Primer Premier5．0设计引物64对．对其中的20对引物进行了多态性检测，筛选到稳定扩增的标记13对，用此13对微卫星引物分析了缺属白缘缺（L．marginalus）、拟缘缺（L．marginatoides）（大、小各1种）、黑尾缺（L．nigricauda）共4个群体的遗传多样性，其中10对微卫星引物在种内或种间表现出多态性．     

麻疹病毒(Nepal毒株)H基因的序列测定及其表达

提取麻疹病毒Ｎｅｐａｌ毒株的ＲＮＡ并利用逆转录ＰＣＲ方法特异性地扩增血凝素基因（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）．将Ｈ基因克隆并测定序列，结果表明新毒株的Ｈ基因与标准疫苗毒株Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ之间存在较多重要的基因变异，两者的同源性为９８．１７％．将Ｈ基因克隆到表达载体ｐＣＤ－ＳＲα中并利用电转染法转染ＣＯＳ－７细胞，利用血凝实验检测了Ｈ蛋白的表达及功能     

猪瘟病毒石门株E2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增了猪瘟病毒石门株的Ｅ２基因．扩增片段大小为１１８４ｂｐ，与预期大小一致．经ＳａｃＩ酶切和巢式ＰＣＲ证实了Ｅ２基因的特异性．将Ｅ２基因扩增片段首先克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，进行全序列测定，将该基因再克隆到表达载体ｐＢＶ２２１．采用温控诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示Ｅ２基因获得表达．ＥＬＩＳＡ表明Ｅ２基因表达产物可与猪瘟阳性血清起特异性反应．     

白缘(鱼央)微卫星分子标记的筛选

用磁珠-生物素标记的微卫星探针(ACA)15与白缘缺(Leiobagrus marginatus)基因组酶切片段杂交,捕获含有微卫星序列的DNA片段,连接到T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库,再用γ-32P标记的探针进行二次筛选,获得阳性克隆785个,对其中的140个克隆进行了测序,获得完整的微卫星序列132个．用引物设计软件Primer Premier 5．0设计引物64对．对其中的20对引物进行了多态性检测,筛选到稳定扩增的标记13对,用此13对微卫星引物分析了缺属白缘缺(L．marginalus)、拟缘缺(L．marginatoides)(大、小各1种)、黑尾缺(L．nigricauda)共4个群体的遗传多样性,其中10对微卫星引物在种内或种间表现出多态性．     

三种非放射性标记DNA探针杂交灵敏度的比较

以地高辛配基、光敏生物素及补骨脂素标记的Ｎ－ｒａｓＤＮＡ片段为探针，采用点渍法和ＤＮＡ印渍法，比较了这三种非放射性标记探针的杂交灵敏度．在点渍法中，三者能检测到的低限ＤＮＡ浓度分别为０．１μｇ·Ｌ－１，１μｇ·Ｌ－１和１μｇ·Ｌ－１．在ＤＮＡ印渍法中，地高辛配基能检测到的低限ＤＮＡ浓度亦为０．１μｇ·Ｌ－１．本文还讨论了影响上述三者灵敏度的有关因素．     

具有高斯光阑时相位共轭光腔的非简并模

应用ＰＣＭ变换矩阵的第一形式。计算了具有高斯光阑时非简并情况下多元件腔镜上的模。得出ＰＣＭ上的模受高斯光阑存在的影响，而ＲＭ上的模与高斯光阑无关，且具有高斯光阑的非简并模是微扰稳定的。最后将非简并ＰＣＲ与简并ＰＣＲ进行了比较和讨论，认为非简并ＰＣＲ不亚于简并ＰＣＲ。     

磁珠富集法筛选池蝶蚌微卫星分子标记

通过磁珠富集的方法分离池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)的微卫星分子标记。将池蝶蚌基因组DNA酶切,连接Brown接头,采用PCR技术富集,与探针杂交后杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,再将这些片段洗脱,PCR扩增,克隆构建含有微卫星片段的"基因组文库",所得到的阳性克隆进行测序。从所获得的212个阳性克隆中选取110个进行测序,其中54.5%含有微卫星序列,80%的重复序列重复数在10以上,微卫星序列中21.4%为完美型。除探针中使用的AC、AG等重复单元外,还观察到CT、GA、ATG等重复序列。设计获得60对微卫星引物,合成其中的30对经PCR筛选,结果有10对引物扩增出多态性条带。该实验表明:磁珠富集法是获得池蝶蚌微卫星分子标记的一种有效的方法,同时,制备出的微卫星标记可为今后研究池蝶蚌分子遗传多样性提供有用的遗传标记。     

Pd／CeO2γ—Al2O3上表面氧物种脱附及其对甲醇氧化活性…

采用ＴＰＳＲ－ＭＳ及ＴＰＤ－ＭＳ技术研究了Ｐｄ／ＣｅＯ２－γ－Ａｌ２Ｏ３体系催化剂上表面氧物种脱附－恢复和甲醇表面反应性能，并以甲醇氧化反应为探针考察了催化剂在不同气氛下的氧化活性。     

基于生物信号纳米放大技术的戊肝病毒检测基因芯片

建立了一种利用“双探针夹心银染”技术快速检测戊型肝炎病毒（HEV）的基因芯片方法。提取的病毒核酸经过RT-PCR扩增，PCR体系中用掺人生物素修饰的dUTP扩增得到带有生物素的核酸片段，5’末端-NH。修饰的同源寡核苷酸作为捕获探针固定到处理后的玻片上，该探针识别病毒的带有生物素的核酸片段，而链霉亲和素标记的胶体金与生物素紧密结合，通过银沉积在金颗粒表面放大信号可以目视结果。采用该方法对已经确证的86个血清样本进行检测，检出52个阳性和34个阴性样本，结果与荧光定量PCR检出一致。     

基于氧化石墨烯及染料标记的核酸三色荧光探针检测汞离子

利用氧化石墨烯(GO)、两种荧光染料标记的单链DNA及核酸染料SYBR GreenⅠ(SG-Ⅰ),构建了能特异性识别Hg²⁺的三色荧光探针,建立了一种快速、高效、高灵敏定量检测水体中汞离子(Hg²⁺)的新方法。在这种探针中,两种染料Tetramethyl-6-carboxyrhodamine (TAMRA)和Cyanine-5 (Cy-5)分别标记在两条单链DNA的5’端,这两条单链DNA中有一部分碱基互补配对,未互补的碱基均为胸腺嘧啶(T碱基)。在没有Hg²⁺存在时,两种荧光染料标记的单链DNA被吸附在GO的表面,TAMRA和Cy-5与GO靠近,荧光被GO猝灭,它们的荧光信号都很弱;此时,SG-Ⅰ被吸附在GO的表面或游离在溶液中,荧光信号也很弱。在有Hg²⁺存在时,两种荧光染料标记的单链DNA通过T-Hg²⁺-T结构特异性结合形成双链DNA,从而脱离GO的表面,TAMRA和Cy-5远离GO,荧光信号恢复;与此同时,SG-Ⅰ与双链DNA结合,荧光强度显著增强。根据TAMRA、C...     

多协议标记交换——多媒体远程教育IP网络的核心技术

对多协议标记交换（Ｍｕｌｔｉ－ＰｒｏｔｏｃｏｌＬａｂｅｌＳｗ ｉｔｃｈｉｎｇ,ＭＰＬＳ）的基本概念及其工作原理进行了介绍,随后对它的关键技术进行了分析,最后对几个相关的问题进行了讨论．     

异硫氰酸荧光素标记尿激酶的制备与性能研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)对溶栓蛋白药物尿激酶(uPA)进行了荧光标记, 制备了荧光素标记的尿激酶(FITC-uPA), 经核磁谱及红外谱表征证实了反应能有效进行, 其荧光素/蛋白值(F/P)值为0.45. 尿激酶经荧光素标记后, 具有良好的荧光性质, 其荧光检测下限低达10-6 g?mL-1. 在1~100 ?g?mL-1范围内, 荧光强度与溶液浓度具有很好的线性关系, 可用于微/痕量蛋白质的定量/定性检测和跟踪标记. 荧光素标记后的尿激酶, 其流体力学直径与未标记的尿激酶基本一致, 其体外溶栓能力也与未标记的尿激酶相当, 说明FITC标记基本不影响尿激酶的生物活性, 是一种简单、有效的溶栓药物标记方法.     

卵形鲳鲹微卫星分子标记的筛选

本研究通过生物素与链霉素的强亲和性原理,采用生物素-磁珠吸附微卫星富集法筛选卵形鲳鲹的微卫星分子标记序列.从201个菌落中挑选出152个阳性克隆进行测序,成功测序137个,微卫星含量达到90.13%,共得到131个重复次数在6次以上的微卫星DNA序列,除生物素探针中使用的CA重复外,还得到TG、TC、GA、ATTT的重复序列.其中完美型85个,占64.9%;非完美型36个,占27.5%;混合型10个,占7.6%.利用PrimerPremier5.0设计引物90对,挑选其中的60对引物进行合成和PCR筛选,结果显示,35对引物可扩增出特异性条带.筛选的卵形鲳鲹微卫星分子标记具有多态性,可用于遗传多样性分析.