磁珠富集法筛选池蝶蚌微卫星分子标记

通过磁珠富集的方法分离池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)的微卫星分子标记。将池蝶蚌基因组DNA酶切,连接Brown接头,采用PCR技术富集,与探针杂交后杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,再将这些片段洗脱,PCR扩增,克隆构建含有微卫星片段的"基因组文库",所得到的阳性克隆进行测序。从所获得的212个阳性克隆中选取110个进行测序,其中54.5%含有微卫星序列,80%的重复序列重复数在10以上,微卫星序列中21.4%为完美型。除探针中使用的AC、AG等重复单元外,还观察到CT、GA、ATG等重复序列。设计获得60对微卫星引物,合成其中的30对经PCR筛选,结果有10对引物扩增出多态性条带。该实验表明:磁珠富集法是获得池蝶蚌微卫星分子标记的一种有效的方法,同时,制备出的微卫星标记可为今后研究池蝶蚌分子遗传多样性提供有用的遗传标记。     

江西省中华鳖种质状况及养殖方式调查

对江西省中华鳖的主要养殖企业分布、种质情况及养殖模式等进行了调查,结果表明:全省各地均有养殖,有一定规模的养殖企业主要分布于南丰县、黎川县、玉山县、永修县、余干县、进贤县和弋阳县等地;主要的养殖品系有鄱阳湖中华鳖、广东绿卡中华鳖、日本品系中华鳖、黄河中华鳖等;采用的养殖模式主要分为3种:常温养殖模式,控温高产养殖模式和生态化高产养殖模式。测量了不同养殖企业的6个中华鳖养殖类群的13项形态指标,从形态数据方面分析了不同养殖类群的种质。英明养殖类群系黄河中华鳖、日本品系中华鳖和台湾鳖的杂交种;富源养殖类群为鄱阳湖中华鳖,但推测其有广东绿卡中华鳖品系的混杂;进贤养殖类群是鄱阳湖中华鳖、广东绿卡中华鳖、日本品系中华鳖和黄河中华鳖等品系的混杂种;京丰养殖类群、兴初养殖类群和永修养殖类群是鄱阳湖中华鳖,但不排除有其他品系混杂的可能,其种质有待进一步研究。     

池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)线粒体DNA COII基因的序列分析

用细胞色素氧化酶Ⅱ基因特异性引物,对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行PCR扩增和双向测序,在10个个体中均得到序列一致的细胞色素氧化酶Ⅱ基因序列,长度为681bp;A、T、G、C含量分别为19.4%(132个)、30.4%(207个)、38.9%(265个)和11.3%(77个),A+T含量(58.3%)明显高于G+C(41.7%)含量,与其它淡水珠蚌科种类相同基因片段的碱基含量相似;密码子上4种碱基使用出现偏倚性,密码子第1位上碱基G使用率高达38.8%,碱基T为29.5%;密码子第2位上碱基T的使用率为38.8%,碱基C的使用率低至15.9%;密码子第3位上碱基T的使用率高达48.5%,而碱基C的使用率仅为4%;第3位碱基T的使用率比第二位高,这种递增现象也出现在高等无脊椎动物昆虫的COⅡ上。BLAST结果显示池蝶蚌COⅡ与三角帆蚌具有较高的同源性,相似性为95%,MP法构建的分子系统进化树表明这两种淡水珍珠育珠蚌的亲缘关系最近。     

池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析

筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。     

不同施肥条件下池蝶蚌养殖池塘季节性浮游植物群落间的差异

池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)原产于日本琵琶湖,1997年引入中国并繁殖成功。实践证明,池蝶蚌的育珠能力强,质量优,已在全国淡水珍珠主产地推广养殖。为了解不同投饵施肥方式所提供的食物和生存的环境,2010年5月至2011年3月间对池蝶蚌养殖池塘的浮游植物群落结构进行了9次调查。全年共检测到浮游植物103种(属),不同施肥方式浮游植物的密度范围分别为:未施肥池塘在1.8×105～289.5×105 cells/L之间;施含益生菌发酵有机肥的池塘在12.9×105～705×105 cells/L之间;施发酵后的鸡粪肥池塘在5.4×105～481.6×105 cells/L之间。全年采样中未施肥池塘浮游植物密度显著低于施肥池塘的浮游植物密度;施含益生菌肥池塘与施发酵鸡粪肥的浮游植物密度之间无显著性差异,而益生菌肥用量是鸡粪肥的一半,因此益生菌肥更有利于浮游植物的生长,且对池塘污染小。3种施肥情况的全年群落组成5,6,7月均以绿藻占优势;8,9,10月以绿藻占优势,蓝藻占次优势;11,12和次年3月以隐藻占优势。抚州池蝶蚌养殖基地四季不分明的特点,春较短,冬季较长,夏、秋、冬季分割明显;蓝藻门、硅藻门主要分布秋季,隐藻门主要分布在冬季和早春。     

江西3种红鲤血清转铁蛋白遗传多态性

采用不连续聚丙烯酰胺垂直电泳(PAGE)和不连续十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺垂直电泳(SDS-PAGE)对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤的血清转铁蛋白(Tf)进行研究。PAGE电泳结果表明3种红鲤的Tf图谱具有3条带,荷包红鲤与玻璃红鲤Tf表型由Tfb、Tfc组成,兴国红鲤Tf表型由Tfa、Tfb、Tfc组     

池蝶蚌外套膜的组织学观察

运用组织学方法对池蝶蚌不同部位外套膜进行了研究。结果表明,池蝶蚌外套膜由边缘膜和中央膜组成,边缘膜包括3个突起,分别是生壳突起,感觉突起和缘膜突起。不同部位外套膜的组织结构基本相同,由外表皮、内表皮和结缔组织组成。内表皮细胞间分布有3种类型的分泌细胞,分别是嗜碱     

乌龟形态性状对体重的影响效果

选择I龄乌龟291只,测定背甲长、背甲宽、甲桥长、腹甲长、腹甲宽、体高和体重共7个性状,采用相关分析和通径分析方法,计算了以形态性状为自变量对体重做依变量的相关系数、通径系数、决定系数及相关指数,定量地分析了形态性状对体重的影响效果。结果表明,乌龟7个形态性状与体重的相关系数达到极显著水平(p﹤0.01);通径分析揭示了多元分析中多个自变量与依变量的真实关系,背甲长、背甲宽、体高和腹甲长对体重的通径系数达到显著水平,它们是影响体重的重要指标,其中背甲长对体重的直接影响(0.597**)最大,是影响体重的主要因素,其次是背甲宽(0.193**)和体高(0.159**),腹甲长对体重的影响(0.063*)较小;甲桥宽与体重的相关程度很大(0.873),但它与腹甲宽对体重的直接影响都非常小,主要通过其他性状间接影响体重,是影响体重的次要因素,均被剔除;决定系数分析结果与通径分析结果有一致的变化趋势;所选形态性状与体重的复相关指数R2=0.940,说明影响体重的主要自变量指标已经找到,多元回归分析建立了背甲长(X1)、背甲宽(X2)、腹甲长(X4)、体高(X6)对体重(Y)的回归方程,回归截距和相应的回归系数分别是-236.255,2.421,1.188,0.162,1.680;建立回归方程为Y=-236.255+2.421 X1+1.188 X2+0.162 X4+1.680 X6;为乌龟遗传育种提供一定的理论依据和测度指标。     

鄱阳湖乌龟不同组织的同工酶

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术,分析了乌龟(Chinemys reevesii)的心、脑、眼、肝、胃、肺、小肠、肌肉、脾、性腺10种组织中的酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乙醇脱氢酶(ADH)4种同工酶的表达模式,并对其同工酶位点及酶谱表型进行了分析。结果表明,乌龟4种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。在心、肝脏、肺、小肠、肌肉和性腺6种组织中检测到EST活性,并在肝脏中检测到7条酶带;LDH酶带多于典型的5条,其中Ldh-1在胃和脾中被检测到,而Ldh-2只在脾中被检测到;MDH具有上清液型(s-MDH)和线粒体型(m-MDH)两种类型,s-MDH型的活性高于m-MDH的活性;ADH中检测到3条酶带,由两个基因位点编码。同工酶的种类与活性的变化与其功能相一致。     

池蝶蚌精子形态及其活力

池蝶蚌精子具有子弹形头部及细长均匀鞭毛尾,属鞭毛型。全长为254.91±20.03μm;头部子弹形,长为32.33±2.15μm,宽为16.60±3.29μm;鞭毛细长均匀,长为216.67±19.73μm。为了更好的计算池蝶蚌精子的存活率,本研究采用曙红Y染色的方法,观察了精子在生理盐水、池塘水和蒸馏水中的存活时间及运动方式。结果显示,精子在生理盐水中的存活时间最长,可达6h;其次是蒸馏水,约为4.5h;最短存活时间是在池塘水中,约为4.0h。池蝶蚌精子的主要运动方式有快速直线游动、弧线运动和原地转动3种方式。快速直线游动的精子活力最高,其次是弧线运动,精子活力降低后进行原地转动。研究的结果对池蝶蚌家系的建立起重要作用。