池蝶蚌HsTRAF6基因的克隆鉴定及表达分析

肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）对于介导Toll样受体（TLR）/白细胞介素1受体（IL-1R）信号传导以及随后的NF-κB和AP-1的激活至关重要。在本研究中,已经克隆并鉴定了池蝶蚌（Hyriopsis schlegelii）TRAF6（以下简称HsTRAF6）,cDNA全长为3 945 bp,ORF框1 965 bp,编码654个氨基酸,该区域包含保守的特征结构域,包括1个RING结构域、2个TRAF型锌指结构域、1个典型的卷曲螺旋（coiled coil;TRAF-N）和MATH（TRAF-C）结构域。系统发育分析显示,池蝶蚌与其他贝类等软体动物聚在一支。此外,qRT-PCR分析显示HsTRAF6在组织中广泛分布,在鳃和肝胰腺中表达最丰富;脂多糖和嗜水气单胞菌免疫刺激后,分别在7个时间点（0,6,12,24,36,48,72 h）对10个组织中HsTRAF6的mRNA表达差异性进行分析,各组织间表达变化存在差异,但均有显著变化。     

池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)线粒体DNA COII基因的序列分析

用细胞色素氧化酶Ⅱ基因特异性引物,对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行PCR扩增和双向测序,在10个个体中均得到序列一致的细胞色素氧化酶Ⅱ基因序列,长度为681bp;A、T、G、C含量分别为19.4%(132个)、30.4%(207个)、38.9%(265个)和11.3%(77个),A+T含量(58.3%)明显高于G+C(41.7%)含量,与其它淡水珠蚌科种类相同基因片段的碱基含量相似;密码子上4种碱基使用出现偏倚性,密码子第1位上碱基G使用率高达38.8%,碱基T为29.5%;密码子第2位上碱基T的使用率为38.8%,碱基C的使用率低至15.9%;密码子第3位上碱基T的使用率高达48.5%,而碱基C的使用率仅为4%;第3位碱基T的使用率比第二位高,这种递增现象也出现在高等无脊椎动物昆虫的COⅡ上。BLAST结果显示池蝶蚌COⅡ与三角帆蚌具有较高的同源性,相似性为95%,MP法构建的分子系统进化树表明这两种淡水珍珠育珠蚌的亲缘关系最近。     

磁珠富集法筛选池蝶蚌微卫星分子标记

通过磁珠富集的方法分离池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)的微卫星分子标记。将池蝶蚌基因组DNA酶切,连接Brown接头,采用PCR技术富集,与探针杂交后杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,再将这些片段洗脱,PCR扩增,克隆构建含有微卫星片段的"基因组文库",所得到的阳性克隆进行测序。从所获得的212个阳性克隆中选取110个进行测序,其中54.5%含有微卫星序列,80%的重复序列重复数在10以上,微卫星序列中21.4%为完美型。除探针中使用的AC、AG等重复单元外,还观察到CT、GA、ATG等重复序列。设计获得60对微卫星引物,合成其中的30对经PCR筛选,结果有10对引物扩增出多态性条带。该实验表明:磁珠富集法是获得池蝶蚌微卫星分子标记的一种有效的方法,同时,制备出的微卫星标记可为今后研究池蝶蚌分子遗传多样性提供有用的遗传标记。     

翘嘴红鲌群体遗传多样性分析

基于RAPD方法对江西(鄱阳湖)、湖北(梁子湖)和江苏(太湖)3个群体的翘嘴红鲌遗传多样性进行分析,以评价它们的群体遗传结构和良种选育的可行性。结果显示从30个随机引物中筛选出了20个多态性较高的引物,既可扩增出3个群体共同的DNA条带,也可扩增出单个群体特有的特征条带。从3个群体实验鱼中共检测到119个扩增片段,长度在0.2~1.7kb之间。鄱阳湖群体多态位点数61个,多态位点比为51.26%,梁子湖群体多态位点数50个,多态位点比为42.02%,太湖群体多态位点数67个,多态位点比为56.30%。3个群体的Shannon多样性指数分别为0.429 2,0.382 8和0.443 1。群体间遗传相似系数依次为:最高是鄱阳湖与梁子湖,为0.8055,其次是鄱阳湖与太湖,为0.801 6,最低是梁子湖与太湖,为0.785 2。结果提示,鄱阳湖与梁子湖亲源关系较近,与太湖稍远;所筛选出的引物应用RAPD技术可以方便地分析不同群体翘嘴红鲌的遗传多样性,并可为良种选育的亲本选择提供依据。     

江西省中华鳖种质状况及养殖方式调查

对江西省中华鳖的主要养殖企业分布、种质情况及养殖模式等进行了调查,结果表明:全省各地均有养殖,有一定规模的养殖企业主要分布于南丰县、黎川县、玉山县、永修县、余干县、进贤县和弋阳县等地;主要的养殖品系有鄱阳湖中华鳖、广东绿卡中华鳖、日本品系中华鳖、黄河中华鳖等;采用的养殖模式主要分为3种:常温养殖模式,控温高产养殖模式和生态化高产养殖模式。测量了不同养殖企业的6个中华鳖养殖类群的13项形态指标,从形态数据方面分析了不同养殖类群的种质。英明养殖类群系黄河中华鳖、日本品系中华鳖和台湾鳖的杂交种;富源养殖类群为鄱阳湖中华鳖,但推测其有广东绿卡中华鳖品系的混杂;进贤养殖类群是鄱阳湖中华鳖、广东绿卡中华鳖、日本品系中华鳖和黄河中华鳖等品系的混杂种;京丰养殖类群、兴初养殖类群和永修养殖类群是鄱阳湖中华鳖,但不排除有其他品系混杂的可能,其种质有待进一步研究。     

四种淡水鱼类前肠的组织学比较研究

对２ 种肉食性鱼与２ 种杂食性鱼前肠组织学进行了比较研究。乌鳢、鲶消化道短而粗,咽齿发达,有胃结构;前肠粘膜褶较低,纹状缘较厚,杯状细胞数目相对较少而大。鳊、鲫鱼消化道细长,没有胃的分化;前肠粘膜褶高,纹状缘薄,杯状细胞数目相对乌鳢、鲶鱼较多。     

繁殖季节日本白鲫(Carassius auratus cuvieri)性腺发育的研究

本文叙述了3～4月间日本白鲫性腺发育的基本情况,着重对各级生殖细胞形态及发育规律进行了观察和研究。发现:日本白鲫卵巢为Ⅳ期卵巢,精巢为Ⅴ期精巢。在同龄鱼中,性腺的成熟度与体重和体长没有明显联系。     

鱼害粘球菌对兴国红鲤和彭泽卿致病性

通过鱼害粘球菌(Myxococcus piscicola)对兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)、彭泽鲫(Carassius auratus var.pengznensis)的攻毒实验，初步确定菌的致死浓度范围。在25℃下，体重为160g左右的兴国红鲤致死浓度数量级为10n，体重为140g左右的彭泽鲫致死浓度数量级为10^8。感染结果表明：兴国红鲤的抗病力强于彭泽鲫；两种鱼死亡特征都表现为细菌性烂鳃病。     

水生生物的同工酶研究进展

介绍了国内外有关同工酶研究的历史及最新研究进展,并对同工酶与水生生物的分类学、个体发育、基因遗传三个方面的关系做了具体阐述。     

池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析

筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。