磁珠富集法筛选池蝶蚌微卫星分子标记

通过磁珠富集的方法分离池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)的微卫星分子标记。将池蝶蚌基因组DNA酶切,连接Brown接头,采用PCR技术富集,与探针杂交后杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,再将这些片段洗脱,PCR扩增,克隆构建含有微卫星片段的"基因组文库",所得到的阳性克隆进行测序。从所获得的212个阳性克隆中选取110个进行测序,其中54.5%含有微卫星序列,80%的重复序列重复数在10以上,微卫星序列中21.4%为完美型。除探针中使用的AC、AG等重复单元外,还观察到CT、GA、ATG等重复序列。设计获得60对微卫星引物,合成其中的30对经PCR筛选,结果有10对引物扩增出多态性条带。该实验表明:磁珠富集法是获得池蝶蚌微卫星分子标记的一种有效的方法,同时,制备出的微卫星标记可为今后研究池蝶蚌分子遗传多样性提供有用的遗传标记。     

江西省中华鳖种质状况及养殖方式调查

对江西省中华鳖的主要养殖企业分布、种质情况及养殖模式等进行了调查,结果表明:全省各地均有养殖,有一定规模的养殖企业主要分布于南丰县、黎川县、玉山县、永修县、余干县、进贤县和弋阳县等地;主要的养殖品系有鄱阳湖中华鳖、广东绿卡中华鳖、日本品系中华鳖、黄河中华鳖等;采用的养殖模式主要分为3种:常温养殖模式,控温高产养殖模式和生态化高产养殖模式。测量了不同养殖企业的6个中华鳖养殖类群的13项形态指标,从形态数据方面分析了不同养殖类群的种质。英明养殖类群系黄河中华鳖、日本品系中华鳖和台湾鳖的杂交种;富源养殖类群为鄱阳湖中华鳖,但推测其有广东绿卡中华鳖品系的混杂;进贤养殖类群是鄱阳湖中华鳖、广东绿卡中华鳖、日本品系中华鳖和黄河中华鳖等品系的混杂种;京丰养殖类群、兴初养殖类群和永修养殖类群是鄱阳湖中华鳖,但不排除有其他品系混杂的可能,其种质有待进一步研究。     

池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)线粒体DNA COII基因的序列分析

用细胞色素氧化酶Ⅱ基因特异性引物,对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行PCR扩增和双向测序,在10个个体中均得到序列一致的细胞色素氧化酶Ⅱ基因序列,长度为681bp;A、T、G、C含量分别为19.4%(132个)、30.4%(207个)、38.9%(265个)和11.3%(77个),A+T含量(58.3%)明显高于G+C(41.7%)含量,与其它淡水珠蚌科种类相同基因片段的碱基含量相似;密码子上4种碱基使用出现偏倚性,密码子第1位上碱基G使用率高达38.8%,碱基T为29.5%;密码子第2位上碱基T的使用率为38.8%,碱基C的使用率低至15.9%;密码子第3位上碱基T的使用率高达48.5%,而碱基C的使用率仅为4%;第3位碱基T的使用率比第二位高,这种递增现象也出现在高等无脊椎动物昆虫的COⅡ上。BLAST结果显示池蝶蚌COⅡ与三角帆蚌具有较高的同源性,相似性为95%,MP法构建的分子系统进化树表明这两种淡水珍珠育珠蚌的亲缘关系最近。     

池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析

筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。     

江西3种红鲤血清转铁蛋白遗传多态性

采用不连续聚丙烯酰胺垂直电泳(PAGE)和不连续十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺垂直电泳(SDS-PAGE)对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤的血清转铁蛋白(Tf)进行研究。PAGE电泳结果表明3种红鲤的Tf图谱具有3条带,荷包红鲤与玻璃红鲤Tf表型由Tfb、Tfc组成,兴国红鲤Tf表型由Tfa、Tfb、Tfc组     

人工选育F5代萍乡肉红鲫RAPD遗传分析

萍乡肉红鲫是分布于江西萍乡的具有地方特色的品种,经过人工选育获得了较为稳定的遗传特征。用经过筛选的23个随机引物对25个人工选育F5代萍乡肉红鲫基因组DNA进行RAPD分子标记。结果显示扩增片段大小在250 bp至2 100 bp,共扩增的条带数为229,差异标记条带大多数为弱带,多态位     

鄱阳湖中华鳖染色体核型、G带和Ag-NORs的分析

以常规方法制备鄱阳湖中华鳖的染色体标本,分析其核型。其核型公式为2n=66=4M+8Sm+16T+38mc,NF=78。用胰酶法制备染色体G-带,绘制了G带模式图。采用了稍加修改的Foresti方法研究鄱阳湖中华鳖染色体的Ag-NORs核型,其Ag-NORs数目主要为2个,多态性主要表现为银染粒的大小和染色的     

鄱阳湖日本沼虾肌肉营养成分分析

分析了经6代选育后的鄱阳湖日本沼虾的肌肉营养成分,结果表明:该虾的出肉率平均为37.6%,肌肉中的蛋白质、脂肪、水分、灰分分别占鲜重的18.5%、1.3%、77.7%、1.3%;含18种氨基酸,总量为766.5 mg/g干重肌肉,其中8种人体必需氨基酸总量为269.4 mg/g干重肌肉。测定了Zn、Fe、Mg等微     

池蝶蚌外套膜的组织学观察

运用组织学方法对池蝶蚌不同部位外套膜进行了研究。结果表明,池蝶蚌外套膜由边缘膜和中央膜组成,边缘膜包括3个突起,分别是生壳突起,感觉突起和缘膜突起。不同部位外套膜的组织结构基本相同,由外表皮、内表皮和结缔组织组成。内表皮细胞间分布有3种类型的分泌细胞,分别是嗜碱     

鄱阳湖区泥鳅的微卫星DNA多态性分析

应用SSR标记技术对鄱阳湖地区的3种不同斑纹泥鳅的遗传差异进行分析.利用6对特异性引物,在3种斑纹泥鳅中共获得67个微卫星位点,其中在大花斑泥鳅中多态性位点为45个,多态性比例为67.16%,小花斑泥鳅的多态性位点为39个,多态性比例为58.21%,无花斑泥鳅多态性位点为15,多态性比例为22.39%.大、小、无3种斑纹泥鳅的平均期望杂合度分别为0.155 4、0.179 9、0.085 7;平均多态信息含量分别0.273 7、0.362 6、0.198 9.分析显示3种花斑泥鳅间的遗传多样性很低,其中无花斑泥鳅尤甚.从Nei的遗传距离得到的系统聚类树状图显示小花斑泥鳅和无小花斑泥鳅先聚在一起,然后再和大花斑泥鳅聚在一起,结果显示小花斑泥鳅和无花斑泥鳅的亲缘关系更近.分析结果对我们正在开展的泥鳅良种选育具有重要的参考价值.