凡纳滨对虾兰尼定受体基因亚克隆文库的构建及部分序列的测定

将一个含有凡纳滨对虾兰尼定受体基因的fosmid克隆用DNA剪切仪进行片段化处理,回收3～5kb之间的DNA片段连接到pUC118HincⅡ/BAP载体上,构建了适合于鸟枪法测序的亚克隆文库.经鉴定,该文库滴度为5.0×104 cfu.mL-1,重组率达到90%,插入片段大小在3～5kb范围内.随机挑取100个阳性克隆进行两端测序,通过拼接得到一条兰尼定受体基因部分片段,该片段长2 550bp.通过比对分析,发现该基因片段推导的氨基酸序列与果蝇兰尼定受体基因有较高的相似性.     

凡纳滨对虾基因组fosmid文库的构建及钙离子通道基因的筛选

本研究构建了凡纳滨对虾的基因组fosmid文库,该文库包含大约1.1×105个克隆,插入片段平均长度大于35 kb.根据和果蝇钙离子通道基因同源的凡纳滨对虾EST序列设计引物,对文库进行了PCR筛选,得到1个阳性克隆,测序结果显示该克隆包含有钙离子通道基因.研究结果为凡纳滨对虾的基因克隆和分子选育等研究奠定了基础.     

近江牡蛎受精细胞学研究

用醋酸──地衣红染色的方法对近江牡蛎人工授精的卵子减数分裂和受精过程进行了详细的细胞学观察．精子入卵前，卵子处于第一次减数分裂的前期（胚泡期），精子入卵后，胚泡消失，然后进行两次减数分裂，在海水温度为２８．８℃的情况下，授精后３３ｍｉｎ和４５ｍｉｎ，绝大部分受精卵已排出第一极体和第二极体，雄原核可在第一极体排出后及第二极体排出前任何时期内形成，雌雄原核以联合的方式将两组染色体合并，授精后１ｈ，大部分卵子完成第一次卵裂．在２５℃和２６℃授精的情况下，观察到了较多的多精入卵的现象．卵子发育的非同步性现象非常明显．     

合浦珠母贝(Pinctada martensii,Dunker)珍珠囊体外预培育的初步研究

０．３％胰蛋白酶液（２５℃）消化外套膜组织的第５～１５ｍｉｎ时间段所收获的细胞产物中，表皮细胞具有最高的纯度和贴壁活性；细胞悬液的体外短期培养过程中小牛血清和珠母贝组织提取物对于细胞在体外的生长和在珠核表面的贴附具有促进作用．     

马氏珠母贝(Pinctada martenssi Dunker)外套膜组织培养基的设计

分析了培养基中的小牛血清、贝血清、水解乳蛋白等几种天然成分和合成培养基ＴＣ１９９对中国马氏珠母贝外套膜组织细胞在体外的生长情况和珍珠质分泌功能的影响，并确定了它们在组成培养基时的适宜含量．其中，贝组织提取物、鸡胚汁对细胞的生长和珍珠质的分泌具有十分重要的作用；５％的小牛血清和１０％的贝血清共同使用对维持细胞形促进细胞生长有很好的作用，但单独使用则有一定的负作用．     

凡纳滨对虾生长性状的微卫星DNA标记分析

利用TUMXLv6．124、TUMXLv8．32、TUMXLv9．145、TUMXLv6．63和TUMXLv7．121c等5个微卫星标记分别对2个凡纳滨对虾群体的基因组DNA进行检测，用SSPS软件分析标记基因型和凡纳滨对虾体重之间的关系．分析结果表明，微卫星位点TUMXLv6．124和凡纳滨对虾的体重显著相关．在该位点中，基因型TUMXLv6．124-AA的个体的体重均值显著高于基因型TUMXLv6．124-AB和TUMXLv6．124-BB．其他4个微卫星标记和凡纳滨对虾的体重关系不显著．     

凡纳滨对虾组织蛋白酶L基因的单核苷酸多态性分析

采用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾40份DNA样本的组织蛋白酶L基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测.经过对测序结果统计分析,共发现SNP 20个,分别是:A150C,T226G,G240A,C429T,T453C,G537A,C597T,C645T,G798C,C831T,C955T,C963T,C977T,C982T,G1001C,A1005T,C1117T,C1132T,G1367A,T1391C.其中6个SNP是外显子中的错义突变,3个SNP是外显子中的同义突变,11个SNP是内含子中的突变.本检测为进一步进行凡纳滨对虾生长性状关联研究提供了有用信息.     

罗氏沼虾遗传多样性的RAPD研究

采用RAPD技术,对20世纪70年代从马来西亚引进的7对罗氏沼虾后代的养殖群体(简称NY)和90年代从新加坡引进的天然群体的F1与养殖群体交配繁殖的后代(简称NX)的遗传多样性进行了研究.用OPM组随机引物对两个群体的基因组DNA进行分析的结果表明,扩增的DNA片段大小在0.1～1.5kb之间.NY群体内的平均遗传相似度(simiIarity,S)为0.8819,NX群体内的平均遗传相似度(5)为0.5857.他们的遗传变异度(variability,V)分别是0.1181和0.4143.NY群体的变异度明显小于NX群体.这可能与NY群体长时期的近亲间或在小群体内繁殖导致种群退化有关.     

中华乌塘鳢染色体核型研究

中华乌塘鳢染色体核型研究沈亦平，王孝举，陈晓汉，马文涛，刘汀，张锡元（武汉大学生命科学学院，武汉，４３００７２）（广西海洋研究所养殖室，北海，５３６０００）关键词中华乌塘鳢，染色体，核型中国法分类号Ｑ９５９．４，Ｑ３４３·２鱼类染色体核型研究是开展鱼...     

凡纳滨对虾亲环素A基因的克隆及表达分析

通过电子克隆所得基因序列设计引物,采用RT-PCR方法首次克隆得到长度为885 bp的凡纳滨对虾亲环素A（Cyclophilins A）CYPA基因cDNA序列,其开放阅读框为35~529 bp,可编码164个氨基酸.推算其分子量约为17.6×103,理论等电点为8.55.与其他物种的CYPA基因比对发现,该基因的氨基酸序列具有较高的保守性.基于氨基酸序列的聚类分析表明,凡纳滨对虾与斑节对虾的亲缘关系最近.荧光定量PCR的结果显示该基因在组织中广谱表达,在抗病组中,胃中的表达量最高,心脏中的表达量最低,差异约为2倍.而在感病组中,该基因在心脏中的表达量最高,肌肉中的表达量最低.利用ProtFun在线预测蛋白质的功能分类,表明CYPA基因可能是一免疫应答抑制因子,参与凡纳滨对虾免疫防御反应.