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正负离子表面活性剂与高聚物混合双水相体系的相行为及蛋白质的分配 总被引:10,自引:0,他引:10
报道了由正负离子表面活性剂与高聚物混合溶液形成的一种可用于蛋白质的分离及分析的新型双水相萃取体系.研究了正负离子表面活性剂(溴化十二烷基三乙铵/十二烷基硫酸钠)分别与葡聚糖和聚乙二醇混合双水相体系的形成规律、相行为及牛血清蛋白和溶菌酶在双水相体系中的分配.通过在高聚物分子中接上亲和配基,研究蛋白质在双水相体系中的亲和分配.结果表明,在该体系中,表面活性剂与高聚物分别富集于不同相中.升高温度及加入无机盐均可促进双水相体系的形成,不同蛋白质可分配于不同的相中.亲和配基的引入极大地增强了蛋白质分配的选择性. 相似文献
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固定化细胞酶法拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸 总被引:3,自引:0,他引:3
利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸. 考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响. 确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0, 反应温度50 ℃及底物浓度500 mmol/L. 10-4 mol/L的Co2+和Mg2+对氨基酰化酶有显著激活作用, Cu2+和Zn2+对酶促反应有明显抑制作用. 在最佳条件下, 氨基酰化酶固定化细胞对N-乙酰-L-3-甲氧基丙氨酸的摩尔转化率达96%. 相似文献
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液/液界面电化学分析在双水相萃取中的应用 总被引:2,自引:1,他引:2
用循环伏安法(CV)研究了聚乙二醇(PEG)-6000/磷酸钾(K2PO4)双水相体系中各种组分对麦迪霉素推动质子在水/硝基苯(W/NB)界面上转移行为的影响,用液/液界面电化学分析技术检测了麦迪霉素在双水相体系中的分配情况,发现了麦迪霉在双水相体系中的选择性分配,其分配系数大于44,测定的线性范围为50~800μg/mL,回收率大于93%, 相似文献
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大孔阴离子树脂DEAE-E/H固定化氨基酰化酶的研究 总被引:6,自引:1,他引:6
以弱碱性大孔阴离子树脂DEAE-E/H为载体固定化氨基酰化酶.通过对影响固定化结果的几个因素,如树脂的离子类型、pH值、温度,以及自由酶液浓度等进行系统研究,得到了适宜的固定化条件:将DEAE-E/H转化为Ac-型;自由酶液浓度120U/ml,pH值6.5;固定化温度为常温.在此条件下制备的固定化氨基酰化酶比酶活可达1200U/g~1500U/g,酶活保留率超过60%.DEAE-E/H作为固定化载体,具有价格低廉,物理性能好,固定化方法简便等特点,具有很好的工业应用前景. 相似文献
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PEG 800-Tween 80-(NH4)2 SO4-H2O双水相萃取紫外分光光度法测定银杏叶中的芦丁 总被引:6,自引:0,他引:6
采用聚乙二醇(PEG800)与吐温80(Tween80)组合表面活性剂、(NH4)2SO4、H2O形成双水相体系,研究芦丁在该双水相体系中的分配行为。用紫外分光光度法测定银杏叶中芦丁的含量。该体系对芦丁的平均萃取率为95.0%,测定芦丁浓度的线性范围为0~50ug/mL,相关系数r=0.9995。用该法对银杏叶中的芦丁进行测定,测定结果的相对标准偏差为3.1%,回收率为96.5%~105.2%。 相似文献
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氨基酰化酶在脲溶液中变性时构象变化速度与失活速度的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
应用了邹氏不可逆抑制动力学的方法,在变性剂存在的条件下,连续监测酶催化的底物反应过程,测定了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中失活的速度常数,并考察了底物的存在对酶失活的保护作用。同时,还比较了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中变性时失活和构象变化的速度。1mol/L,2mol/L脲变性时失活速度常数为为1.62×10~(-2)S~(-1)和2.05×10~(-2)S~(-1),但是酶分子的整体构象尚未发生明显变化。3mol/L脲变性时,失活速度常数为2.56×10~(-2)S~(-1),而变性速度常数为3.72×10~(-3)S~(-1)。失活速度比构象变化速度快大约一个数量级。在4mol/L,5mol/L,6mol/L脲溶液中变性时,酶分子快速失活,而其构象变化速度常数分别为5.27×10~(-3)S~(-1)。5.47×10~(-3)S~(-1),5.56×10~(-3)S~(-1)。可见,在相同浓度的脲溶液中,氨基酰化酶的失活速度明显快于酶分子整体构象变化的速度。上述结果表明,含有辅基金属离子Zn~(2+)的氨基酰化酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有一定的柔性。 相似文献
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双水相萃取结合液相色谱法分离蛋白质 总被引:1,自引:0,他引:1
建立了PEG/( NH4)2SO4双水相体系萃取富集,结合液相色谱分离分析多种蛋白质的方法.考察了无机盐种类和浓度、PEG分子量、pH值和温度等因素对双水相形成以及对细胞色素C、肌红蛋白、牛血清白蛋白、溶菌酶、胰蛋白酶分配行为的影响.结果表明,上述5种蛋白在室温、pH 3.5~9.0范围内,可在15% PEG-4000/10% (NH4)2SO4双水相体系中得到富集,且主要集中在下相.同样条件下,血清中的高丰度蛋白在上下相均有分配,下相分配量较大.通过双水相萃取分离蛋白质及对液相色谱一定时间段的色谱峰收集,可初步实现血清中高丰度蛋白质的分离去除. 相似文献
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利用双水相体系的温度诱导效应萃取甘草酸 总被引:11,自引:0,他引:11
利用双水相分配技术结合温度诱导效应提取甘草酸,研究甘草酸单铵盐在环氧乙烷-环氧丙烷共聚物(EOPO)/混合磷酸钾(KHP)体系中的分配行为,通过实验确定了最佳体系:EOPO L64浓度为28(wt)%,K2HPO4浓度为32(wt)%。甘草酸单铵盐最大总收率达68.4%,为工业上采用双水相技术提取干草酸提供了一种新途径。 相似文献
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利用定量体积排除色谱研究葡聚糖-聚乙二醇双水相系统相分离后上下两相中2种高分子组分的含量、分子量和分子量分布.由定量体积排除色谱法得到的两相组成(即系线端点)与用浊点滴定法得到的浊点曲线几乎完全重合,二者仅在靠近临界点的聚乙二醇富集相有一定偏差.同时,利用体积排除色谱测得两相中葡聚糖和聚乙二醇的分子量和分子量分布.结果表明,由系线端点得到的体系两相共存线与浊点曲线的偏差是由于相分离过程中,不同分子量的高分子组分在两相的非均匀分配造成的.聚乙二醇分子量分布较窄,发生相分离后,在两相的分子量和分子量分布相差不大.而葡聚糖分子量分布较宽,在相分离后两相中的分子量和分子量分布具有较大差异,即葡聚糖组分在葡聚糖富集相中的分子量显著高于其在聚乙二醇富集相中的分子量.随着葡聚糖-聚乙二醇体系初始浓度的增加,两相中葡聚糖的分子量差异变大.定量体积排除色谱可以准确得到高分子双水相系统的相平衡数据及两相中2组分的分子量和分子量分布信息,其结果不仅为深入理解葡聚糖-聚乙二醇-水三元溶液的相平衡提供基础,而且为双水相系统在萃取分离中的应用提供理论指导. 相似文献
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双水相手性萃取拆分扁桃酸外消旋体 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了扁桃酸(MA)对映体在含β-环糊精(β-CD)手性选择剂的聚乙二醇(PEG)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的萃取分配行为.考察了pH、PEG和(NH_4)_2SO_4的质量分数、β-CD的浓度、MA的浓度与萃取温度等因素对拆分效果的影响.实验结果表明:双水相手性萃取具有很强的手性分离能力,β-CD对L-MA对映体的识别能力大于对D-MA对映体的识别能力;当温度为30℃、pH=1.0、PEG2000质量分数为30%、(NH_4)_2SO_4质量分数为20%、β-CD的浓度为0.008 mol/L、扁桃酸的浓度为0.05 mol/L时,分离因子(α)达到2.46,上、下相对映体过剩值(e.e.%)分别为42.13%和40.43%. 相似文献
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用分光度法研究了[Bmim]BF4/(NH4)2SO4双水相体系萃取山楂黄酮和多糖的相行为,考察了同时提取这两种组分时[Bmim]BF4的浓度、(NH4)2SO4的浓度、山楂的用量、超声萃取时间等因素对双水相的上下相体积以及分配系数的影响。结果表明:(1)离子液体浓度的增加,双水相的上、下相体积分别明显增大和减小。但黄酮和多糖在双水相中的分配系数仅有波动,均小于5%;(2)硫酸铵浓度的增加,双水相的上下相体积分别明显减小和增大。同时黄酮和多糖的分配系数均有较明显先降低后升高的趋势;(3)山楂质量的增减,不影响双水相的形成,但存在一个实验条件下的溶出饱和值,该值为0.15g,此时黄酮和多糖的分配系数最大;(4)超声萃取时间的延长或缩短,同样不影响双水相的形成,但存在对山楂有效成分达到饱和溶出的阈值,对于黄酮为25min,多糖为20min。 相似文献