微透析联用反相高效液相色谱对大鼠皮肤葛根素的药代动力学研究

采用在体微透析取样技术联用RP-HPLC的方法对大鼠皮肤中的葛根素进行了体内药代动力学的考察.将微透析探针进行体内外校正后,植入大鼠皮下,以磷酸盐缓冲溶液作为灌流液,收集的样品在以Hypersil-C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)为色谱柱,流动相为V(甲醇)∶ V(0.1% 醋酸)＝30∶ 70,流速1 mL/min,检测波长221 nm的HPLC色谱条件下进行分析,所得的大鼠皮下游离葛根素浓度用Kinetica软件进行处理.结果显示:微透析探针体内外校正结果显示葛根素适宜应用微透析技术,在所建立的HPLC条件下葛根素在0.1～100 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9999, n=6),浓度为100、10和0.1 mg/L的葛根素日内RSD分别为0.38%、0.80%和1.21%(n=6);日间RSD分别为0.44%、0.73%和1.68%(n=6),所得数据经Kinetica软件拟合后,得到大鼠皮下非结合葛根素药-时曲线和主要药动学参数.所建立的微透析联用RP-HPLC方法能够在体、实时监测大鼠皮下葛根素浓度.     

高效液相色谱法测定抗癌原料药芳香异羟肟酸二丁基锡

建立了反相高效液相色谱法测定有机金属抗癌原料药芳香异羟肟酸二丁基锡. 色谱条件: Diamonsil ODS 色谱柱 (4.6 mm i.d.×200 mm, 5 μm), 以V(甲醇)∶V(水)＝35∶65, pH 2.5为流动相, 流速为1.0 mL/min, 紫外检测波长232 nm, 柱温25 ℃. 吲达帕安为内标测定芳香异羟肟酸二丁基锡. 结果表明: 线性范围为4.08～102 μg/mL, 回归方程为f=0.02253ρ-0.005843, r=0.9998 (n=7), 方法精密度RSD为0.89% (n=6), 稳定性的RSD为0.56% (n=9), 重复性的RSD为0.90% (n=9), 平均回收率为100.5% (n=9, RSD=1.1%). 方法可用来测定芳香异羟肟酸二丁基锡.     

高效液相色谱共振瑞利散射联用方法检测大鼠血清中的西索米星

用高效液相色谱与共振瑞利散射方法联用对西索米星进行检测.采用滂胺天蓝(PSB)作为分子识别探针,C18反相色谱柱进行分离.流动相为含0.22％三氟乙酸的20 mmol/L醋酸钠和甲醇(92:8,V/V),流速为0.5 mL/min.柱后探针溶液流速为0.1 mL/min.共振瑞利散射(RRS)检测波长设为λex=λem...     

高效液相色谱法测定贯叶连翘中的4种成分

本文利用高效液相色谱法同时测定中药贯叶连翘中绿原酸、芦丁、金丝桃苷和槲皮素四种成分的含量。采用Tiahhe Kromasil C18 100 A(5μm,250mm×4.6 mm)反相色谱柱;流动相为V(乙腈)∶V(水)=20∶80(含0.02%三氟乙酸);紫外检测波长270nm;流速1.0 ml/min;柱温40℃。绿原酸、芦丁、金丝桃苷和槲皮素线性范围分别为3.4~34μg.mL-1(r=0.9993),1.8~18μg.mL-1(r=0.9998),2.3~23μg.mL-1(r=0.9999),3.5~35μg.mL-1(r=0.9991),平均回收率(n=5)分别为98.4%(RSD=1.48%),101.8%(RSD=0.74%),103.7%(RSD=0.77%),103.5%(RSD=1.28%)。方法线性范围宽、相对标准偏差低、精密度高、重现性好,应用于贯叶连翘及制剂样品的测定,结果令人满意。     

超高效合相色谱法测定盐酸兰地洛尔中立体异构体的含量

建立了一种超高效合相色谱法( Ultra performance convergence chromatography,UPC2)分离和测定盐酸兰地洛尔中立体异构体的方法。本方法选用Daicel CHIRALPAK? IF手性色谱柱(150 mm ×4.6 mm,3μm),以CO2为流动相,甲醇-正丁醇-乙腈(1：1：1, V/V)+0.5％氨水为助溶剂,梯度洗脱,流速为2.8 mL/min,检测波长为223 nm。在建立的UPC2条件下,盐酸兰地洛尔的R,R-异构体、R,S-异构体和S,R-异构体的检出限分别为0.3、0.4和0.3 mg/L;线性范围分别为2~300 mg/L、5~300 mg/L和2~300 mg/L;加标回收率分别为103.4％,91.8％和101.7％;进样精密度分别为0.06％,0.09％和0.08％(n=6)。本方法能够满足盐酸兰地洛尔样品中3个立体异构体检查的相关要求。     

高效液相色谱法测定磷霉素关键中间体丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸

建立了高效液相色谱同时测定磷霉素关键中间体丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸的方法。采用Agilent ZORBAX NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为V(25 mmol/L KH2PO4):V(乙腈)=70:30,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长200 nm。丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸质量浓度在25~1000 mg/L范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9996和0.9998,检出限分别为13.4μg/g和6.3μg/g,定量限分别为44.3μg/g和20.8μg/g,精密度(RSD,n=6)分别为0.91%和0.26%,稳定性(RSD,n=6)分别为0.87%和0.64%,平均加标回收率为92%~97%,相对标准偏差(n=6)小于3%。方法适用于磷霉素合成反应中丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸的含量测定。     

加压毛细管电色谱分离检测升麻中阿魏酸与异阿魏酸

采用反相加压毛细管电色谱技术,建立了阿魏酸与异阿魏酸分离分析方法。采用EP-100-20/45-3-C18色谱柱,流动相为20 mmol/L Na H2PO4(p H 7)-乙腈(80∶20,V/V),泵流速为35μL/min,分离电压-3 k V,检测波长为320 nm。阿魏酸与异阿魏酸在9 min内实现快速分离,峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于3%,检出限分别为11.49和10.98μg/L。方法可用于升麻中两种主要有效成分的检测。     

液质联用分析叶下珠中的槲皮素及其甙

应用高效液相色谱和电喷雾质谱联用技术定性、定量分析叶下珠中所含的黄酮类化合物.色谱条件:Lichrospher C18柱,5μm,4.6×200mm;流动相:甲醇-1%甲酸水溶液(0～25 min,38:62;25～30 min,75:25;30～35 min,38:62);流速:0.8 mL/min;检测波长:254 nm;质谱条件:电喷雾电离源(ESI),负离子检测;脱溶剂气为N2;毛细管电压2.3 kV,锥孔电压40 V.在叶下珠中检测到槲皮素、槲皮甙;定量分析标准曲线线性回归方程Y=8.14e×106 X-5.57×104,r=0.9995,在0.0508～1.016μg范围内呈良好的线性关系;精密度RSD=0.61%(n=5),重复性RSD=0.68%(n=5).此方法能对叶下珠中的黄酮类化合物进行定性、定量,是一种简便有效的检测方法.     

高聚物型色谱柱分离乙酰半胱氨酸及其有关物质

考察高聚物型色谱柱(聚苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)麦科菲反相高效液相色谱柱,MKF-RP-MH)分离乙酰半胱氨酸以及有关物质的适用性。采用MKF-RP-MH色谱柱(4.6×250 mm,5μm),V(0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液(pH 3.0))∶V(乙腈)=9∶1为流动相,流速为1 mL/min,检测波长210 nm,柱温为25℃。乙酰半胱氨酸峰与有关物质峰的分离度均大于1.5;乙酰半胱氨酸质量浓度在11~111 mg/L的范围内,具有良好的线性关系,回归方程为A=18.195ρ+0.5229,r=0.9995(n=8);乙酰半胱氨酸的定量限为11 mg/L;最低检测限为0.035μg;进样精密度RSD=0.24%(n=6)。     

HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量

建立了浓缩当归丸中阿魏酸的HPLC测定方法.采用C18色谱柱(TSK-GEL,4.6×150 mm,5μm),以甲醇-水-磷酸(30∶70∶0.3,V/V/V)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长320 nm.结果阿魏酸在0.006~0.15μg范围内线性关系良好,r为0.9999,平均加样回收率为96.91%.本方法可用于浓缩当归丸中阿魏酸的含量监控.     

反相高效液相色谱法测定川芎饮片、实验大鼠血清和脑匀浆中的阿魏酸

 用反相高效液相色谱法测定了川芎饮片、实验大鼠血清和脑匀浆中的阿魏酸。分离柱为Nova Pak C18(3 9mmi.d .× 15 0mm) ,流动相为甲醇 水 乙酸 (体积比为 35∶6 5∶0 5 ) ,在 32 0nm波长下检测 ,用外标法定量。阿魏酸在 0 85mg/L～ 4 0 0mg/L范围内有良好的线性关系 ,线性相关系数为0 9990 4。阿魏酸的加标回收率为 95 %～ 10 2 %。     

固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定海水中软骨藻酸

软骨藻酸(domoic acid, DA)是一种由海洋硅藻产生的生物毒素,具有强烈的神经毒性,近海水环境中的DA严重威胁海洋渔业生物和人类健康,因此对近海水环境中的DA进行有效监测至关重要。该文基于固相萃取-液相色谱-串联质谱联用技术(SPE-LC-MS/MS),建立了适用于海水中痕量、超痕量DA的检测方法。针对近海水生环境中DA浓度相对较高的情况下,采用在线SPE-LC-MS/MS检测模式,可减少前处理过程,提高样品的分析效率。离线SPE结合在线SPE-LC-MS/MS可实现大洋和极地海水中含量更低的DA的检测。通过对在线固相萃取条件和液相色谱、质谱条件的优化,海水样品经过滤和酸化简单处理后直接进样0.6 mL进行在线SPE-LC-MS/MS检测,DA在10.0~500.0 ng/L范围内线性关系良好(线性相关系数R²=0.9992),检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为4.0和10.0 ng/L,并且具有较好的方法回收率(≥81.0%)和精密度(RSD≤4.2%),表明方法可用于近海海水中痕量DA的检测。通过对离线固相萃取柱的选择和酸化条件的优化,80.0 mL海水样品经离线HLB固相萃取柱富集后,进行在线SPE-LC-MS/MS检测,DA在0.3~50.0 ng/L范围内线性关系良好(R²=0.9990),回收率(≥69.2%)和精密度(RSD≤4.4%)较好,LOD和LOQ分别为0.1和0.3 ng/L,说明方法的灵敏度较直接进样法大幅提升,实现了海水中超痕量DA的准确测定。这两种检测方法操作简单,样品用量小,灵敏度高,可满足近海养殖区及远岸海水中DA监测的要求。     

高效液相色谱-离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠

建立了中毒应急检测样品生物体液内痕量敌鼠和氯敌鼠的高效液相色谱-离子阱质谱定性定量检测方法。全血样品由甲醇/乙腈(50/50, v/v)沉淀蛋白后再经Oasis HLB固相萃取小柱净化富集,尿液样品直接经同类小柱净化富集。采用Extend C18柱分离,以乙酸铵-乙酸(0.02 mol/L, pH 5.5)缓冲溶液和甲醇(15/85, v/v)溶液为流动相,使用电喷雾电离负离子多反应监测模式检测敌鼠和氯敌鼠。对全血样品,敌鼠和氯敌鼠分别在1.0～200.0 μg/L和0.5～100.0 μg/L范围内呈良好的线性关系,回收率分别在90.1%～92.2%和87.6%～93.4%范围内,日内相对标准偏差(RSD)分别小于6.8%和7.1%,日间RSD分别小于9.9%和10.9%,定量限分别为1.0 μg/L和0.5 μg/L。对尿液样品,敌鼠和氯敌鼠分别在0.2～ 40.0 μg/L和0.1～20.0 μg/L范围内呈良好的线性关系,回收率分别在90.1%～94.5%和90.0%～ 98.0%范围内,日内RSD分别小于6.1%和7.3%,日间RSD分别小于8.9%和11.2%,定量限分别为0.2 μg/L和0.1 μg/L。本方法简便、灵敏,能满足敌鼠和氯敌鼠中毒病人的临床快速诊断要求。     

高效毛细管电泳大体积样品堆积在线富集法测定蒲公英中阿魏酸、绿原酸和咖啡酸

采用大体积样品堆积(LVSS)在线富集模式,建立了高效毛细管电泳(HPCE)测定蒲公英中阿魏酸、绿原酸和咖啡酸含量的方法。主要考察了在毛细管区带电泳(CZE)分离模式下,缓冲液的pH和浓度对分离效果的影响,以及在LVSS在线富集模式下,进样时间对富集效果的影响。在最优条件下阿魏酸、绿原酸和咖啡酸可在12 min内得到分离,3个成分在0.5~25.0μg/mL浓度范围内均有较好的线性关系(r2=0.999),平均加样回收率分别为104.9%,98.0%和100.1%,RSD(n=6)分别为3.6%,2.6%和1.0%。定量限(S/N=10)分别为0.10,0.10和0.03μg/mL,检出限(S/N=3)分别为0.03,0.03和0.01μg/mL。相对于常规CZE模式,本方法的富集效果倍数为17~19倍。建立的方法可用于蒲公英的日常检测与质量控制。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定浓缩果汁中的18种多酚物质

建立了浓缩果汁中18种多酚物质的超高效液相色谱(UPLC)-串联质谱(MS/MS)检测方法.样品经水稀释,HLB固相萃取净化,浓缩蒸干后用甲醇和0.1%甲酸定容.采用Acquity UPLC BEH C18 (1.7μm ×2.1 mm ×50 mm)色谱柱分离,以甲醇和0.1%甲酸为流动相,在0.3 ml,·min-...     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定发酵液中喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定发酵液中喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷含量的方法。发酵液经高速离心、水溶液稀释、微孔过滤后进行HPLC-MS/MS分析测定。选用Waters Atlantis^® T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 5 μm)及其保护柱(5 mm×2.1 mm, 5 μm)进行分离,选择10 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.02%甲酸)溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为25 ℃,进样量为10 μL。在电喷雾电离、正离子模式下收集数据,对目标化合物进行定性定量分析。喷司他丁定量离子对为m/z 269.17>153.20,碰撞能为11 V, 2'-氨基-2'-脱氧腺苷定量离子对为m/z 267.00>136.10,碰撞能为18 V。采用外标法对喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷定量分析。结果表明,喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷在1.0~250 μg/L范围内呈现出良好的线性关系,相关系数(R²)为0.9969~0.9996,相对标准偏差(RSD)为6.51%~8.35%(n=8)。在发酵液样品中进行加标水平为1.0、5.0和25 μg/L的添加回收试验(n=6),喷司他丁的回收率为97.94%~104.46%, RSD为3.74%~4.88%; 2'-氨基-2'-脱氧腺苷回收率为89.96%~107.21%, RSD为4.81%~13.29%。喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷的检出限为0.003~0.060 μg/L,定量限为0.010~0.200 μg/L。该文系统性地建立了基于HPLC-MS/MS测定发酵液中喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷的方法,在实际样品检测中,操作简便,准确度高,灵敏快速,有效克服了基质效应对目标化合物的影响,改善了目标化合物的峰形和稳定性,为从微生物发酵液中检测喷司他丁和2'-氨基-2'-脱氧腺苷提供了方法学基础和借鉴。     

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定食品中34种非法添加减肥类化合物

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定食品(含保健食品)中34种减肥类非法添加化合物的方法。采用Waters CORTECS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm),以0.1%(v/v)甲酸水溶液-含0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,在电喷雾离子源、正离子或负离子模式下以多反应监测(MRM)方式检测。西布曲明等29种化合物在0.5~10μg/L范围内、氯噻嗪等5种化合物在2.5~50μg/L范围内均呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.99;西布曲明等29种化合物在5、10和20μg/kg添加水平下的平均加标回收率为49.2%~136.2%,相对标准偏差(RSD)为0.7%~15.0%(n=6),氯噻嗪等5种化合物在25、50和100μg/kg添加水平下的平均加标回收率为51.5%~130.9%,RSD为0.8%~14.0%(n=6);西布曲明等29种化合物的检出限为5μg/kg,定量限为10μg/kg,氯噻嗪等5种化合物的检出限为25μg/kg,定量限为50μg/kg。本方法已应用于实际样品的测定,共检出了12种化合物,有效打击了非法添加行为。     

在线扫集-胶束毛细管电动色谱法测定扛板归中的阿魏酸、咖啡酸和原儿茶酸

采用在线扫集-胶束毛细管电动色谱法(sweeping-MEKC)分离测定扛板归中的阿魏酸、咖啡酸和原儿茶酸。采用未涂层熔融石英毛细管(50 cm×50μm,有效柱长36 cm);环境温度25℃;缓冲体系为20 mmol/L NaH2PO4-80mmol/L十二烷基磺酸钠(SDS)-12.5%乙腈(V/V)(pH 2.20),紫外检测波长为216 nm,运行分离电压-20 kV,进样时间100 s。在优化条件下,3种有机酸均在20 min内出峰,峰面积RSD均小于5%。检出限分别达到98.52,118.73和27.27μg/L。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡蛋中头孢噻肟及其主要代谢物残留

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定鸡蛋中头孢噻肟及其代谢物去乙酰头孢噻肟残留量的检测方法.样品经乙腈-水(9∶1, V/V)提取,正己烷除脂,C18固相分散萃取除杂,Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(100 mm×2.1 mm, 3.5 μm)分离,以0.2%(V/V)甲酸-乙腈为流动相,进行梯度洗脱,目标物采用电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配标准溶液外标法定量.结果表明,头孢噻肟和去乙酰头孢噻肟分别在1.0~143.0 μg/L和1.0~120.0 μg/L浓度范围内线性关系良好(R.2>0.999).方法检出限(LOD, S/N=3)分别为0.07和0.14 μg/kg,定量限(LOQ, S/N=10)分别为0.23和0.99 μg/kg. 在5.0、50.0和100.0 μg/kg 3个添加水平下,头孢噻肟和去乙酰头孢噻肟的回收率分别为83.1%~103.0%和88.2%~101.0%,相对标准偏差(RSD, n=6)均介于2.0%~6.2%.实际样品测定结果表明,本方法简便、快速、灵敏、准确, 可用于鸡蛋中头孢噻肟及去乙酰头孢噻肟的残留分析检测.     

UPLC - ESI MS/MS法测定动物饲料中苯二氮卓类药物

建立了超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(UPLC - ESI MS/MS)同时检测动物饲料中地西泮、奥沙西泮、硝西泮、三唑仑、艾司唑仑和咪达唑仑6种苯二氮卓类药物的方法.饲料样品采用碱性叔丁基甲醚提取,Oasis MCX固相萃取柱净化,反相色谱柱分离,以0.1％甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱,正离子模式扫描,多反应监测模...