柱前衍生法在氨基酸分析测定中的应用

介绍了目前柱前衍生法分析氨基酸常用的几类衍生试剂及相应的衍生方法,并且比较了各类柱前衍生试剂的优缺点,对近期氨基酸分离分析中的色谱检测方法做了系统综述。     

柱后衍生-高效液相色谱法测定烟草中游离氨基酸

建立了柱后衍生-高效液相色谱法分离检测烟草中19种游离氨基酸的方法。样品经0.005 mol/L的盐酸超声提取,高效锂阳离子交换柱分离后,采用OPA柱后衍生,荧光检测器检测。各氨基酸在样品含量范围内呈良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.999,在烤烟中的加标回收率为87.73%～100.02%,相对标准偏差在2.7%～6.0%之间,检出限0.13～2.00μmol/L。方法可用于烟草中游离氨基酸的分析。     

反相高效液相色谱测定敦煌壁画胶结材料中氨基酸

用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生，反相高效液相色谱法测定了敦煌壁画中15种氨基酸成份，采用Watersodsc18柱分离，PH=6.5的醋酸钠缓冲溶液和甲醇二元梯度洗脱，荧光检测，24min内15种氨基酸标准样品达到分离，待测样品中氨基酸也有很好的分离效果。     

AcQ·Tag~(TM)法测定鱼粉水解液中的氨基酸

１前言鱼粉是动物性蛋白质饲料,过去鱼粉中氨基酸测定大多采用氨基酸分析仪以离子交换树酯分离,柱后衍生测定。但氨基酸分析仪价格昂贵,分析时间长。近年来,柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸的技术因其具有衍生步骤简单,速度快,剩余试剂不干扰测定等优点,而有逐渐...     

高效液相色谱—激光诱导荧光—增强型电荷耦合器件检测 …

以３－对羧基苯甲酰喹啉－２－甲醛为检测痕量氨基酸的柱前衍生试剂,利用高效液相色谱－激光诱导荧光－增强型电荷耦合器件检测器系统,考究了氨基酸衍生和ＨＰＬＣ分离过程中多种因素的影响,建立了ＨＰＬＣ－ＬＩＦ－ＩＣＣＤ分离检测痕量氨基酸的新方法,并应用于鼠脑微透析液的氨基酸检测。     

氨基酸衍生物在毛细管区带电泳下的分离研究

采用新合成的荧光试剂咔唑-9-乙基氯甲酸酯作为柱前衍生试剂,利用毛细管区带电泳法对衍生氨基酸进行分离,考察了该试剂用于毛细管区带电泳法进行氨基酸分离的关键条件,实现了12种氨基酸的快速基线分离.     

氨基酸的咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生高效液相色谱分析

采用一种新型氯甲酸酯类荧光衍生试剂咔唑－9－乙基氯甲酸酯（CEOC）对氨基酸进行柱前衍生，并通过荧光检测的方法进行高效液相色谱（HPLC）分析；在Hypersil BDS C18柱上对19种氨基酸衍生物进行了分离，衍生物的激发和发射波长分别为λex=293nm,λem=365nm,当衍生化缓冲液pH为9．0，衍生试剂总量（摩尔数）为氨基酸总量的4倍时，衍生化产率最大，平均检出限可达22．8fmol。     

OPA柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸含量

建立了邻苯二甲醛（ＯＰＡ）手动柱前衍生反相高效液相色谱法测定样品中氨基酸含量的方法。以邻苯二甲醛（ＯＰＡ）／３－巯基丙酸（３－ＭＰＡ）为衍生试剂进行衍生,ＯＤＳ柱分离,３４０ｎｍ检测,在４０ｍｉｎ内１８种氨基酸全部得到基线分离。测定牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的氨基酸组成和小鼠血清中的游离氨基酸,取得满意的结果。     

高效液相色谱-激光诱导荧光-增强型电荷耦合器件检测氨基酸的研究

以3-对羟基苯甲酰喹啉-2-甲醛(CBQCA)为检测痕量氨基酸的柱前衍生试剂,利用高效液相色谱-激光诱导荧光-增强型电荷耦合器件检测器(HPLC-LIF-ICCD)系统,考察了氨基酸衍生和HPLC分离过程中多种因素的影响,建立了HPLC-LIF-ICCD分离检测痕量氨基酸的新方法,并应用于鼠脑微透析液的氨基酸检测.当信噪比为3时,对甘氨酸的质量检出限为5fmol.     

高效液相色谱-串联质谱法测定人体内30种氨基酸

建立了以12种同位素标记氨基酸做内标,采用衍生化方法,LC-MS/MS采用MRM方式同时定量30种氨基酸的检测方法。生物样本加入含有同位素内标的甲醇溶液,沉淀蛋白后氮气吹干加入衍生试剂,样本氨基酸与同位素氨基酸内标同步衍生,减小实验误差。选用TC-C18色谱柱,以水-乙腈(均含有0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,30种氨基酸及其中的同分异构体都能基线分离。选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。本方法用于实时监测恶性血液病患者血浆氨基酸谱的变化,可以直接反映机体的代谢及营养状况,对患者的移植成功率及改善移植后患者的生存质量均有重要意义。     

2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯柱前衍生化用于氨基酸的高效液相色谱分析

利用新型荧光试剂2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)作为柱前衍生化试剂,在HypersilBDS C18(200mm×4.6mm,5μm)反相色谱柱上,采用梯度洗脱对20种氨基酸衍生物进行了分离检测。在乙腈与Na2B4O7缓冲液中,室温下BCEC-Cl与氨基酸反应5min可实现完全衍生。检测的激发和发射波长分别为λex=279nm,λem=380nm。采用柱后质谱电喷雾离子源(ESI source)正离子模式,实现了水解牛血清白蛋白中氨基酸和油菜蜂花粉中氨基酸的定性定量检测。荧光定性检测的线性回归系数均大于0.9990,检出限为1.49~19.74fmol(S/N=3)。     

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定水牛角中氨基酸的含量

以邻苯二甲醛和β－巯基乙醇为衍生化试剂,柱前衍生,ＯＤＳ（Ｃ１８）柱分离;ＰＨ５．６醋酸盐缓冲溶液、甲醇二元梯度洗脱,荧光检测,在３２ｍｉｎ内分离测定了水牛角中１２种氨基酸的含量。在一定浓度范围人,氨基酸的峰面积与其浓度呈现良好的线性关系,相关系数在０．９９７５～０．９９９４之间。对于１２种氨基酸,标准加入回收率在９４％～１０６％之间。     

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定珍珠母中氨基酸

以邻苯二甲醛和β－巯基乙醇为衍生化试剂,柱前衍生,ＯＤＳ（Ｃ１８）柱分离,ｐＨ５．６乙酸盐缓冲液、甲醇二元梯度洗脱,荧光检测,在３２ｍｉｎ内分离测定了珍珠母中８种氨基酸的含量。在一定浓度范围内,氨基酸的峰面积与其浓度呈良好的线性关系,相关系数在０．９９８４～０．９９９４之间。对于８种氨基酸,标准加入回收率在９５％～１０５％之间。     

高效液相色谱法（硝基氟苯柱前衍生化和紫外吸收）测定猪血蛋白氨基酸组成

目前所采用的氨基酸分析法,在柱前或柱后衍生化后,大多数都用价格昂贵的荧光检测器进行测定。近年来已有人采用一些新的衍生化试剂和方法,改用紫外吸收直接测定,取得了很大成功。我们采用1-氟-2,4-二硝基苯(FDNB)柱前     

土壤中氨基酸分析方法的研究进展

本文对土壤中氨基酸的分析方法做了较详细的评述,并针对土壤氨基酸的特点,就土壤样品的前处理(主要包括水解和纯化)及目前常用的色谱分离分析方法进行了总结(主要包括柱后衍生阳离子交换色谱、气相色谱、柱前衍生反相高效液相色谱、阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测等方法)。     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定不同方法煮制的猪肉及其汤汁中的游离氨基酸

建立了反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离检测用不同方法煮制的猪肉及其汤汁中17种游离氨基酸的方法.样品经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生后,采用Nova- PakTMC18色谱柱分离,以AccQ·Tag Eluent A稀释液、乙腈和超纯水为流动相,梯度洗脱,检测波长为248 nm,在4...     

Fmoc柱前衍生法用于高效反相色谱测定氨基酸

HPLC测定氨基酸,目前最为普及的衍生方法是邻苯二甲醛柱前衍生法,此方法最大的缺点是测不出具有亚胺基的氨基酸,如脯氨酸。 氯甲酸芴甲酯(9-芴甲氧羰酰Fmoc-Cl)是近年来用于多肽合成的新型氨基保护剂,它可以和全部氨基酸反应并生成荧光化合物,因此有可能做为分析全部氨基酸的荧光衍生剂。本文报告了以Fmoc-Cl对氨基酸做柱前衍生及反相色谱分离条件,并定量地测定了水解多肽中全部氨基酸的残基数。     

新型紫外衍生试剂用于D-氨基酸的毛细管电泳分离

采用一种新型紫外衍生试剂对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)作为柱前衍生试剂,成功地对19种标准D-氨基酸和甘氨酸进行了衍生和毛细管电泳分离。详细研究了各种分离条件对毛细管电泳分离的影响。实验结果表明:采用20 mmol/L硼砂(pH 9.3),126 mmol/L十二烷基硫酸钠,8 mmol/Lβ-环糊精和20mmol/L NaC l时分离结果最佳,16 m in内实现了20种氨基酸的基线分离。     

微流控芯片毛细管电泳柱后衍生激光诱导荧光检测氨基酸

建立了微流控芯片毛细管柱后扩散衍生激光诱导荧光检测氨基酸的方法。利用微流控芯片的二维平面结构特征,在分离通道末端增加支通道,通过扩散法引入柱后衍生试剂,避免了电压引入法对分离通道流型的影响,因而提高了分离效率。考察了支通道长度、衍生试剂液面高度、检测点位置对衍生结果的最优条件,考察了衍生试剂引入方法、催化剂种类、缓冲溶液种类对检测结果的影响。用20 mmol/L硼砂-NaOH(pH=10)溶液作为电泳缓冲溶液,与柱后衍生试剂1.0 mmol/L NDA+8.0 mmol/L 2-ME+35 mmol/L硼砂(pH 10.0)的30%(V/V)甲醇溶液反应,精氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸在不加任何添加剂的情况下可达到基线分离。本法用于板蓝根药材中主要游离氨基酸的分离检测,相对标准偏差小于4.4%(n=5),回收率为92.3%~98.6%。所测板蓝根药材中精氨酸和脯氨酸含量分别为14.97,8.02 mg/g。     

柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸

建立了一种6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生,超高效液相色谱(UPLC)对酱油中18种氨基酸进行快速分离检测的方法。采用BEH C18色谱柱分离,在260 nm波长下检测,以乙酸铵-乙酸-乙腈-水和乙腈-乙酸为流动相,将流动相梯度和流速梯度相结合,在12 min内实现了18种氨基酸衍生物的分离。方法的线性回归系数(r2)均大于0.999,检出限为0.032～0.12 mg/L,日间相对标准偏差(RSD)为0.72%～4.05%,在酱油中18种氨基酸的加标回收率为90.2%～103.7%。该方法前处理过程简单,分离时间短,是检测酱油中氨基酸的有效手段,可用于酱油的质量评定。