高效疏水作用色谱分离生物活性蛋白

疏水作用色谱(Hydrophobic Interaction Chromatography,HIC)是Hjertetn首先命名的一类色谱,它以盐溶液为流动相,弱疏水性质的材料为固定相,主要的分离对象是蛋白质。但是,Hjerte'n所记叙的疏水色谱是一种以琼脂糖为支持物的软胶。近年来,随着高效液相色谱技术在生物学和医学中的应用日益发展,寻找多种性能的分离生物活性分子的高效色谱技术的研究十分活跃,这其中的一个重要的方面就是高效疏水作用色谱(HP-HIC)。     

多肽色谱分离后的柱后荧光衍生检测

高效液相色谱现在已成为多肽分离分析中分辨率最高的手段。色谱流出液中多肽的检测,目前最常用的是利用远紫外区的光吸收测定(205-220nm)。紫外吸收测定法简便易行,对样品没有破坏作用,但对移动相有严格的要求。使得在生物活性蛋白分离中所常用的一些缓冲液系统都难以应用。     

反相高效色谱邻苯二甲醛柱前衍生法对多肽氨基酸组成的定量分析

迄今为止所得的初步结果表明,高效液相色谱不仅对于分析生理性体液中的氨基酸浓度是可行的,而且有可能用在多肽结构中的氨基酸残基数进行定量分析。我们从研究调控细胞分化的生物活性肽的结构和功能关系的课题出发,建立了这一方法。     

Fmoc柱前衍生法用于高效反相色谱测定氨基酸

HPLC测定氨基酸,目前最为普及的衍生方法是邻苯二甲醛柱前衍生法,此方法最大的缺点是测不出具有亚胺基的氨基酸,如脯氨酸。 氯甲酸芴甲酯(9-芴甲氧羰酰Fmoc-Cl)是近年来用于多肽合成的新型氨基保护剂,它可以和全部氨基酸反应并生成荧光化合物,因此有可能做为分析全部氨基酸的荧光衍生剂。本文报告了以Fmoc-Cl对氨基酸做柱前衍生及反相色谱分离条件,并定量地测定了水解多肽中全部氨基酸的残基数。