生物工程下游处理中的液相色谱

生物工程的最终目的是要制造出能为人类所利用的产品。这种产品将主要是蛋白质或多肽,这种产品往往应具有极高的纯度,特别是当把它们做为医药制品时。因此目前普遍认为,在生物工程的研究成果转化成为有商品价值的产品的过程中,其下游处理(即对原核或真核细胞产物的分离纯化过程)的花费将在全部生产成本中占有最主要的份额。     

电泳的原理、应用及进展（下）

三、核酸电泳 核酸(包括DNA和RNA)是一类带负电荷的生物大分子,在电场作用下可由负极向正极移动,因此可用电泳的方法进行分离、鉴定和纯化。核酸电泳根据所用凝胶介质的不同可以分两类,即琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖电泳几乎都在水平板上进行,操作简单,快速有效;聚丙烯酰胺电泳多在垂直板中进行,主要用于某些特殊需要,如DNA序列分析电泳、寡核苷酸的分离鉴定。根据外加电场的不同,核酸电泳又分为恒定电场的常规电泳和脉冲场电泳。     

高效疏水作用色谱分离生物活性蛋白

疏水作用色谱(Hydrophobic Interaction Chromatography,HIC)是Hjertetn首先命名的一类色谱,它以盐溶液为流动相,弱疏水性质的材料为固定相,主要的分离对象是蛋白质。但是,Hjerte'n所记叙的疏水色谱是一种以琼脂糖为支持物的软胶。近年来,随着高效液相色谱技术在生物学和医学中的应用日益发展,寻找多种性能的分离生物活性分子的高效色谱技术的研究十分活跃,这其中的一个重要的方面就是高效疏水作用色谱(HP-HIC)。     

毛细管阵列电泳与规模化DNA测序

 根据 10 0 80份基因组DNA测序的结果 ,讨论了毛细管阵列电泳测序方法的技术特点 ,并对影响测序结果的一些因素进行了分析。在此基础上与平板凝胶电泳方法进行比较 ,显示了毛细管阵列电泳的优点。同时也对大规模测序技术环节之间的协调进行了探讨 。     

Structure Analysis of Streptococcal Protein G Fc Binding Domain

The gene fragment (191 bp) encoding protein G IgG Fc binding domain was isolated by PCR from group G streptococcus (CMCC32138), and a clone containing this gene fragment was found to give fine reactivity to human IgG when expressed in Escherichia coli. The complete nucleotide sequence of the gene fragment was determined. One base pair differs from previously reported protein Gnucleotide sequences, and resultsin an amino acid change (Ala-Thr), but this variation makes no difference in binding to the IgG Fc part by ELISA.The secondary structure of the protein G IgG Fc binding domain has been estimated by circular dichroism and assigned by computer algorithm.It shows a typical α-helix region in this domain.By breaking this α-helix region with recombinant DNA techniques, a 44 peptide, which contained the N-terminal 27 amino acid residues of this domain, was expressed in E. coli and showed no reactivity to IgG.The hydropathicity of this domain was also analyzed and compared with that of protein A relevant     

Engineered Bacterial Fc Receptors

Five new-type Fc receptor molecules were constructed based on streptococcal protein G (SpG) and staphylococcal protein A (SpA). These protein molecules contain one to six Fc binding domains to immunoglobulins which are structurally different from native SpG or SpA. Their expression levels reached 17-30% of the total bacterial proteins after heat induction in E. colt. Immunodiffusion and ELISA results showed that the engineered protein TG (184 amino acid residues) composed of three SpG C3 domain could bind more broadly and efficiently than the native SpG to the IgGs of human, goat, rabbit, etc. , and its optimal pH for binding became wider (pH5-8) compared with the SpG (pH5) ; and the protein TGA (357AA), fused by protein TG and the A, B, C domains of SpA, displayed both the binding pattern of SpG and SpA.     

多肽固相合成中反相高效液相色谱的若干应用

多肽化学合成技术的发展,特别是多肽自动合成仪的出现大大加快了合成速度,这无疑也大大加快了其结构与功能关系研究的进程。但是直接由固相合成树脂上获得的产物往往混有部分缺失肽等杂质,结构各异的各种肽段对脱保护等条件的要求也不尽相同,因此在多肽合成工作中高效液相色谱已成为一项必不可少的配套技术。 本文介绍在本实验室利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)配合多肽自动合成工作的部分结果。     

多肽色谱分离后的柱后荧光衍生检测

高效液相色谱现在已成为多肽分离分析中分辨率最高的手段。色谱流出液中多肽的检测,目前最常用的是利用远紫外区的光吸收测定(205-220nm)。紫外吸收测定法简便易行,对样品没有破坏作用,但对移动相有严格的要求。使得在生物活性蛋白分离中所常用的一些缓冲液系统都难以应用。     

用高效凝胶过滤色谱法提纯炭疽保护性抗原

〕本文介绍用高效凝胶过滤色谱技术分离和纯化炭疽保护性抗原。选用UtroPakTSK-3000SW预装柱,0.1M磷酸盐缓冲液(pH6.8),检测器波长为280nm。所获抗原的纯度较分离前提高了不少。用免疫双扩散、免疫电泳、PAGE园盘电泳、SDS--PAGE及Alcian兰糖蛋白染色等方法检测表明,提纯抗原主要含一个组分,且为一糖蛋白,分子量为32,000。动物试验表明,该抗原仍保留原来的免疫原性。实验结果表明,高效凝胶色谱技术已不仅是一种分析测定手段,开始成为一种实用的蛋白质分离制备方法。     

全国生物医药液相色谱学术会议在北京召开

全国生物医物液相色谱学术会议于88年11月15日—18日在军事医学科学院召开。来自全国19个省、市的代表125位参加了会议。会议聘请了七位专家就“HPLC在药物代谢中的作用”、“生物大分子色谱保留机制”、“核酸分离的分析新进展”、“色谱专家系统进展”及“80年代电泳方法和应用的进展”等方面做了专题报告。有36篇论文在会上进行了宣读,55篇论文进行了墙报交流。论文涉及到蛋白质多肽,氨