GC-CI-MS-SIM方法诊断新生儿苯丙酮尿症

苯丙酮尿症 (PKU)的发病原因是患者苯丙氨酸羟化酶的缺陷 ,从而导致体内苯丙氨酸 (Phe)不能正常代谢为酪氨酸 (Tyr) ,前者在体内大量堆积并氧化为有害的苯丙酮酸 .PKU是目前筛查范围最广的氨基酸代谢遗传疾病 ,全世界每年约有一千万婴儿接受 PKU筛查 ;在中国 PKU也是卫生部要求重点筛查的病种[1] .目前常规筛查方法是细菌抑制法 (BIA) ,它的特点是费用低、速度慢、容易产生假阳性 ;Chace等 [2 ,3] 报道了 MS- MS方法筛查新生儿 PKU.曲峻等 [4 ] 发展了 Chace的方法 ,采用 HPLC与MS- MS联用方法 (LC- MS- MS)筛查新生儿 PK…     

GC—CI—MS—SIM方法论断新生儿苯丙酮尿症

苯丙酮尿症（PKU）的发病原因是患者苯丙氨酸羟化酶的缺陷,从而导致体内苯丙氨酸（Phe）不能正常代谢为]酷氨酸（Tyr),前者在体内大量堆积并氧化为有害的七人酮酸,PKU是目前筛查范围最广的氨基酸代谢遗传疾病,全世界每年约有一千万儿接受PKU调查,在中国PKU也是卫生部要求重点筛查的病种^[1],目前常规筛查方法是细菌抑制法（BIA),它的特点是用低、速率慢、空易产生假阳性;Chace等^[2,3]报道了MS－MS）京都是新生儿PKU,曲峻等^[4]发展了Chace的方法,采用HPLC与MS－MS联用方法（LCD－MS－MS）筛查新生儿PKU^[4],利用HPLC富集,MS－MS作为HPLC的检测器定量血样中的苯丙氨酸和酷氨酸,MS－MS和LC－MS－MS方法速度快,准确性好,由于是通过测定Phe与Tyr的比值来筛查PKU,克服了假阳性的产生^[2~4],但是LC－MS－MS和MS－MS价格都很昂贵,不适合国内普及推广,本文将血样的Phe与Tyr进行化学修饰后,采用化学电离源选择离子的方式用气相色谱质谱（Gas chromatography-chemical ionizatino -mass spectrograph-selective ion measurement简称GC－CI－MS－SIM）进行了分析,测定了Phe和Tyr相应衍生物的准分子离子峰面积,用外标法计算出血样中的Phe与Tyr摩尔浓度,与MS－MS、LC－MS－MS一样取得同样满意的效果,由于GC－MS价格较低,适合国内普及推广。     

高效液相色谱-同位素稀释质谱法测定血清中的苯丙氨酸

苯丙酮尿症(PKU)是一种世界性分布的遗传疾病,病人体内缺少苯丙氨酸羟化酶(PAH),导致苯丙氨酸(Phe)不能正常代谢为酪氨酸,引起Phe代谢产物在人体中过量蓄积,造成患者中枢神经系统受到不可逆的损害而影响智力.     

GC-MS方法诊断新生儿苯丙酮尿症

用甲醇提取血样中的苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr),提取液离心去蛋白质,用正丁醇将其中的苯丙氨酸和酪氨酸丁酯比,再用三氟醋酸酐酰化后进行GC-MS分析,测定Phe,Tyr特征离子峰面积,用外标法计算出Phe和Tyr的摩尔浓度,根据Phe和Tyr摩尔浓度比值来诊断新生儿苯丙酮尿症(PKU)。     

促δ-波睡眠肽的结构与功能的研究

用固相法合成了促δ-波睡眠肽Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Glu(DSIP)及其十四种类似物和三个短肽,研究了结构与功能的关系,类似物的设计,主要考虑在分子中引入D-氨基酸以抑制酶的作用和增强稳定性,以及引入疏水侧链氨基酸如Phe和Trp等。位置的修饰主要在1,3,4,5,8和9位,即:D-Trp[1],Tyr[1],Tyr[1]Phe[5],D-Trp[1]Phe[8],Trp[3,4],D-Trp[3,4],D-Trp[1,3,4]Phe[8],D-Glu[9],D-pF-Phe[3,4]Phe[8]D-Glu[9],Phe[5],Glu[5]Asp[9],Tyr[5]Asp[9],Ala[7]和Asp[9]-DSIP以及Trp-Ala-Gly-Gly-Asp,Trp-Ala-Gly-Gly-Glu和Trp-Gly-Glu.合成肽的纯度经氨基酸组成分析、元素分析、薄层层析以及纸电泳鉴定。生物试验表明D-Trp[1],Tyr[1],Tyr[1]Phe[5],Ala[7]-DSIP无促眠活性;而Phe[5]-DSIP的促眠活性与DSIP相接近,其他类似物的生物试验结果将另文发表。     

高效液相色谱法直接测定芳香族氨基酸

芳香族氨基酸包括苯丙氨酸(Phcnylalanine,Phe)、酪氨酸(Tyrosine,Tyr)、色氨酸(Tryptophan,Trp)等.定量分析芳香族氨基酸在蛋白质化学和临床诊断与研究中具有重要意义~([1]).高效液相色谱法(HPLC)~([2,3])是分析氨基酸的常用方法.文献~([3])采用梯度洗脱在不同波长处分别测定Tyr、Phe和Trp,在7 min内完成测试.本研究采用高效液相色谱法(HPLC)-紫外检测,检测波长为257nm,同时测定Tyr、Phe和Trp的含量.     

芳香氨基酸光敏化瞬态产物的光谱学及动力学表征

运用KrF激光闪光光解瞬态吸收光谱 ,以丙酮为光敏剂 ,研究了水溶液中芳香氨基酸的光化学反应 .通过动力学分析和猝灭实验 ,鉴别了光化学反应过程中的瞬态产物 ,获取了激发三重态的瞬态吸收光谱及动力学参数 .在丙酮存在下 ,色氨酸(Trp)和酪氨酸 (Tyr)的水溶液光解 ,分别观察到Trp激发三重态、N中心色氨酸自由基 (Trp/N·)和酪氨酸的酚氧自由基 (Tyr/O·) ,阐述了二者是丙酮三重态与Trp ,Tyr分别通过三重态 三重态 (T T)激发能转移和电子转移生成 ;苯丙氨酸 (Phe)不能与丙酮三重态进行激发能转移和电子转移 .进一步 ,在色氨酰酪氨酸 (Trp Tyr)敏化光解过程中 ,观察到分子内的电子转移 ,即Trp/N· Tyr→Trp Tyr/O·自由基的生成过程 .     

在饮水中典型溶解性有机氮酪氨酸氯化生成氯仿的机理分析

饮用水氯化消毒可以有效杀灭细菌, 但同时会产生危害人体健康的消毒副产物(DBP). DBP生成机理研究是有效控制DBP的前提. 溶解性有机氮(DON)是DBP的重要前体物, 选取典型DON-丙氨酸(Ala)、苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)作为氯仿(CF)等DBP的前体物, 研究三种氨基酸(AA)的耗氯量和CF产率; 同时考察了Tyr氯化中间产物2,4,6-TCP的氯化特性和CF产率; 采用GC/MS扫描和前线轨道理论验证, 探讨了CF的主要生成路径. 研究发现, 在同等氯化反应条件下, 由于侧链基团的不同, Tyr的耗氯量以及CF产率都明显高于Ala和Phe, 从而说明Tyr确实是一种重要的CF前体物质. CF的主要生成路径为Tyr→ 4-MCP → 2,4-DCP → 2,4,6-TCP → CF. 氯胺消毒工艺可有效控制CF的生成, 并能减少2,4,6-TCP的产生, 但不能确保饮用水的生物安全性. 氯化消毒之前将Tyr等重要前体物去除可能是控制CF等DBP更加有效的措施.     

3种芳香族氨基酸的液相色谱分析及用于胸腔积液病因鉴别诊断

建立了一种同时测定人体胸腔积液中酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)的液相色谱分析方法,并将其应用于胸腔积液病因鉴别诊断。优化的液相色谱条件如下:VertexTMAQ-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-10 mmol/L醋酸铵缓冲溶液(醋酸调至pH 5.6)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为210和278 nm。结果表明,3种氨基酸在各自相应的线性范围内线性相关系数均大于0.999;信噪比为3时,检出限(LOD)分别为0.50,0.17和0.20μmol/L。胸腔积液样品经甲醇去除蛋白质后取上清液直接测定,3种氨基酸平均回收率在80.7%～101.1%之间,相对标准偏差为2.5%～8.7%。利用本方法对72例良恶性胸腔积液中的3种氨基酸进行分析,发现Tyr,Phe和Trp含量在不同疾病的样品中存在统计学差异,对胸腔积液病因鉴别诊断有一定的临床价值。     

非衍生化毛细管区带电泳直接紫外检测法测定茶叶中的4种氨基酸

采用非衍生化毛细管区带电泳直接紫外检测法同时分离测定精氨酸(Arg)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)4种氨基酸,并应用于不同发酵过程的茶叶样品的测定。在分离电压为20 kV、柱温为25 ℃、检测波长为190 nm条件下,以25 mmol/L硼酸-硼砂缓冲溶液(pH 10.0)为运行缓冲液,4种组分在8 min内达到基线分离,Arg、Trp、Phe、Tyr的检出限分别为5.0,1.0,0.3和0.5 mg/L。7次平行测定中,4种组分迁移时间的相对标准偏差(RSD)均小于2.8%,峰电流的RSD均小于4.0%。将所建立的方法用于11种实际茶叶样品中Arg、Trp、Phe和Tyr含量的测定,结果令人满意。该方法可以为茶叶的质量评估提供借鉴。     

UPLC-MS/MS法测定高尿酸血症大鼠血清及尿液中的尿酸和肌酐

建立了一种测定血清和尿液中尿酸和肌酐含量的超高效液相色谱-串联质谱联用（UPLC-MS/MS）方法. 样品经自动进样器引入液相色谱通过预柱富集和去除杂质后,直接引入质谱中进行分析. 采用正离子电喷雾电离模式下的多反应监控模式对肌酐进行定量分析,纯溶剂标准曲线的肌酐线性范围为0.03~400 μmol/L;基质标准曲线的肌酐线性范围为0.2~400 μmol/L;它们的最低定量限分别为0.03和0.2 μmol/L. 采用负离子电喷雾电离模式下的多反应监控模式对尿酸进行定量分析,纯溶剂标准曲线的尿酸线性范围为0.1~350 μmol/L;基质标准曲线的尿酸线性范围为0.5~300 μmol/L;它们的最低定量限分别为0.1和0.5 μmol/L. 该方法的提取回收率在91.8%~103.7%之间,日内和日间RSD分别小于5.9%和6.8%,满足生物分析的要求. 利用该方法进行抗痛风中药筛选及其作用机制研究,结果表明,与阳性对照药物别嘌呤醇和苯溴马隆相比,中药二妙丸、黄柏和苍术均能在一定程度上降低血尿酸水平,并可显著逆转肾功能损伤,对肾功能具有一定的保护作用.     

基于超高效液相色谱-高分辨质谱技术的水中112种药品和个人护理用品的高通量筛查和定量方法

采用超高效液相色谱-三重四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap MS）,建立了水中112种药品和个人护理用品类污染物（PPCPs）的快速筛查及定量分析方法。水样分别在酸性及碱性条件下提取,分别经SPE柱净化,以UHPLC-Q-Orbitrap MS进行分离检测,采用全扫描/数据依赖二级扫描（Full MS/dd-MS²）模式进行扫描,实现了水中112种PPCPs的定性筛查,并基于一级母离子峰面积对其含量进行了定量检测。112种PPCPs的定量限为0.002~0.8 μg/L,在各自的线性范围内均呈良好的线性关系（r²≥0.9901）; 3个水平（0.2、0.4、0.8 μg/L）下的添加回收率为60.1%~129.5%,相对标准偏差为1.1%~17.8%（n=6）。将所建立的方法用于来自大连市7个区的水样中PPCPs的筛查,共筛查出16种污染物,并对其进行了定量分析。本方法简单快速,灵敏度高,筛查范围广,为水质的管理和环境风险监测提供了一种有力的技术手段。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定水华样品中微囊藻毒素及其基质效应的消除

超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)由于其快速、简便的特点,目前广泛应用于水中微囊藻毒素的测定。由于蓝藻水华样品基质比较复杂,UPLC-MS/MS在复杂基质的分析过程中容易发生基质效应问题,严重影响其定量分析结果的准确性。通过稀释样品、优化梯度洗脱程序、减少进样量等方法有效地降低或消除了基质干扰及基质效应问题。7种目标物在各自线性范围内线性关系良好,相关系数(r2)≥0.99;检出限和定量限分别为0.064~0.103μg/L和0.213~0.343μg/L。通过稀释样品、减少进样量等措施,成功测定了水华爆发时实际样品中的微囊藻毒素,并有效降低了基质效应的干扰。该法为微囊藻毒素的准确测定提供一定的参考,对保障饮用水源地的安全具有十分重要的意义。     

分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中7种非选择性环氧化酶抑制药物

建立并优化了使用分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱（dSPE-UPLC-MS/MS）检测奶粉中7种非选择性环氧化酶（COX）抑制药物残留的方法。样品用0.01 mol/L pH 2.5抗坏血酸溶液-乙腈-乙酸乙酯（2：5：5，v/v/v）溶液提取后，加入无水硫酸钠、十八烷基键合硅胶吸附剂（C₁₈-N）及NH₂-丙基乙二胺吸附剂（NH₂-PSA）组成的盐包进行净化。以Waters CORTECS UPLC C₁₈（100 mm×2.1 mm，1.6 μm）色谱柱分离，流动相为0.1%（体积分数）甲酸水溶液和0.1%（体积分数）甲酸乙腈，配合多反应监测（MRM）模式定性定量分析水杨酸、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛、吡罗昔康、萘普生和保泰松7种成分。结果表明：7种化合物线性相关性良好，相关系数（r²）≥ 0.9957。高、中、低3个水平下，加标回收率为76.4%~89.8%。定量限为2~5 μg/kg。该方法前处理简单，回收率高，重现性好，可作为奶粉中7种非选择性COX抑制药物残留的有效检测方法。     

超高效液相色谱-串联质谱测定饲料中镇静剂类和β-受体激素类药物残留

采用超高效液相色谱-串联质谱技术,建立了饲料中8种镇静剂类和15种β-受体激素类药物残留的分析检测方法。样品采用乙腈-1%(体积分数)三氯乙酸水溶液(7∶3,v/v)提取,目标物通过阳离子固相萃取柱净化,经Agilent Zorbax Eclipse Plus C_(18)色谱柱(100 mm×3.0 mm,1.8μm)分离,液相色谱-串联质谱进行检测,标准曲线内标法定量。结果表明:23种目标物在2.0~200.0μg/L内线性关系良好(r20.99)。在饲料样品基质中,目标化合物在5.0、10、50μg/kg 3个加标水平下的平均回收率为75.1%~102.4%,相对标准偏差(RSD)为4.3%~14.3%(n=6)。该方法净化效率高,适用范围广,可用于饲料中镇静剂类和β-受体激素类药物残留筛查和检测。     

液相色谱-串联质谱测定鸡肉中喹乙醇残留标示物3-甲基喹恶啉-2-羧酸

建立了简便、灵敏、科学和可靠的液相色谱-串联质谱测定鸡肉中喹乙醇残留标示物3-甲基喹恶啉-2-羧酸（MQCA）的分析方法。采用给鸡灌服喹乙醇的方式,获得含MQCA的鸡肉试样,比较了酶解、酸解和碱解等方法水解鸡肉中MQCA的效率,实验表明,碱水解鸡肉组织得到最高含量的MQCA。样品经1.0 mol/L氢氧化钠溶液水解,正己烷除脂,MAX混合型阴离子交换固相萃取柱直接净化,采用C₁₈反相色谱柱分离,质谱选择反应监测模式检测。结果表明：MQCA在1.0~100 μg/L范围内线性关系良好,相关系数（r²）大于0.99;方法检出限为0.4 μg/kg。在1.0、5.0和50.0 μg/kg 3个添加水平下,采用外标法定量,MQCA的平均回收率为71.7%~82.4%,采用内标法定量,其回收率为96.3%~103.7%,相对标准偏差均小于6.0%。该方法适用于动物性食品中3-甲基喹恶啉-2-羧酸残留的日常监测。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测水果中6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂及其质谱裂解规律

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定橙子、香蕉、苹果、菠萝中E-苯氧菌胺、嘧菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯和肟菌酯6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留的方法。采用计算机辅助谱图解析软件ACD Lab/MS Fragmenter对质谱裂解路径进行了分析。样品经乙腈提取,氨基固相萃取柱(SupelClean LC-NH2)净化,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)进行分离,以含0.1%(v/v)甲酸的10mmol/L乙酸铵溶液和含0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾正离子模式下,采用多反应监测(MRM)模式监测,外标法定量。结果显示,6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂在5~100μg/L(其中吡唑醚菌酯在1~20μg/L)范围内的相关系数(r2)均大于0.999。6种杀菌剂的加标回收率为60.4%~120%,相对标准偏差(RSD)为2.15%~15.1%(n=6)。该法能满足橙子、香蕉、苹果和菠萝中6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量的检测要求。     

离子色谱-串联质谱法检测茶叶中的高氯酸盐

建立了离子色谱-串联质谱检测茶叶中高氯酸盐的分析方法。选用高容量、强亲水性的IonPac AS20阴离子交换柱（2 mm）进行分离,以淋洗液自动发生器在线产生的70 mmol/L氢氧化钾为淋洗液等浓度淋洗,TSQ Quantiva三重四极杆质谱仪作检测器,采用电喷雾电离源负离子（ESI^-）模式、多反应监测（MRM）模式进行分析,内标法定量。结果表明,高氯酸盐在0.02~10.0 μg/L范围内线性关系良好,相关系数（r）为0.9991,定量限为2 μg/kg。运用该方法测定5种茶叶中的高氯酸盐,加标回收率为87.3%~112.2%。该方法具有操作简单、专属性强、灵敏度高等优点,可满足茶叶中高氯酸盐的检测要求。     

复合式提取净化体系结合超高效液相色谱-串联质谱法检测畜禽肉中120种抗生素药物残留

建立了畜禽肉中兽药抗生素的复合式预处理方法，同时对8大类120种理化性质差异较大的目标化合物进行有效的提取和净化，并通过超高效液相色谱-串联质谱仪对其进行准确的筛查分析。样品经Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲液溶解分散，由1.5%（v/v）甲酸乙腈提取，采用Oasis PRiME HLB通过式固相萃取、正己烷液液萃取两种方式先后对提取液进行净化。目标物在Atlantis^® T3色谱柱（100 mm×2.1 mm，3 μm）上，以乙腈和0.1%（v/v）甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱分离，在正离子（ESI⁺）多反应监测（MRM）模式下进行定性定量分析。实验考察了不同pH条件的提取溶剂和不同净化方式对目标化合物回收率的影响并优化其条件。所建立的方法确保120种兽药在1.0~50.0 μg/L范围内线性关系良好，线性相关系数（r²）≥ 0.9953，其中89种化合物的r² ≥ 0.9990。7种化合物的定量限（LOQ）为10.0 μg/kg，21种化合物的LOQ为5.0 μg/kg，其余92种化合物的LOQ均≤ 2.0 μg/kg。低、中、高3个添加水平下的平均回收率为71.5%~109.2%，相对标准偏差为0.6%~15.3%。该方法灵敏高效，回收率优良，重复性稳定，适用于畜禽肉中多种抗生素药物的同时筛查检测。