某中药复方中柴胡皂苷A和D的 LC-MS-MS研究

某中药复方是由黄芩、柴胡、半夏等11味药材精制而成,柴胡是其中1味主要药材,现代药理学研究表明,柴胡中柴胡皂苷类成分具有解热、镇痛、镇静、镇咳及保肝等作用[1],而其中含量最高、药理活性最强的是柴胡皂苷A和D[2,3].因此复方中柴胡皂苷A和D的研究对复方的质量控制及制备工艺的指导具有重要的意义.     

特异的柴胡皂苷糖苷酶的分离纯化

研究了微生物Aspergillus oryzaec42菌株产特异的柴胡皂苷糖苷酶的分离纯化及其酶学性质.结果表明,该酶能够水解柴胡皂苷A或柴胡皂苷B2侧链的3-O-β-(1→3)-Glc和3-O-β-Fuc,其分子量约为58000.柴胡皂苷糖苷酶首先水解柴胡皂苷A或B2侧链的3-O-β-(1→3)-Glc生成3-O-β-Fuc-柴胡皂苷元A或B2,然后进一步水解3-O-β-Fuc-柴胡皂苷元A或B2的3-O-β-Fuc生成柴胡皂苷元A或B2.柴胡皂苷糖苷酶的最适反应温度为4℃,最适pH值为5.0;Na+和K+对酶活力的影响不明显;Cu2+,Hg2+和Ag+对酶活力有显著的抑制作用;Ca2+和Mg2+对酶活力有轻微的激活作用.     

近红外光谱法快速测定柴胡提取过程中的药效成分

利用近红外光谱(NIRS)技术对柴胡提取过程中的药效成分进行快速定量分析。共收集126个柴胡提取液样品,采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮和多糖的含量,高效液相色谱法(HPLC)测定柴胡皂苷A及柴胡皂苷D的含量,以透射模式采集提取液的近红外光谱,运用偏最小二乘法(PLS)分别建立了近红外光谱与4种药效指标参考值之间的定量校正模型,并采用不同的预处理方法、光谱波段和主因子数对模型进行优化。结果表明,总黄酮、多糖、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D 4种定量模型的近红外预测值与参考值之间的拟合性良好,模型预测精度较高,其中预测集相关系数(RP)均大于0.9;预测集误差均方根(RMSEP)分别为3.46 μg/mL、0.743 mg/mL、1.53 μg/mL、0.406 μg/mL;预测集相对偏差(RSEP)分别为1.65%、8.28%、5.74%、7.52%。该研究证实了NIRS结合PLS可成功应用于监测柴胡提取液中药效成分的含量变化,且方法具有快速、准确、无损和环保的特点。     

刺梨利康饮对汞中毒大鼠汞铜锌含量的影响

用高汞水喂养大鼠8周,复制出慢性汞中毒模型,再分别自由饮用利康饮饮料和腹腔注射二巯基丙磺酸钠3周,探讨刺梨利康饮和二巯基丙磺酸钠对慢性汞中毒大鼠体内汞、铜、锌含量的影响.结果显示:慢性汞中毒引起血清、肝、脑和肾中汞含量升高的同时,引起血清、脑和肾中铜、锌含量及肝中锌含量降低;利康饮可降低血清和肾中汞含量,并可提高血清、脑和肾中铜、锌含量及肝中锌含量;二巯基丙磺酸钠虽可降低血清、肝和肾中汞含量,升高血清和肾中铜含量,但引起血清和肝中锌含量更加降低.结果表明:利康饮可降低慢性汞中毒大鼠体内汞的负荷量,并具有补充铜、锌微量元素的作用.     

核磁共振氢谱研究氯化镧对大鼠脑中代谢物的影响

采用核磁共振技术研究了氯化镧对大鼠脑中代谢物的影响.雄性SD大鼠尾静脉注射剂量为0.1 mmol·kg-1体重的氯化镧溶液,分别在注射后2和4 h处死大鼠,提取脑中水溶性代谢物.分析结果表明,氯化镧引起部分代谢物含量的变化,4 h组琥珀酸、谷氨酸和γ-氨基丁酸含量与对照组相比分别下降32%,7%和16%,这表明静脉注射氯化镧可能引起脑功能的变化.     

北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析

采用在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用方法,测定了糖尿病脑病大鼠大脑海马区的8种脑递质的含量,从脑中神经活性物质的角度研究五味子改善学习记忆能力的作用机制.实验结果表明,经五味子治疗后,痴呆大鼠脑透析液中的谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)的含量显著降低(P0.05),牛磺酸(Tau)及乙酰胆碱(Ach)的含量显著升高(P0.01),天冬氨酸(Asp)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量有降低趋势(P0.05),8种神经活性物质的水平均向正常水平发生了调节.此结果说明五味子可能通过调节糖尿病大鼠大脑中神经活性物质的含量发挥保护中枢神经系统的作用,从而改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力.Morris水迷宫实验结果表明,五味子水提物可以明显缩短糖尿病脑病大鼠的逃避潜伏期,增加穿越目标区域次数及中心区域(%)(P0.05).     

中药通心络对抑郁-动脉粥样硬化大鼠干预作用的血浆代谢组学研究

采用快速液相色谱串联离子阱飞行时间质谱(UFLC/MS-IT-TOF)技术对通心络干预下的抑郁-动脉粥样硬化大鼠的血浆代谢谱进行研究.结果表明,抑郁-动脉粥样硬化模型大鼠体内的氨基酸代谢、脂肪酸的β-氧化、胆固醇代谢及磷脂代谢发生了异常.中药通心络通过调节模型大鼠体内的色氨酸、苯丙氨酸代谢及某些胆汁酸的代谢,抑制大鼠抑郁-动脉粥样硬化的形成.该研究结果表明代谢组学在中药整体性药效评价、作用机理的阐明等方面具有很好的应用前景.     

大孔吸附树脂富集纯化柴胡总皂苷的研究

以柴胡皂苷a为指标,采用高效液相色谱法测定洗脱液中柴胡皂苷a的含量,考察D-101大孔吸附树脂对柴胡总皂苷的吸附性能和洗脱条件,以柴胡提取液15 mL(0.2 g药材/mL)上柱,70%的乙醇洗脱,柴胡总皂苷洗脱率为71.83%.且除杂能力强.     

大鼠脑组织中轻稀土元素含量相关性研究

研究了轻稀土元素La、Ce、Pr、Nd、Sm、Eu、Gd在大鼠脑组织中的吸收规律和蓄积特点.将雄性SD大鼠随机分为空白、对照、低、中、高及排毒组,每组10只,4周后处死,取脑组织.排毒组停止灌胃后继续饲养4周后处死取脑组织.用ICP-MS测定脑组织中上述稀土元素含量并做统计学分析.结果表明低、中、高剂量组大鼠脑组织中轻稀土元素含量逐渐增高,排毒组介于中、高剂量组之间;脑组织中轻稀土元素的含量远低于其他脏器;La、Ce、Pr在脑中分布符合奥多-哈尔金斯规则,Nd元素呈负偏离;多数轻稀土元素在脑和毛发中含量相关系数较高.稀土元素在脑组织中蓄积有量效关系,且蓄积具有可逆性;血-脑屏障对稀土元素的通透有一定阻碍作用;稀土元素在脑组织中的蓄积率不受摄入量的影响;毛发比全血更适合作为脑组织轻稀土元素含量的生物标志物.     

帕金森模型大鼠脑内儿茶酚胺异喹啉类化合物的形成与代谢

帕金森(PD)是一种常见的神经退行性疾病,确切的致病机理尚不清楚,其中环境因素引起的神经毒素假说受到广泛关注.本文提出了关于内源性神经毒素恶性循环导致PD的假说.为了验证该假说,建立了定位注射6-OHDA单侧损毁黑质.纹状体的PD Wistar大鼠模型,并采用HPLC-ESI-TOF分别检测了PD模型大鼠和对照组大鼠脑健侧和受损侧的黑质、纹状体中Sal和NMSal的含量.结果表明,PD模型大鼠受损侧黑质-纹状体中Sal和NMSal的含量都比健侧及其他对照组高,说明PD模型受损侧内源性儿茶酚胺异喹啉类神经毒素导致的恶性循环严重,对假说的验证提供了依据.     

二元环糊精体系对柴胡中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d的毛细管电泳分离测定

以磺丁基-B-环糊精(SBE-β-CD)和β-环糊精(β-CD)组成二元手性选择体系,用毛细管电泳法对柴胡中的柴胡皂苷a及柴胡皂苷d进行分离测定.考察了缓冲液的组成和浓度、手性选择剂的组成和浓度、进样方式及样品介质等对灵敏度和分离度的影响.结果表明:采用熔融石英毛细管柱(60 cm×50 μm i.d,有效长度为53 ...     

剌梨利康饮对汞中毒大鼠汞铜锌含量的影响

用高汞水喂养大鼠８周,复制出慢性汞中毒模型,再分别自由饮用利康饮饮料和腹腔注射二巯基丙磺酸钠３周,探讨剌梨利康饮和二巯基丙磺酸钠对慢性汞中毒大鼠体内汞、铜、锌含量的影响。结果显示：慢性汞中毒引起血清、肝、脑和肾中汞含量升高的同时,引起血清、脑和肾中铜、锌含量及肝中锌含量降低;利康饮可降低血清和肾中汞含量,并可提高血清、脑和肾中铜、锌含量及肝含量;二巯基丙磺酸钠虽可降低血清、肝和肾中汞含量,升高血清     

富硒肝对大鼠GSH-Px、GSH和游离巯基含量的影响

为观察富硒肝和亚硒酸钠对大鼠抗氧化能力的影响。将6只大鼠分为两组:A组用亚硒酸钠[按Se元素计,6μg/(只.d)]灌胃,B组用富硒肝[按Se元素计,6μg/(只.d)]灌胃。于灌胃第0、4、8、12、16、20天内眦采血,测定血浆和血细胞内液中GSH-Px活力以及GSH、游离巯基的含量。结果表明:①给药20 d后A、B组血浆和血细胞内液GSH-Px活力和GSH含量均明显高于灌胃前(P0.05);②A、B组血浆中游离巯基的含量略有增加,而血细胞内含量则大幅降低(P0.05)。结论:经口给予富硒肝可诱导大鼠产生较多的抗氧化物质,增强大鼠的抗氧化能力。其作用可达同剂量亚硒酸钠水平。     

高空缺氧条件下DPH对脑铁,锌及MDA含量的影响

和原子吸收法测定了高空缺氧条件下ＤＰＨ对大鼠脑组织铁、锌含量的影响，并测定了脑ＭＤＡ含量。结果显示：对照组在高空缺氧条件下，脑组织铁含量明显高于用药组，而脑锌含量明显低于用药组。脑组织ＭＤＡ一明显高于地面对照及用药组，这表明，在高空缺氧条件下，对照组脑组织过氧化反应增强，高于用药组：脑组织ＭＤＡ含量与锌含量成反比。     

高效液相色谱法测定大鼠组织中双酚A和4-壬基酚浓度

建立了大鼠组织中双酚A和4-壬基酚的提取和含量测定方法。大鼠组织样品经甲醇-乙酸铵缓冲液匀浆、 正己烷-乙醚混合溶剂提取、氮气吹干后用流动相溶解,以乙腈-0.01 mol/L乙酸铵缓冲液(pH 4.5)(体积比为75∶25)为流动相,经C18色谱柱分离,在激发波长227 nm、发射波长313 nm下进行荧光检测。大鼠心、脑、肝和肾脏组织样品中,双酚A的检出限为3.2~4.6 ng/g,4-壬基酚的检出限为11.8~15.6 ng/g;日内检测精密度为0.89%~4.50%,日间检测精密度为3.10%~12     

利骨素协同尼尔雌醇干预去卵巢大鼠骨元素代谢紊乱及其机制

通过测定骨元素含量和血清相关激素及白细胞介素-6水平,探讨了尼尔雌醇和联合应用尼尔雌醇＋利骨素对去卵巢大鼠骨元素代谢的影响及其机制。将健康4月龄雌性SD大鼠24只随机分成4组：A组,假去卵巢组;B组,去卵巢组;C组,去卵巢＋CCE3（全量）组;D组,去卵巢＋CCE3（半量）＋利骨素。结果表明,与A组比较,B组大鼠骨Ca、Mg、S、Mn、Zn等含量显著降低,P含量显著增加;C组和D组均可使去卵巢大鼠骨Ca、Mg、S、Mn、Zn等含量显著回升,P含量显著回降,而D组的作用优于C组;血清相关激素的改变：与A组比较,B组大鼠,血清雌二醇（E2）,孕酮（P）,生长激素（GH）,降钙素（CT）促甲状腺激素（TSH）,甲状腺素（T4）,Cortisol等含量降低,卵泡刺激素（FSH）,黄体生成素（LH）,白细胞介素-6（IL-6）等含量升高,与B组比较,C组和D组大鼠,血清E2,P,GH,CT,TSH,T4,Cortisol等含量回升,FSH,LH,IL-6等含量回降。提示利骨素可协同尼尔雌醇改变去卵巢大鼠体内相关激素和细胞因子水平,是利骨素协同尼尔雌醇干预去卵巢大鼠骨元素代谢紊乱的重要机制。     

模拟微重力效应引起大鼠脑氧化应激与Na~+,K~+-ATP酶表达下调

采用地基模拟微重力效应的大鼠吊尾模型重现了微重力环境导致的氧化应激现象。对脑组织中OH自由基及丙二醛含量测定结果表明,吊尾组大鼠脑纹状体及海马均较其对照组显著性升高,反映了脑中发生了明显的氧化应激。通过比较蛋白质组学方法测定了纹状体突触蛋白的差异表达情况,发现鉴定到的所有ATP酶的表达均发生下调。这些结果表明,微重力效应的影响与氧化应激增强、Na+,K+-ATP酶表达或活性下降密切相关,为进一步探究微重力环境的作用机制及其对于生理系统造成的其它损伤研究提供了依据。     

利用GC/MRM检测去势大鼠前列腺中睾酮、双氢睾酮和脱氢表雄酮

建立了一种分析睾酮、双氢睾酮及脱氢表雄酮的GC/MRM 方法. 该方法回收率高, 灵敏度好, 对样品需求小, 已运用于研究去势大鼠前列腺中各种雄激素含量的变化. 以去势大鼠为模型, 对去势后3个月内其前列腺内雄激素含量的变化进行检测分析. 去势后, 大鼠前列腺中雄激素含量经过2个月的平台后, 至术后3个月出现明显降低. 而抑制5α还原酶药物的作用, 术后2个月时能明显改变前列腺中激素含量水平.     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠脑透析液中CTN986及其脱糖产物的含量

建立了测定CTN986及其脱糖产物芦丁和陆地棉苷在大鼠脑透析液中含量的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法. 采用微透析技术结合HPLC-MS/MS, 以甲醇-异丙醇-水-甲酸(体积比20∶10∶70∶0.1)为流动相, 用Zorbax C8柱分离, 待测物通过电喷雾离子化四极杆串联质谱, 以多反应监测方式(MRM)进行检测. 采用外标法分析给予CTN986后大鼠脑透析液中CTN986及其脱糖产物的浓度, 经过体内回收率校正后, 计算出脑透析液中待测物的浓度. CTN986、芦丁和陆地棉苷的线性范围为2~500 ng/mL, 日内及日间精密度(RSD)均小于15%, 准确度(RE)在-4%~13%之间. 本方法专属性强、灵敏度高, 适用于脑透析液中CTN986的药代动力学分析, 为药代动力学研究提供了新的方法学参考.     

糖尿病大鼠脑能量代谢改变的核磁共振磷谱研究

应用链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)制备糖尿病(Diabetes mellitus,DM)大鼠模型,采用离体的核磁共振磷谱(31P Magnetic resonance spectroscopy,MRS)方法检测糖尿病大鼠脑组织的生化改变。全脑的31P MRS谱图结果显示,STZ诱导1周后,磷酸单酯和磷酸二酯的含量无明显改变,表明糖尿病大鼠脑中并没有发生膜性结构的改变。二磷酸腺苷峰增高,磷酸肌酸(Phosphocreatine,PCr)和三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)含量无明显改变,但是PCr/ATP降低,说明PCr作为能量缓冲底物维持能量平衡。此外,pH值降低,表明在糖尿病大鼠脑中细胞内环境改变。当糖尿病发展到15周时,磷脂膜代谢和脑能量代谢紊乱。31P MRS不仅能够无创性提供磷脂代谢情况及能量状况,还可以测得细胞内pH值等方面的生化信息,有助于理解糖尿病脑病的发病机制,并为临床的早期诊断和治疗提供理论依据。