离子对反相高效液相色谱法同时测定大鼠血浆和红细胞中外源性磷酸肌酸及其代谢产物和相关三磷酸腺苷

建立了离子对反相高效液相色谱(IP-RPHPLC)同时测定大鼠血浆和红细胞(RBC)中磷酸肌酸(PCr)及其代谢产物肌酸(Cr)以及相关三磷酸腺苷(ATP)浓度的方法.采用Kromasil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相A:0.2%KH2PO4+0.08%四丁基硫酸氢铵混合溶液(pH 3....     

反相高效液相色谱法同时测定人膀胱癌T24细胞中三磷酸腺苷及其代谢物的含量北大核心CSCD

所有生物过程都伴随着能量代谢,细胞内的能量供应主要依赖于线粒体合成的三磷酸腺苷(ATP)[1-2]。因此,建立有效的细胞内ATP及其代谢产物[二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)]的定量方法是非常有必要的。ATP、ADP和AMP的结构和理化性质非常相似,同时测定会有一定困难。     

31PNMR研究水生动物细胞死亡过程的动力学性质

由于细胞凋亡的研究有助于理解胚胎发育、免疫耐受、细胞群体稳定等重要生命现象, 并对治疗疾病具有潜在的价值, 故已成为研究的热点[1～5]. 已有文献报道, 细胞的死亡形式与细胞内ATP(三磷酸腺苷)的含量有关, 在细胞凋亡的过程中, 细胞内ATP的含量必须保持一定的水平[6,7]. 如在研究人的T-细胞死亡过程中, 发现当ATP的含量降低时, 细胞死亡的方式是坏死而不是凋亡[1,8]. 对于在细胞死亡过程中能量代谢物质的动态变化, Davis等[9]在对神经系统PC12细胞的凋亡过程的研究中发现, 尽管ATP的含量保持不变, 但Pi(无机磷)进入ATP和蛋白质的量明显减少, 进入磷酸肽的量明显增加. 以上结果表明, 可以利用31P NMR研究细胞的死亡过程. 本文首次利用31P NMR观测水生动物不同部位细胞死亡过程中ATP, PCr(磷酸肌酸), Pi和磷脂等能量代谢物质的含量变化并得到变化的速率常数, 所得结果有助于人们了解细胞死亡过程中能量代谢物质的变化规律和判断细胞死亡的快慢.     

高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷及其代谢物的含量（英文）

研究了三磷酸腺苷(ATP)及其代谢物在细胞内的含量以及2-叔丁基-1,4-苯醌(TBBQ)对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法(HPLC)用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物(二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP))的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱,采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol/L磷酸氢二钠和15 mmol/L三甲胺(TEA),用醋酸(HAc)调节pH至7.88;流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线,相关系数高(R~2≥0.999 6),MRC-5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围(0.1~100μmol/L)内。该方法检出限低。采用预冷的80%(体积分数)甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC-5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,结果表明,TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响,但TBBQ浓度和ATP、ADP以及AMP在MRC-5细胞内浓度的关系比较复杂。     

31P-NMR研究白血病细胞系Molt-4细胞内pH

用31P-NMR建立了无损伤性测定人淋巴瘤白血病细胞系Molt-4细胞胞内pH的方法.Molt-4细胞的31P核磁共振谱由无机磷(Pi)、ATP等的共振峰组成.通过测定Molt-4细胞内Pi化学位移进而能间接确定细胞内的pH,细胞内无机磷(Pi)的化学位移对pH非常敏感,随pH变化而变化.Molt-4细胞内Pi峰的化学位移为5.65±0.08(n=3),计算得到细胞内pH值为6.68±0.05.31P核磁共振能在测定细胞胞内pH的同时,观测到细胞内多种含磷小分子代谢物,是一种无损伤研究细胞内pH及代谢的有效方法.     

Cd(Ⅱ)和ATP的结合位点的NMR研究

用NMR方法研究了金属镉离子在ATP(嘌呤三磷酸腺苷)上的配位点.测量了不同pH值时由于Cd²⁺的存在而引起的¹H,¹⁵N及³¹P的化学位移和³¹P－³¹P中的偶合常数的变化以及由ATP的存在所引起的¹¹³Cd的化学位移的变化.结果表明,在pH＞4.5的条件下,ATP主要以磷酸根和N₇同时对Cd²⁺配位;在pH值2.5～4.5的条件下,ATP主要以磷酸根和N₁同时对Cd²⁺配位,还存在少量的磷酸根和N₇同时配位的模式;而在酸性非常强的条件下(pH＜2.5),ATP不再与Cd²⁺相互作用。     

人早幼粒白血病细胞HL-60胞内pH的31P核磁共振研究

建立了无损伤性测定HL-60细胞胞内pH的31P-NMR方法.细胞内无机磷(Pi)的化学位移对pH非常敏感,随pH变化而变化,通过测定其化学位移进而能间接确定细胞内的pH.HL-60细胞的31P核磁共振谱由Pi、ATP等的共振峰组成.根据Pi峰的化学位移对HL-60细胞内pH进行了测定.HL-60细胞内Pi峰的化学位移为5.78±0.01,计算得到细胞内pH值为6.16±0.01.31P核磁共振能在测定细胞胞内pH的同时,观测到细胞内多种含磷小分子代谢物, 是一种无损伤研究细胞内pH及代谢的有效方法.     

31P核磁共振在肿瘤细胞代谢研究中的应用

综述31P NMR在肿瘤细胞代谢研究中的应用.通过细胞的灌流装置,用31P NMR测定细胞内含磷化合物、pH等的变化,对肿瘤细胞代谢进行分析.31PNMR能动态地一次同时监测活细胞内多种含磷代谢物及pH变化,较好地应用于肿瘤细胞的能量代谢和磷脂代谢等研究中.31P NMR具有无损伤性,克服了许多分析方法的提取分离步骤,具有独特的优点.     

三磷酸腺苷大量生产方法研究成功

三磷酸腺苷(ATP)是许多酶催化反应所需要的供应能量的辅助因子(Cofactor)。最近,美国麻省理工学院G.M.Whitesides博士领导的研究组宣布他们研究成功了一种能大量生产ATP的方法,即将丙酮热解生成乙烯酮,再与磷酸进行加成而得乙酰磷酸,后者在腺苷激酶、腺苷酸激酶和乙酸激酶等三种酶共同作用下将腺苷进行磷酸化而成一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸     

高效液相色谱法测定棉籽中的ATP，ADP，AMP

测定生物组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)的含量,在研究生物的一些生理生化现象中有重要意义。利用不同方法定量分析这三种腺苷酸的报道已有很多。本文所述是用反相高效液相色谱法,对棉籽中的ATP、ADP和AMP进行测定。     

人宫颈癌细胞(Hela)内的31P核磁共振研究

建立了无损伤性³¹P NMR研究细胞内物质的实验方法, 并对人宫颈癌细胞(Hela)的³¹P NMR谱中含磷小分子代谢物的谱峰进行了分析; 细胞内无机磷(Pi)的化学位移对pH非常敏感, 通过测定其化学位移可间接确定细胞内的pH, Hela细胞内Pi峰的化学位移为5.88±0.01 (n＝3), 计算得到细胞内 pH值为7.05±0.01; 通过测量Hela细胞的³¹P NMR谱中ATP的α磷和β磷及γ磷的化学位移差值, 得出Hela细胞内Mg^2＋与ATP结合的复合物MgATP和整个ATP量的比值, 计算得到Hela细胞内游离Mg^2＋浓度为(253.3±0.13) mmol/L (n＝3), 与其它分析方法相比, ³¹P NMR测定细胞内游离Mg^2＋浓度具有对细胞样品无损伤的优点.     

6-氯-2-氨基嘌呤核苷酸的合成、光谱性质及生化评价的研究

经过4步合成了一个嘌呤核苷酸衍生物6-氯-2-氨基嘌呤核苷三磷酸盐,使用1H NMR、13C NMR、31P NMR、IR和元素分析表征了它的化学结构。在不同pH值的溶液中研究了它的紫外和荧光光谱性质,并通过pH光度微量滴定法测定了一个质子化产物的pKa值为1.44。最后,在马铃薯三磷酸腺苷双磷酸酶的催化下研究了此化合物的水解特性,这个核苷衍生物三磷酸盐与ATP竞争马铃薯三磷酸腺苷双磷酸酶的活性位点的机理被证明是一个混合型抑制机理。     

电化学控制释放三磷酸腺苷

在含有甲苯磺酸钠和吡咯的水溶液中电化学合成聚吡咯膜.当膜在三磷酸腺苷(ATP)的溶液中氧化时,ATP掺入膜内;当膜还原时ATP从膜中释放出来, 释放出的ATP的量可由紫外可见光谱法测定.     

基于上转换能量共振转移的纸芯片检测三磷酸腺苷北大核心CSCD

三磷酸腺苷(ATP)是活体组织中的一种重要基质,是细胞内能量的“分子货币”,也被看作细胞生存和细胞损伤的标示物,因此,ATP的检测具有深远的生物研究和临床诊断意义。本研究以上转换荧光纳米颗粒(UCPs)为能量供体,氧化碳球(OCNPs)为能量受体,构建了一种基于上转换荧光能量共振转移的纸芯片,实现了对ATP的高灵敏、高选择性检测。该纸芯片检测ATP的线性范围为0.5~200 nmol/L,线性相关系数为0.9985,检出限为0.36 nmol/L。     

铽-依诺沙星-邻菲啰啉络合物荧光猝灭法测定ATP

研究了铽-依诺沙星(enx)-邻菲啰啉(phen)络合物作为荧光探针,荧光猝灭法测定三磷酸腺苷二钠(ATP)的新方法。试验结果表明,在pH 6.7乙酸-乙酸钠缓冲溶液中,eλx=340 nm,eλm=545 nm时,荧光强度的减小值与ATP的浓度在0.1~10.0 mg.L-1范围内呈线性关系,检出限为0.02 mg.L-1。该体系直接用于三磷酸腺苷二钠片剂中ATP含量的测定,标准加入回收率为98.4%~104.0%,相对标准偏差为2.34%。     

毛细管电泳检测大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷二钠含量的动态变化

本文建立了大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷二钠(ATP)检测的毛细管电泳方法。以89 mmol/L Tris,89 mmol/L硼酸,2 mmol/L EDTA组成的缓冲液(1×TBE,pH8.0)为分离电解质,在聚丙烯酰胺涂层毛细管上,ATP能与样品中的其它组分高效分离。ATP的浓度在0.5~10μg/mL范围内其峰面积和浓度有良好的线性关系。方法的检出限为0.04μg/mL。ATP迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.8%和5.7%(n=5)。探讨了脑缺血再灌流后ATP含量的变化规律,结果表明短暂脑缺血再灌流后存在着继发性能量衰竭的现象。     

人宫颈癌细胞(Hela)内的31P核磁共振研究

建立了无损伤性³¹P NMR研究细胞内物质的实验方法, 并对人宫颈癌细胞(Hela)的³¹P NMR谱中含磷小分子代谢物的谱峰进行了分析; 细胞内无机磷(Pi)的化学位移对pH非常敏感, 通过测定其化学位移可间接确定细胞内的pH, Hela细胞内Pi峰的化学位移为5.88±0.01 (n＝3), 计算得到细胞内 pH值为7.05±0.01; 通过测量Hela细胞的³¹P NMR谱中ATP的α磷和β磷及γ磷的化学位移差值, 得出Hela细胞内Mg^2＋与ATP结合的复合物MgATP和整个ATP量的比值, 计算得到Hela细胞内游离Mg^2＋浓度为(253.3±0.13) mmol/L (n＝3), 与其它分析方法相比, ³¹P NMR测定细胞内游离Mg^2＋浓度具有对细胞样品无损伤的优点.     

多种精氨酸衍生物与ＡＴＰ作用及其催化ＡＴＰ水解的影响研究

分别使用荧光光谱法、 ~1H和~(31)P核磁方法对腺苷-5′-三磷酸(ATP)和多种L-精氨酸衍生物(L)的相互作用做了系统的研究, 得到了一些有意义的结果.在荧光滴定实验中, L对ATP有很强的荧光猝灭作用, 说明两者有较强的相互作用. ~1H和~(31)P核磁结果进一步证实了L与ATP的识别位点在ATP的嘌呤环和磷酸链上, 结合力为氢键和静电作用. 另外, 用~(31)P 核磁滴定的方法考察了L对ATP水解的影响, 发现不同的精氨酸衍生物对ATP水解的催化影响有很大的差异, 说明L对ATP的识别和催化其水解作用有较强的选择性. 此识别及催化作用的研究对深入理解精氨酸残基在ATP合酶中起到"触点"作用有一定的参考价值.     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.