高效液相二极管阵列检测法同时测定复方丹参制剂中7个成分的含量

采用高效液相二极管阵列检测法同时测定3种复方丹参制剂中的7个成分:原儿茶醛、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。应用Zorbax C18柱,以0.1%磷酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/m in(22~28 m in,0.8 mL/m in),柱温30℃,检测波长203、270和281 nm。7个成分的峰面积与浓度的线性关系良好(r>0.9992);加样回收率为94.4%~104.9%。该方法简单、准确、重现性好,可为全面评价复方丹参制剂的质量提供依据。     

高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定丹参滴注液中四种水溶性成分的含量

建立了高效液相色谱二极管阵列检测(HPLC-DAD)法同时测定丹参滴注液中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B四种水溶性成分的含量。采用DiamonsilTMC18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),以甲醇和5%冰乙酸为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为286 nm。在此色谱条件下四种水溶性成分可完全分离。丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的线性范围分别为0.2192~1.934μg(r=0.9999),0.03508~0.2456μg(r=1.0000),0.2592~1.814μg(r=1.0000),0.3864~2.705μg(r=0.9999)。平均回收率丹参素为102.6%,相对标准偏差(RSD)为0.55%;原儿茶醛为103.5%,RSD为0.42%;迷迭香酸为99.8%,RSD为0.68%;丹酚酸B为102.8%,RSD为0.49%。该方法简单、快速,四组分分离良好,可用于丹参滴注液的质量控制。     

反相高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定丹参饮片中5种水溶性成分

建立反相高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定丹参饮片中5种水溶性成分丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的含量。采用DiamonsilTMC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇和乙酸(5+95)溶液为流动相进行梯度洗脱,流量1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长298 nm。在此色谱条件下5种水溶性成分可完全分离。丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的线性范围分别为27.4～191.8,0.742～5.194,0.526 5～3.683,2.268～15.88,7.728～54.10 mg.L-1,平均回收率分别为101.5%,100.0%,100.3%,101.0%,102.3%。按此法分析了不同地区出产的丹参药材,结果显示:所测药材中5种成分的含量有显著差异。     

UPLC法同时测定注射用丹参(冻干)中6种酚酸的含量

建立同时测定注射用丹参(冻干)中丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、异阿魏酸、丹酚酸G和迷迭香酸6种酚酸类成分含量的UPLC法。采用ACQUITY UPLCHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为0.1%甲酸(A)-乙腈(B)系统梯度洗脱(0 min,100%A;0~5 min,0%B~8%B;5~10 min,8%B~20 B;10~20 min,20%B~45%B;20~24 min,45%B~100%B;24~25 min,100%B~100%A;25~30 min,100%A),流速0.3 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm。结果显示6种酚酸类成分在一定范围内(丹参素钠101.5~1624.0μg/mL、原儿茶酸0.846~13.540μg/mL、原儿茶醛82.60~1321.60μg/mL、异阿魏酸5.01~80.16μg/mL、丹酚酸G 8.97~143.52μg/mL、迷迭香酸8.67~138.72μg/mL)线性关系良好(r=0.9990~0.9998),平均加样回收率在95.1%~102.9%范围内,RSD均小于3.0%。该法经验证准确可靠,可用于该制剂中6种酚酸的含量测定,为其多成分质量控制提供了科学依据。     

高效液相色谱/质联用测定大鼠血浆中双丹方活性成分

运用LC/MS联用技术,建立同时测定大鼠血浆中丹参素、原儿茶醛、芍药苷和丹皮酚4种活性成分的分析方法。在Agilent XDB-C8柱上,以乙腈-水-0.1%醋酸为流动相,流速0.6mL/min,柱温35℃,梯度洗脱于26min内完成分析。采用选择离子监测(SIM)方式,同时以负离子模式检测丹参素、原儿茶醛、芍药苷及正离子模式检测丹皮酚。该方法简单,准确,灵敏度和专属性较好。日内精密度和日间精密度分别小于5.2%和9.9%。据此研究大鼠口服双丹方提取物后10h内血浆中上述4种物质的含量变化,结果表明:丹参素和原儿茶醛浓度在30min达到峰值,而芍药苷与丹皮酚浓度分别在60min及20min达到峰值。     

复方丹参片中四种成分的高效液相色谱-电化学检测-紫外检测法分析

建立了电化学检测器与二极管阵列检测器联用的液相色谱(HPLC-ECD-DAD)同时分离和测定复方丹参片中原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和丹参酮ⅡA 等4种成分的分析方法。采用Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm i.d.,5.0 μm),以甲醇和0.4%磷酸为流动相(流速1.0 mL/min)进行梯度洗脱;ECD检测电压0.7 V,DAD检测波长270 nm,柱温30 ℃。实验结果表明,原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和丹参酮ⅡA质量浓度分别为0.3～9.0 mg/L,1.1～54.0 mg/L,1.1～11.1 mg/L和5.2～52.0 mg/L时与其峰面积呈良好的线性关系(线性相关系数均高于0.999),原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和丹参酮ⅡA的平均回收率(n=6)分别为97.8%(相对标准偏差(RSD)为2.15%),98.2%(RSD为2.07%),97.6%(RSD为2.18%)和97.2%(RSD为2.07%)。该法同时利用了ECD和DAD的优点,是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可以为复方丹参片的质量控制提供科学依据。     

RP-HPLC测定不同月份康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量

建立一种RP-HPLC方法,用于测定康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量,为康定鼠尾草开发利用提供依据。采用Thermo C18色谱柱,以V(甲醇)∶V(水)=75∶25为流动相,流速1 mL/min,检测波长270 nm,柱温30℃。结果表明3个化合物在测定的范围内具有良好的线性(r>0.9997),平均回收率为98.6%。康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量八月份较高。方法可作为康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量测定的方法。     

基于多指标含量测定结合化学计量学的不同产地丹参品质差异分析

为对比分析产地对丹参中酚酸类和丹参酮类成分的影响,采用超高效液相色谱（UPLC）及超高效液相色谱－三重四极杆质谱联用技术（UPLC－QQQ－MS）同时测定来自山东、河南、陕西、四川、安徽共408份丹参中23种化学成分的含量,并对数据进行多元统计分析。研究发现17种酚酸类及6种丹参酮类成分在不同产地丹参中均存在显著差异。山东的丹参样品中丹参酮类成分含量最高,四川的样品中丹酚酸B含量最高,安徽丹参的紫草酸、丹酚酸Y、丹酚酸A、丹酚酸D和丹酚酸E等的含量最高。多种模式识别方法均可用于不同产地丹参的判别分析,线性判别分析（LDA）为产地溯源的最佳模型。正交偏最小二乘法判别分析（OPLS－DA）表明不同产地丹参的化学成分差异较大,不同来源丹参的质量差异标志物不仅限于丹酚酸B、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA,其他丹酚酸类及丹参酮类也是重要的质量标志物。该研究对全国不同主产区的栽培丹参进行多指标含量测定及建模分析,所建立的定量方法专属性强、准确高效,可为不同产地丹参的质量控制及产地判别提供参考。     

丹参制剂中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的反相高效液相色谱法测定

建立了同时测定丹参制剂中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的反相高效液相色谱法。采用Phenomemex C1 8色谱柱(250×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比80∶20),流速1.0mL/min,检测波长270nm,柱温为35℃。隐丹参酮和丹参酮ⅡA均在0.10～10.0μg/mL范围内其峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9986和0.9991,检出限分别为25ng/mL和20ng/mL,平均加标回收率分别为97.6%和98.7%。该方法简便、快速、准确,适合用于丹参中药制剂的质量控制。     

高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定复方丹参片中12种成分及掺伪鉴别

采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定复方丹参片中12种成分并判定是否掺有三七茎叶. 流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脱）,通过变换波长结合紫外光谱扫描定性的方式对丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₃、丹参酮I、丹参酮II_A进行分析. 12种成分的线性关系良好（r≥0.999 2）,精密度（RSD<2.0%）、稳定性（RSD<2.0%）、回收率（96.1%~99.8%）均符合方法学要求,可用于复方丹参片的质量控制.     

RP-HPLC法测定复方丹参片中的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA

建立了反相高效液相色谱法测定复方丹参片(丹参、三七、冰片)中的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA。采用DiamonsilTMC18(250×4.6 mm,5μm)色谱柱,以V(甲醇)∶V(水)=75∶25为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长270nm。隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA分别在1.456~10.19μg/mL、2.160~15.12μg/mL和3.152~22.06μg/mL的范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为99.21%(RSD=0.63%)、100.3%(RSD=1.0%)、99.87%(RSD=0.63%)。可用于复方丹参片的质量控制。     

反相高效液相色谱检测丹参药材中4种丹参酮的含量

建立了测定丹参药材中4种丹参酮含量的反相高效液相色谱法，色谱条件：流动相为水(含0．5％三乙胺)-甲醇-四氢呋喃(45／55／5，V／V／V)，流速为1mL/min；PDA检测波长254m；4种成分丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮和二氢丹参酮的加样回收率在95．1％-101．2％之间，线性范围为0．08-2μg。该方法准确，稳定，重现性好。根据该色谱条件，测定了不同产地的丹参药材，结果表明：该色谱方法准确检测了生药中4种丹参酮的含量，适合于丹参药材的质量控制。     

微柱高效液相色谱法测定丹参中的几种有效成分

研究了用微柱高效液相色谱法测定丹参中的4种有效成分(丹参素,原儿茶酸,原儿茶醛,丹酚酸B)的方法。丹参样品中的几种有效成分用体积分数40%的甲醇超声振荡提取,然后以WatersXterraTMRP18(1.0×50mm,2.5μm)微柱为固定相,甲醇和体积分数1%的HAc溶液梯度洗脱为流动相分离,在该色谱条件下,丹参中的4种有效成分在4.0min内可达到基线分离;用紫外二极管矩阵检测器检测。方法标准回收率为97%~102%,相对标准偏差为1.6%~2.3%。用此方法可测定几种丹参样品中的有效成分。     

基于化学指纹图谱和抗血小板聚集效价的丹参质量评价

通过化学分析和生物活性评价考察丹参药材的品质差异,探讨丹参抗血小板聚集生物活性的主要贡献成分.采用高效液相色谱(HPLC)技术建立丹参药材HPLC指纹图谱,以抗血小板聚集相对效价作为指标,评价不同产地不同批次丹参药材的品质差异,构建基于化学表征及生物效价测定的评价模式.结果表明,不同批次丹参药材的HPLC指纹图谱相似度很高(相似度0.930~0.998),而其抗血小板聚集相对效价相差10倍,提示化学指纹图谱难以反映丹参的活性和质量差异.通过化学指纹图谱与抗血小板聚集生物效价进行谱效相关分析,筛选出与生物活性相关系数大于0.5的6个色谱峰:二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA及2个未知化合物.对上述4种已知化合物单体进行活性验证发现,隐丹参酮的抗血小板聚集活性最强,而其它3种丹参酮类化合物几乎没有体外抗血小板聚集活性.进一步比较丹参中高含量成分丹酚酸B与低含量成分隐丹参酮的活性贡献,结果表明,两者的活性贡献基本相当,说明隐丹参酮是丹参中低含量高活性成分,对评价丹参质量具有重要贡献度.     

大孔树脂分离纯化丹酚酸的研究

比较了D301R、D392、D380大孔阴离子交换树脂和X-5.AB-8、NKA-9、SP825大孔吸附树脂对丹参水溶性成分的吸附和解吸能力,筛选出效果较好的SP825进行分离纯化丹酚酸的研究.实验表明,大孔吸附树脂SP825能分离出纯度为95.32%的丹参素,在梯度洗脱条件下可得到以丹参素(水洗脱)和丹酚酸B(乙醇洗脱)为主的产品.在最佳吸附与解吸工艺参数下,丹参素、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸A和丹酚酸B的收率分别为:36.92%、80.39%、82.45%、43.07%和41.03%.     

靶细胞提取和高效液相飞行时间质谱联用分析预测丹参中的活性成分

建立靶细胞提取和与高效液相飞行时间质谱联用(HPLC-ESI/TOFMS)分析相结合进行丹参活性成分研究的方法,对丹参中可能的活性成分进行了推测。将靶细胞和丹参样品一起孵育培养,根据活性成分可以与靶细胞膜有特异性的结合或者进入靶细胞内的原理,用HPLC-MS方法对培养后细胞破碎液中的成分进行分析。从加药Raw264.7细胞和Ecv304细胞破碎液中检测到丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、紫草酸、迷迭香酸及丹酚酸B7种丹参中成分,在加药的HL7702细胞破碎液中检测出丹参素、原儿茶醛、咖啡酸及丹酚酸B4种丹参中的水溶性成分。结果显示:细胞破碎液中检测的成分为丹参在靶细胞中有吸收的成分,本方法可用于预测中药中的活性成分。     

基于定量指纹图谱技术的中药质量控制

定量指纹图谱技术是中药指纹图谱技术与多指标成分定量分析相结合的中药质量控制模式。定量指纹图谱技术的发展包括定量组分的制备、过程控制的指纹图谱技术和产品含量测定3个主要部分。本文以丹参为例,通过水提、醇沉、过膜、大孔树脂分离和工业色谱分离5个工艺流程制备了丹参定量组分,对各个工艺步骤以指纹图谱技术考察其稳定性和重复性。对丹参定量组分中的原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B 3个成分进行含量测定。3个成分的含量总和大于50%。定量组分的制备以现有的活性成分为目标,经过去粗存精的工艺过程,其质量标准得到了有效的提高。     

高效液相色谱双波长切换法测定石韦配方颗粒中8种有效成分

建立高效液相色谱双波长切换法同时测定石韦配方颗粒中原儿茶酸、咖啡酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 8种成分含量。采用Waters Atlantis T3-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)磷酸溶液作为流动相梯度洗脱,流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为260 nm和330nm,进样体积为10μL。8种成分在各自质量浓度范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均为0.999 9,方法检出限为16.45～89.15μg/L,加标平均回收率为95.76%～99.86%,测定结果的相对标准偏差为0.07%～0.44%(n=6)。该方法操作简单、高效,能同时检测石韦配方颗粒中8种成分的含量,可用于石韦配方颗粒样品中的含量测定及产品质量监控。     

HPLC法同时测定半枝莲中原儿茶酸和香草酸的含量

建立高效液相色谱法同时测定半枝莲中原儿茶酸和香草酸含量的方法。采用Zorbax SB–C18柱(150mm×4.6 mm,5μm),以0.2%磷酸水溶液–甲醇作淋洗液梯度洗脱,流量为1.0 m L/min,紫外检测波为260 nm,柱温为25℃。半枝莲中原儿茶酸和香草酸质量浓度分别在2.66~31.92μg/m L,2.86~34.32μg/m L与色谱峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数r=0.999 7,检出限分别为0.56,0.57μg/m L。原儿茶酸、香草酸的加样回收率分别为101.4%,99.4%,测定结果的相对标准偏差分别为1.76%,2.21%(n=9)。该方法适用于半枝莲中原儿茶酸和香草酸的含量测定。     

超高效液相-二极管阵列法同时测定马陆黄仙合剂中5个成分的含量

建立了超高效液相-二极管阵列(UPLC-DAD)同时测定马陆黄仙合剂中5种成分的方法.采用Waters BEH C18色谱柱(Φ1.7μm,100 mm×2.10 mm),甲醇和体积分数为1%的醋酸水溶液按不同比例梯度洗脱,流速0.61 m L/min,检测波长采用定制波长(0~3 min,232 nm;3~7 min,274 nm;7~10 min,249 nm).一次进样,同时测定了马陆黄仙合剂中芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和甘草酸铵的含量.在测定条件下线性关系良好(r为0.9991~0.999 9),平均回收率为99.70%~100.70%.方法简便、准确、可靠、重复性好,可用于马陆黄仙合剂中5个有效成分的同时测定,也可用于该制剂的质量控制.