应用高效离子交换色谱快速分离定量不同致病力的青枯菌

应用高效离子交换色谱和激光光散射仪在线检测,快速分离定量不同致病力的青枯菌。青枯菌经过高效离子交换色谱分离得到3个特征峰,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)平板鉴定和采用剪叶法回接番茄组培苗感染试验,发现这3个色谱峰所对应的青枯菌在致病力方面存在差异;其中峰3组分的致病力最强,峰1组分的致病力最弱。通过对青枯菌进样量与激光光散射仪的响应信号(峰面积)之间的线性关系研究,发现当青枯菌进样菌数为9×106~9×108时,菌数与色谱峰面积之间呈现出良好的线性关系,相关系数r=0.99。该项应用研究为不同致病力青枯菌的快速定量提供了一种新的分析方法。     

青枯雷尔氏菌特征菌株高效离子交换色谱快速分离条件的优化

建立了高效离子交换色谱和紫外检测系统快速分离青枯雷尔氏菌的细菌色谱方法。通过比较青枯雷尔氏菌悬浮在哌嗪-HCl缓冲体系和双蒸水后的菌体数变化及细胞形态变化,分析该缓冲液对青枯雷尔氏菌生长活性及细胞表面特性的影响。结果表明,青枯雷尔氏菌悬浮在平衡缓冲液、洗脱缓冲液和双蒸水中的菌体数量无明显差异,分别为6.467×10⁹、6.267×10⁹和6.233×10⁹ cfu/mL。透射电镜观察发现,3种溶液处理后,青枯雷尔氏菌均保持完整的细胞结构。研究了缓冲液pH值、流速及菌体细胞浓度对青枯雷尔氏菌色谱分离效果的影响,确定青枯雷尔氏菌的最佳色谱分离条件为：缓冲液pH值为8.0,流速为2 mL/min,菌体浓度大于1.0×10⁸ cfu/mL且小于1.0×10¹⁰ cfu/mL。该分离条件缩短了分离时间,提高了分离效率,为快速分离青枯雷尔氏菌提供了一种有效的手段,同时也为细菌等微生物的分离提供了新途径。     

六味地黄丸组分的二维液相色谱分离

以1个常规六通阀直接连接两支常规尺寸的色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.),构建简单的SCX/RP在线二维液相色谱系统,对中成药六味地黄丸组分进行了优化分离。样品经过第一维阳离子交换色谱(Hypersil SCX),洗脱产物分离后通过六通阀直接富集到反相分析柱(C18)顶端,被转移到第二维色谱柱上继续进行分离。经过11步不连续的线性梯度洗脱,二维分离系统出峰数量达到550多个,峰容量达到2266。构建的二维液相色谱系统结构简单,与一维色谱相比,具有分辨率高、峰容量大的特点。     

六昧地黄丸组分的二维液相色谱分离

以1个常规六通阀直接连接两支常规尺寸的色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.),构建简单的SCX/RP在线二维液相色谱系统,对中成药六味地黄丸组分进行了优化分离.样品经过第一维阳离子交换色谱(Hypersil SCX),洗脱产物分离后通过六通阀直接富集到反相分析柱(C18)顶端,被转移到第二维色谱柱上继续进行分离.经过11步不连续的线性梯度洗脱,二维分离系统出峰数量达到550多个,峰容量达到2266.构建的二维液相色谱系统结构简单,与一维色谱相比,具有分辨率高、峰容量大的特点.     

五加生化胶囊的高效液相色谱指纹图谱研究

应用高效液相色谱(HPLC)法建立五加生化胶囊的指纹图谱。采用ANGLAVenusil XBP-C18色谱柱(250×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为327nm,五加生化胶囊多数峰达到基线分离。采用2004A中药色谱指纹图谱相似度评价系统对11批样品的指纹图谱进行峰匹配,确定12个共有峰,11批五加生化胶囊指纹图谱的相似度均在0.90以上。结果表明:五加生化胶囊的HPLC指纹图谱特征性和专属性强,可较系统地用于五加生化胶囊的质量控制。     

尿毒症患者体液内中分子组分的多级色谱分离比较及质谱分析

采用凝胶色谱、离子交换色谱以及反相高效液相色谱法, 将尿毒症患者的尿样和血样以及正常人的尿样和血样进行了多级分离和比较. 通过凝胶色谱法, 从正常人的尿液以及尿毒症血清和尿液中分离出相对于正常人血清具有异常高浓度的A, B 2个中分子组分. 不同试样来源的A峰中分子物的离子交换色谱分离结果证明, A-3亚峰中分子物, 是尿毒症患者因肾衰难以通过尿液将其排除故而滞留在血清内的重要成分, 正常人却可以通过尿液将其排于体外. 将来自尿毒症血清及正常人尿液的A-3亚峰中分子物经脱盐处理后, 进行了基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析, 证明A-3组分由分子量分别为839, 873, 1007, 1106, 1680, 2015的6种化合物组成. 最后, 采用反相高压液相色谱法对A-3亚峰中分子组分进行了进一步分离, 得到了6个只含单一中分子化合物成分的组分. 至此, A-3组分内的中分子物得到了彻底的分离和纯化, 为进一步确定其结构以及病理生理作用奠定了基础.     

IEX/RP二维液相色谱中弱保留组分收集模式的构建及系统评价

以十通阀和捕集柱接口形式,构建了弱阴离子交换/反相(WAX/RP)二维液相色谱分离系统.通过将第一维离子交换色谱分析中的前部集中洗脱出的弱保留组分收集后单独分析,剩余样品进一步采用二维液相色谱分析,可以有效避免第二维色谱柱对特殊样品局部集中流出导致的第二维分离超柱容量问题,提高了系统的整体分离能力.使用4种蛋白胰蛋白酶酶解后的多肽样品评价该系统,在不分流的系统中共检测到115个峰.对第一维分离的前15 min分流后得到的组分单独分析,共识别出58个峰,后续的二维分离中共得到78个峰.2种方法相比,第二种方法检测峰数增加了21个,一些低丰度的组分在弱保留组分收集后被识别.     

基于Thiol-Click-COOH固相萃取的蟾蜍二烯内酯的类分离研究

本文建立了蟾蜍二烯内酯类化合物类分离的固相萃取(SPE)新方法,通过新型材料Thiol-Click-COOH将蟾皮总样中的蟾蜍二烯内酯类化合物分成蟾毒配基类(AAUBs)和蟾蜍毒素类(AACBs).首先,通过高效液相色谱(HPLC)以台阶等度洗脱方式对SPE方法的可行性进行评估,结果证明该方法可行;其次,通过200 mg的SPE小柱考察了添加剂、最大上样量及回收率.结果发现,添加少量醋酸有利于AACBs类化合物的保留,最大上样量为3%,回收率在96.6%~99.6%之间,相对标准偏差为1.6%.最后,运用该方法对蟾皮中的蟾蜍二烯内酯总样进行了类分离.淋洗液经高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析,两类化合物被完全分离,共得到组分AAUBs色谱峰24个,组分AACBs色谱峰20个,比总样色谱峰多出17个,解决了两类成分在反相色谱上共流出的问题.该方法淋洗液为乙醇-甲酸体系,不含水和盐,后处理方便.     

离线二维反相液相色谱/超临界流体色谱在瓜蒌子分离中的应用

发展了离线二维反相液相色谱/超临界流体色谱(2D RPLC/SFC)分离瓜蒌子的方法。实验在第一维采用反相色谱,按色谱峰收集从瓜蒌子样品中制备得到的12个组分(F_1~F_(12)),并将得到的组分在第二维使用SFC分离。这些组分在RPLC和SFC的分离对比说明,该二维方法具有良好的分离正交性,可至少检测到150个色谱峰,对于解决结构相似物质的分离、微量成分的富集表现出了明显的优势。SFC方法采用了乙醇-正己烷(3∶7,v/v)的混合溶剂作为改性剂,既提供了适当的洗脱能力,也保证了在上样量增加时满足样品溶解的要求。此二维分离体系可放大到制备水平用于化合物的制备,为瓜蒌子化学成分的纯化制备提供技术支持,为其物质基础研究提供参考。     

球等鞭金藻生长抑制物的高效液相色谱分析

采用硅烷化键合相C18反相色谱柱,以V(乙腈)∶V(水)=63∶37为流动相,0.3mL/min恒流洗脱,检测波长UV-235nm等条件,建立了一种利用反相高效液相色谱分析球等鞭金藻生长抑制物的粗提物、Sepha-dexG-15凝胶柱层析分离获得的3个组分、硅胶G薄层层析分离获得的4个组分等8个分离纯化产物中具有抑制活性组分的方法,并确定了具有抑制活性组分的保留时间。通过乙酸乙酯萃取球等鞭金藻老化培养液,得到了具有抑制活性的粗提物;粗提物经SephadexG-15凝胶柱层析分离后,获得3个具有抑制活性的组分;通过硅胶G薄层层析对此3个组分进行分离,在获得的4个组分中,仅有一个组分具有抑制活性。将粗提物与SephadexG-15凝胶柱层析分离获得组分的高效液相色谱进行对比,确定具有抑制活性组分的保留时间在3.827~6.002min范围内;通过与硅胶G薄层层析分离获得组分的高效液相色谱的再次对比,发现仅具有抑制活性的组分Ⅱ(Rf为0.637)中出现保留时间为4.875min的峰,并且相同保留时间的峰同样出现在具有抑制活性的粗提物以及SephadexG-15凝胶柱层析分离获得的3个组分的高效液相色谱中。结果表明:在优化的实验条件下,高效液相色谱中保留时间为(4.872±0.005)min的峰对应的组分正是具有抑制活性的组分。     

Antibacterial activity of the flavonoids from Dalbergia odorifera on Ralstonia solanacearum

Phytohemical investigation on the heartwood of Dalbergia odorifera resulted in the isolation of nine flavonoids. Their structures were elucidated as sativanone (1), (3R)-vestitone (2), (3R)-2',3',7-trihydroxy-4'-methoxyisoflavanone (3), (3R)-4'-methoxy-2',3,7-trihydroxyisoflavanone (4), carthamidin (5), liquiritigenin (6), isoliquiritigenin (7), (3R)-vestitol (8), and sulfuretin (9) based on their spectral data. All compounds were evaluated for their inhibitory activity against Ralstonia solanacearum. This is the first report about anti-R. solanacearum activity of the compounds from D. odorifera.     

含喹唑啉硫醚的杨梅素衍生物的设计、合成及生物活性研究

以杨梅苷为原料,通过活性拼接,设计并合成一系列含喹唑啉硫醚的杨梅素衍生物,其结构通过1H NMR、13C NMR、19F NMR和HRMS进行确证.生物活性测试结果表明,该类化合物对水稻白叶枯病菌(X.Oryzae)、柑橘溃疡病菌(X. Citri)和烟草青枯病菌(R. Solanacearum)表现出一定的抑制活性.其中, 5,7-二甲氧基-3-(3-((6-溴喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A15)对水稻白叶枯病菌的EC50值为13.9μg/mL,优于对照药叶枯唑(88.9μg/mL)和噻菌铜(68.1μg/mL);5,7-二甲氧基-3-(4-((6-氯喹唑啉-4-基)硫基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A3)、5,7-二甲氧基-3-(3-((6-氯喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A14)、5,7-二甲氧基-3-(3-((6-溴喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A15)和5,7-二甲氧基-3-(3-((6-氟喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A16)对烟草青枯病菌的EC50值分别为1.1,14.0,11.9和7.5μg/mL,优于对照药叶枯唑(38.5μg/mL)和噻菌铜(184.8μg/mL).活体实验结果表明,化合物A15对水稻白叶枯病菌的具有良好治疗活性和保护活性.通过扫描电镜成像初步探讨了目标化合物A3对烟草青枯病菌和A15对水稻白叶枯病菌的抑菌作用机制.     

快速柱前衍生HPLC法检测曲格列汀中(R)-3-氨基哌啶

以邻苯二甲醛(OPA)和3-巯基丙酸为衍生试剂,建立了柱前衍生高效液相色谱(HPLC)测定曲格列汀中(R)-3-氨基哌啶含量的分析方法。(R)-3-氨基哌啶与衍生剂在碱性(p H 10.5)条件下于室温反应30s,进行柱前衍生,并利用高效液相色谱-质谱对衍生产物进行定性分析。采用YMC-Triart C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,流动相采用0.05 mol/L乙酸钠(p H 6.0)-甲醇溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长331 nm,柱温30℃。(R)-3-氨基哌啶质量浓度在0.08~2.0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9993),定量限为1.6 ng,加标回收率在98.0%~10⁶.9%之间,相对标准偏差(RSD)为2.8%。该方法可用于曲格列汀中(R)-3-氨基哌啶含量测定。     

高效液相色谱-柱后化学发光法检测人体尿液中的卡托普利

在酸性条件下,Ce?氧化Ru(bipy)32+生成Ru(bipy)33+,同时氧化卡托普利生成二硫化物中间活性态([RS-SR]*),Ru(bipy)33+和二硫化物中间活性态之间相互反应产生强烈的化学发光。基于此,根据发光试剂Ru(bipy)32+水溶性好、试剂稳定等特点,将其加入到流动相中,通过高效液相色谱分离,建立了柱后化学发光快速灵敏检测卡托普利的方法。在以甲醇-0.01mol/L KH2PO4-1g/L Ru(bipy)32+(80∶20∶2,V/V)为流动相,流速为0.9mL/min,8.0×10-4 mol/L Ce?的优化实验条件下,方法的线性范围为2.0×10-7～1.0×10-4 mol/L(R2=0.9988),检出限为6.0×10-8 mol/L(S/N=3),并对1×10-5 mol/L卡托普利平行测定11次,相对标准偏差(RSD)为1.8%。将本方法用于人体尿液中卡托普利含量的测定,结果令人满意。结合化学发光光谱,对该体系发光机理进行了探讨。     

A simple, sensitive and efficient assay for the determination of D- and L-lactic acid enantiomers in human plasma by high-performance liquid chromatography

A new method for the simultaneous determination of D- and L-lactic acid in human plasma has been developed using high-performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection. This method is based on the reaction of lactic acid with (2S)-2-amino-3-methyl-1-[4-(7-nitro-benzo-2,1,3-oxadiazol-4-yl)-piperazin-1-yl]-butan-1-one (NBD-PZ-Val) in the presence of O-(7-azobenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HATU) and N-ethyldiisopropylamine (DIEA) to produce fluorescent diastereomeric derivatives that were easily monitored fluorimetrically at λ(ex)=490 nm and λ(em)=532 nm. The separation was achieved by use of a C18 analytical column (Synergy Hydro 150 mm x 3 mm i.d., 4 μm). The calibration curve was linear over the on-column concentration range of 10-200 μmol/L for D-lactic acid and 0.5-4.0 mmol/L for L-lactic acid. The sensitivity was good with a limit of detection of 5.24 μmol/L for D-lactic acid and 0.15 mmol/L for L-lactic acid. The analytical method was successfully applied to human plasma samples from normal healthy subjects.     

杜氏盐藻多糖的高效体积排阻色谱的保留特性及其分析方法的研究

通过对从杜氏盐藻中提取出的不同多糖级分在高效体积排阻色谱柱(Waters Ultrahydragel Linear,7.8 mm i.d.×300 mm,2根串联)上的保留特性的考察及其分离分析条件的优化,建立了高效体积排阻色谱分析盐藻多糖平均相对分子质量及其分布的方法。结果表明:流动相中盐的种类及其浓度、pH值对3种酸性多糖级分(特别是硫酸化多糖级分PD4a)的保留行为有显著影响;在柱温为45 ℃,流速为0.9 mL/min条件下,使用0.1 mol/L的NaAc水溶液作流动相基本上能消除非特异性吸附作用及分子间缔合等因素的干扰,使各多糖级分基本以非缔合状态按立体排除机制保留和分离。在优化的色谱条件下,测得的盐藻多糖5个级分的重均相对分子质量(Mw)分别为1548000,33000,67000,424000,10000;测得的硫酸化多糖级分PD4a的Mw和峰面积的相对标准偏差分别为1.7%和 0.88%(n=5)。     

离子色谱法分离分析Cr(Ⅲ)齐聚物

 用离子交换分析柱和二极管阵列检测器建立了水溶液中三价铬离子 [Cr(Ⅲ ) ]齐聚物的分析方法 ,研究了检测条件、流动相、离子强度对分析的影响 ,优化了分析条件。以 3mol/LNaClO4(内含 0 0 3mol/LHClO4)为流动相 ,在TSK GelSP 5PW离子交换分析柱 ( 75mm× 7 5mmi d ,10 μm)上对制备样品中的Cr(Ⅲ )齐聚物进行分离 ,以 2 0 0nm波长检测。该方法简便、快速 ,重复性好 ,10min内便可完成对制备样品中 3种Cr(Ⅲ )齐聚物的色谱分离。用该方法分析了各种制备条件下Cr(Ⅲ )齐聚物的含量 ,优化了制备条件。     

反相离子对色谱法测定油菜籽（饼）中的硫苷

 用反相离子对色谱法直接测定油菜籽（饼）中原 始硫苷成分,在样品预处理中加入抗氧化剂以防止吲哚类硫苷的氧化分解。研究了主要色 谱参数对硫苷组分保留值和选择性的影响,采用烯丙基硫苷或苯甲酸作内标,对硫苷的6种 组分进行了定性定量的测定。