液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱同时分析烟草中的20种游离氨基酸

建立了液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-IT-MS/MS)同时分析烟草中20种游离氨基酸的方法。烟草样品经萃取后过滤直接进样,无需进行衍生和固相萃取等其他前处理步骤。液相色谱采用HyPURITY C18反相色谱柱(200 mm×2.1 mm, 5 μm),采用1%(体积分数,下同)乙腈水溶液(含0.1%九氟戊酸)和90%乙腈水溶液(含0.1%九氟戊酸)为流动相进行梯度洗脱。结果表明,20种氨基酸的检出限(LOD)为0.01～0.05 μmol/L (S/N=3),线性相关系数均大于0.9977,峰面积测定的相对标准偏差(RSD)为0.78%～4.93%。该方法分析效率、灵敏度和选择性高,已成功应用于多种烟草样品中氨基酸的分析测定。     

超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法测定中药中马兜铃酸A和B的含量

利用超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱仪建立了中药中马兜铃酸A和B的定性定量分析方法。选取柴胡、生甘草、桔梗、龙胆泻肝丸、消胖丸、减肥茶等14种代表性样品,用甲醇-水(70:30, v/v)溶液加热回流提取,经Oasis MAX固相萃取柱富集净化后,在Eclipse RP HD C18反相柱(150 mm×2.1 mm, 1.8 μm)上进行分离;流动相为5 mmol/L乙酸铵水溶液(pH 7.5)-乙腈(75:25, v/v)。采用电喷雾离子源正离子模式(ESI+)和多反应监测模式(MRM)进行质谱分析。马兜铃酸A和B的线性范围分别为0.5～200 μg/L和1～200 μg/L,相关系数(r2)均大于0.995;检出限(LODs)分别为5 μg/kg和7.5 μg/kg;定量限(LOQs)分别为12.5 μg/kg和25 μg/kg。在100 μg/kg和500 μg/kg添加水平下,马兜铃酸A和B的回收率(n=6)范围分别为60.3%～96.4%和61.3%～94.7%,相对标准偏差均不大于10.2%。该方法灵敏度高,重复性好,操作简便,适用于中药材、饮片及中成药中马兜铃酸A和B的痕量检测。     

高效液相色谱-柱前衍生化法测定饲料中的含硫氨基酸

发展了一种饲料中含硫氨基酸的检测方法。样品经过甲酸氧化,将其中的胱氨酸和蛋氨酸分别氧化为磺基丙氨酸和蛋氨酸砜;再经酸水解后,采用2,4-二硝基氟苯进行柱前衍生化,衍生物经高效液相色谱分析。使用Elite AAK C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)分离;以0.05 mol/L乙酸钠和乙腈-水(50:50, v/v)为流动相,梯度洗脱,流速为1.2 mL/min;检测波长为360 nm;柱温为31 ℃。结果表明,胱氨酸在0.4～16.0 mg/L、蛋氨酸在0.7～29.6 mg/L范围内的线性相关系数分别为0.9999、0.9998;胱氨酸和蛋氨酸的定量限(信噪比(S/N)=10)分别为2.6 μg/kg和3.1 μg/kg;3次样品平行测定的胱氨酸和蛋氨酸含量的相对标准偏差(RSD)分别为0.79%和2.56%,加标回收率分别为100.28%～102.00%和105.72%～107.89%。该方法分析成本低,测定结果准确,灵敏度高,符合饲料中含硫氨基酸的检测要求。     

非衍生化液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中8种生物胺

采用液相色谱-串联质谱技术建立了同时测定动物源性食品中组胺(HIS)、色胺(TRP)、2-苯乙胺(2-PHE)、腐胺(PUT)、尸胺(CAD)、酪胺(TYR)、亚精胺(SPD)和精胺(SPM)8种生物胺(BAs)的分析方法。样品用乙腈-甲酸水溶液提取,用强阳离子交换柱(MCX)净化。在不进行衍生化的条件下,采用亲水作用色谱(HILIC)柱、以5 mmol/L的乙酸铵溶液和甲醇为流动相分离8种生物胺。结果表明,8种生物胺的线性范围为0.001～100 μg/L,相关系数(r2)均大于0.99。方法的检出限(LODs,信噪比为3)在0.001～1 μg/kg之间,定量限(LOQs,信噪比为10)在0.003～5 μg/kg之间。在8种基质中3个加标水平的回收率都在73.9%～106.3%之间,加标含量范围为0.003～50 μg/kg,相对标准偏差(RSD, n=6)在5.65%～18.6%之间。方法的灵敏度和回收率高,选择性好,能满足日常动物源性食品检测工作的要求。     

亲水作用色谱法测定组织中全基因组DNA甲基化水平

建立了亲水作用色谱(HILIC)测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚-氯仿提取组织中的DNA,提取的DNA用88%甲酸在140 ℃下裂解,经N2吹干后,加乙腈-水(9:1, v/v)溶解,用Waters BEH HILIC柱进行分离,在277 nm波长下检测胞嘧啶(Cyt)及5-甲基胞嘧啶(5-mCyt)含量。结果表明,以乙腈-10 mmol/L甲酸铵溶液(94:6, v/v)为流动相,流速为0.5 mL/min, Cyt与5-mCyt分离较好,保留时间分别为2.6与3.1 min。胞嘧啶的线性范围为1～900 μmol/L,相关系数为0.9999; 5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～64 μmol/L,相关系数为0.9998。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为54 nmol/L(柱中为0.54 pmol),定量限为250 nmol/L(柱中为2.5 pmol);在5～900 μmol/L的添加水平下,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的平均加标回收率为94.7%～100.5%,相对标准偏差小于1.48%。用该方法检测了结肠癌组织中DNA甲基化水平,结果显示该癌组织中全基因组的DNA甲基化均值为4.0%。该方法快速、简单,稳定性好,灵敏度较高,能满足全基因组DNA甲基化的检测要求。     

胶束电动色谱-激光诱导荧光检测法测定肌松弛药巴氯芬

以4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-Cl)为柱前衍生试剂,建立了胶束电动色谱-激光诱导荧光检测法测定肌松弛药巴氯芬(BAL)的新方法。经过实验条件的优化,采用15 mmol/L硼砂、20 mmol/L十二烷基硫酸钠、10%(v/v)乙腈、pH 9.75的缓冲体系,在分离电压为17.5 kV、柱温为25 ℃的条件下,压力进样3.45 kPa(0.5 psi)×3 s,巴氯芬及其内标物的衍生产物在7 min内实现较好的基线分离,线性范围为0.025～25 mg/L,相关系数为0.9999,检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为0.90 μg/L和6.25 μg/L。该方法被应用于巴氯芬制剂及加入巴氯芬对照品的尿液样品分析,回收率范围分别为101.6%～107.9%和107.0%～109.6%。该方法有望应用于巴氯芬药物制剂的质量监控以及为巴氯芬药物代谢的研究提供辅助手段。     

李晶1,2, 徐济仓1, 李雪梅1, 周建光2, 朱岩3, 缪明明1*超高效液相色谱法同时测定香精香料中14种禁限用物质

建立了超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-PDA)同时测定香精香料中14种禁限用物质的方法。样品经10%(v/v)甲醇水溶液(含1%(v/v)氨水)提取后进行UPLC测定。采用的色谱柱为Waters BEH C18柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm),流动相为10 mmol/L乙酸铵(含0.1%乙酸)和乙腈,梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为35 ℃,在200～500 nm范围内进行扫描检测。结果表明,该方法在12 min内可实现14种禁限用物质的分离和检测,在0.10～50 mg/L范围内具有较好的线性关系,各待测物的线性相关系数均大于0.995,检出限(以信噪比为3计)为0.32～2.51 mg/kg。在5、10、20 mg/L添加水平下待测物的平均回收率为93.0%～121.0%,相对标准偏差为0.51%～4.50%。该方法操作简易,灵敏度高,线性相关性好,重复性佳,可以满足国内对于香精香料样品中禁限用物质的检测要求。     

柱后衍生-高效液相色谱法测定烟草中游离氨基酸

建立了柱后衍生-高效液相色谱法分离检测烟草中19种游离氨基酸的方法。样品经0.005 mol/L的盐酸超声提取,高效锂阳离子交换柱分离后,采用OPA柱后衍生,荧光检测器检测。各氨基酸在样品含量范围内呈良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.999,在烤烟中的加标回收率为87.73%～100.02%,相对标准偏差在2.7%～6.0%之间,检出限0.13～2.00μmol/L。方法可用于烟草中游离氨基酸的分析。     

在线衍生-高效液相色谱法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物

建立了醋酸锌在线衍生高效液相色谱法同时测定血浆中色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)、5-羟吲哚乙酸(5-Hiaa)和犬尿喹啉酸(Kyna)的方法。以3-硝基酪氨酸为内标(IS),采用Hypersil C-18柱(250 mm×4.0 mm, 5 μ m),以250 mmol/L醋酸锌溶液(pH 5.5)-乙腈(95:5, v/v)为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温30℃。荧光检测波长设定:5-Hiaa为278 nm(λ_ex)/343 nm(λ_em), Kyna为244 nm(λ_ex)/400 nm(λ_em);紫外检测波长设定:Kyn和IS为360 nm, Trp为302 nm。4种物质的回收率在91.62%~114.17%之间;线性范围分别为2.50~320.00 μ mol/L(Trp), 0.32~15.36 μ mol/L(Kyn), 3.27~104.60 nmol/L(5-Hiaa), 14.00~464.80 nmol/L(Kyna);检出限分别为0.078 μ mol/L(Trp), 0.056 μ mol/L(Kyn), 0.690 nmol/L(5-Hiaa), 1.290 nmol/L(Kyna)。利用该方法对30例正常孕妇和28例女性健康志愿者的血浆进行测定,结果表明两组间Trp, Kyn和Kyna含量有显著性差异。该方法操作简便,重复性好,灵敏度高,适合于临床检测。     

基于纯水提取的烟熏鲣鱼中肌苷酸的提取方法

建立了一种基于纯水提取的新型烟熏鲣鱼中肌苷酸的提取方法。样品前处理采用95 ℃的纯水作为提取液,提取5 min。采用的色谱条件: 色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm),柱温为30 ℃,流动相为甲醇-50 mmol/L乙酸铵水溶液(5:95, v/v),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm。结果表明,该方法测定烟熏鲣鱼中肌苷酸含量的线性范围为1.0～120.0 mg/L;在0.40、2.00、4.00 g/kg (n=3)的添加水平下,回收率为84.6%～100.2%,测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.00%～6.12%;检出限(信噪比(S/N)为3)为4 mg/kg;定量限(S/N=10)为12 mg/kg。该方法与常规采用的基于高氯酸的提取方法相比较,提取效率提高了37.0%,并且该方法操作安全、与环境友好,对烟熏鲣鱼中肌苷酸含量测定准确度良好,对其他食品中肌苷酸含量的测定具有借鉴意义,是一种值得推广的样品预处理方法。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛尿液中的甲状腺抑制剂(英文)

Five thyreostats(TSs),namely tapazole,thiouracil,methylthiouracil,propylthiouracil,and phenylthiouracil,were determined in bovine urine using ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UHPLC-MS/MS)in positive electrospray ionization mode.Extraction and clean-up were achieved using a ChemElut cartridge with tert-butyl methyl ether,without a derivatization step.Separation was achieved on an Acquity UPLC SS T3 column.The mobile phase was acetonitrile and water containing 0.2%(v/v)formic acid.The mass spectrometer was operated in multiple reaction monitoring mode.Urine samples were spiked with TS solution at levels corresponding to 5,10,15,and 20μg/L.The accuracy(internal standard corrected)ranged from 92%to 107%,with a repeatability precision(relative standard deviation,RSD)less than 15%for all five analytes.The RSDs within-laboratory reproducibility was less than 26%.The decision limits(CCα)and detection capabilities(CCβ)were obtained from a calibration curve and were in the ranges of 3.1-6.1μg/L and 4.0-7.4μg/L,respectively.The CCαand CCβvalues were below the recommended concentration,which was set at 10μg/L.The results show that the described method is suitable for the direct detection of TSs in bovine urine.This method can also be used to determine TSs in porcine urine.     

直接进样-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法同时快速测定水中12种微囊藻毒素和1种节球藻毒素

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱快速检测水中12种微囊藻毒素(MCs)和1种节球藻毒素(NOD)的分析方法。水样经甲醇等体积稀释,聚醚砜(PES)滤膜过滤,滤液直接进样分析,以0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液和0.2%(v/v)甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,采用ACQUITY UPLC BEH 300 C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)进行分离,在电喷雾正离子模式下以MRM方式进行检测,标准溶液外标法定量。方法的检出限为0.03~0.1μg/L,定量限为0.1~0.3μg/L。对自来水和河水样品进行加标回收试验,目标物的平均加标回收率为79.5%~123%,相对标准偏差为1.0%~20%(n=6)。该法简单、灵敏、准确,适用于水中12种微囊藻毒素和1种节球藻毒素的快速测定。     

柱前衍生-超高效液相色谱-串联四极杆质谱法测定茶叶中乙撑硫脲的残留

建立了茶叶中乙撑硫脲残留的柱前衍生-超高效液相色谱-串联四极杆质谱检测方法。样品采用乙腈提取,提取液经QuEChERS基质分散固相萃取净化后采用9-芴基甲基氯甲酸酯（FMOC-CL）柱前衍生;衍生溶液经BEH-C18色谱柱（100 mm×2.0 mm,1.7 μm）分离后进入串联四极杆质谱仪检测,采用同位素内标法定量;流动相为0.1%（v/v）甲酸-乙腈。该方法对茶叶样品检出限为1.3 μg/kg,定量限为4.2 μg/kg;加标回收率在97.7%~107.5%之间,相对标准偏差（RSD,n=6）在2.1%~10.0%之间;在1.0~203.4 μg/L范围内线性回归系数r为0.9993。该方法灵敏度高,重现性好,定性定量准确,可有效满足对茶叶中乙撑硫脲残留检测的要求。     

Analysis of free amino acids in Amur sturgeon by ultra‐performance liquid chromatography using pre‐column derivatization with 6‐aminoquinolyl‐carbamyl

A rapid, sensitive, and reliable ultra‐performance liquid chromatography (UPLC) coupled with photodiode array detection method was developed for the amino acid analysis of Amur sturgeon (Acipenser schrenckii Brandt). The method uses minimal sample volume and automated online precolumn derivitization of amino acids with fluorescent 6‐aminoquinolyl‐carbamyl reagent. The chromatographic separation was achieved by UPLC, which used a column with 1.7 μm particle packing that enabled higher speed of analysis, peak capacity, greater resolution, and increased sensitivity. Amino acid derivatives obtained under optimal conditions were separated on a Waters UPLC BEH C₁₈ column with Acetonitrile–acetate buffer as mobile phase. Matrix effects were investigated and good linearities with correlation coefficients better than 0.9949 were obtained over a wide range of 5–1000 μmol/L for all amino acids. The simple sample preparation and minimal sample volume make the method useful for the quantitation of 17 amino acids in Amur sturgeon samples. It is concluded that a rapid and robust platform based on UPLC was established, and a total of 17 amino acids of Amur sturgeon were tentatively detected. This method showed good accuracy and repeatability that can be used for the quantification of amino acids in real samples.     

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测动物组织中15种保水功能药物

建立了超高效液相色谱-串联质谱检测动物组织中15种保水功能药物残留的分析方法。样品经含1.0%（v/v）甲酸的乙腈溶液提取和Oasis PRiME HLB SPE柱净化后,采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）分离,以甲醇和0.1%（v/v）甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾电离（ESI）源、正离子模式下,采用MRM监测模式进行数据采集。在1.0~50.0 μg/kg范围内,15种保水功能药物的线性关系良好,相关系数均≥0.9949;定量限均低于1.0 μg/kg。通过添加回收试验表明,动物组织中15种保水功能药物的平均回收率为60.0%~111.0%,批内RSD为0.56%~11.5%,批间RSD为2.31%~14.8%。该方法满足动物组织中该药物多残留的检测要求,为应对动物源性食品中筛查风险隐患和监控非法添加提供了新思路。     

超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用方法测定血浆和尿液中的α-龙葵碱、α-卡茄碱和茄啶

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用方法,检测血浆和尿液中的α-龙葵碱、α-卡茄碱和茄啶。样品经2%(v/v,下同)甲酸水溶液等量稀释,再经混合型阳离子交换固相萃取柱(MCX SPE)净化,以0.1%甲酸乙腈溶液和含0.05%甲酸的5 mmol/L乙酸铵水溶液作为流动相进行梯度洗脱,在UPLC BEH C18色谱柱上实现分离,正离子电喷雾串联质谱多反应监测(ESI-MS/MS MRM)方式检测,基质匹配外标法定量。一次进样分析时间为5.5min。血浆和尿液中3种待测物的线性范围均为0.3~100 ng/mL,相关系数为0.997~0.999;样品的检出限为0.1 ng/mL,定量限为0.3 ng/mL;血浆和尿液中的平均加标回收率分别为82%~112%和96%~114%,相对标准偏差为4.0%~16%和2.7%~17%(n=6)。方法简单、准确、灵敏,适用于马铃薯中毒检测。     

超快速液相色谱-离子阱飞行时间质谱法测定肉制品中10种碱性染料

建立了肉制品中10种碱性染料的超快速液相色谱-离子阱飞行时间质谱(LC-IT-TOF-MS)检测方法。使用Waters AcquityTM UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)作为分析柱,以5 mmol/L乙酸铵水溶液-含0.1%(体积分数)甲酸的乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL/min。采用电喷雾离子化源,在正离子模式下进行检测。样品用乙腈提取,经弱阳离子交换(Oasis WCX)固相萃取柱净化,超快速液相色谱分离,外标法定量。结果表明,10种碱性染料在1.0～100.0 μg/L范围内线性关系良好,r2均大于0.9915,相对标准偏差(n=7)均小于8.54%。在2,10,25 μg/kg 3个添加水平下平均回收率为65.39%～119.18%。该方法简单、灵敏度高、分析时间短,适用于肉制品中多种碱性染料的同时测定。     

3,3′-二氨基联苯胺柱前衍生高效液相色谱法测定酒中双乙酰

以3,3′-二氨基联苯胺(DAB)为衍生化试剂,建立了柱前衍生高效液相色谱测定酒中双乙酰含量的分析方法。双乙酰与衍生化试剂DAB在室温条件下反应10 min进行柱前衍生,并采用Shim-pack VP-ODS色谱柱(250mm×4.6 mm,4.6μm)对衍生化产物进行分离分析,以水-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为0.7 mL/min,并采用配有二极管阵列检测器(DAD)的高效液相色谱仪测定,检测波长为254 nm。该法在双乙酰浓度为0.20~180μmol/L的范围内呈现良好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,检出限(S/N=3)为0.09μmol/L,定量限(S/N=10)为0.20μmol/L,日内精密度(RSD)为1.28%(n=6)。实际酒样品的加标回收率为92.0%~103.6%,RSD为0.69%~3.45%(n=3)。该法简便快捷,结果准确,稳定性好,可以用于白酒及红酒中双乙酰含量的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测水系模拟物中11种工业用抗氧化剂

建立了水系模拟物中11种工业用抗氧化剂的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。水系模拟物经ProElut PLS固相萃取柱浓缩富集,采用ACQUITY UPLCTM BEH C18超高效液相色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源电离,负离子多反应监测模式下进行监测,外标法定量。11种化合物在5.0~100μg/L范围内呈良好线性关系,相关系数r0.995,方法检出限为0.2~1.0μg/L,定量限为0.5~3.0μg/L。5.0、10.0和20.0μg/L添加水平下的加标回收率为61.4%~109.4%,RSD为3.9%~18.2%(n=6)。该方法操作简单、稳定、可靠,可以满足水系模拟物中11种抗氧化剂的定性确证和定量检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测水果中6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂及其质谱裂解规律

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定橙子、香蕉、苹果、菠萝中E-苯氧菌胺、嘧菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯和肟菌酯6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留的方法。采用计算机辅助谱图解析软件ACD Lab/MS Fragmenter对质谱裂解路径进行了分析。样品经乙腈提取,氨基固相萃取柱(SupelClean LC-NH2)净化,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)进行分离,以含0.1%(v/v)甲酸的10mmol/L乙酸铵溶液和含0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾正离子模式下,采用多反应监测(MRM)模式监测,外标法定量。结果显示,6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂在5~100μg/L(其中吡唑醚菌酯在1~20μg/L)范围内的相关系数(r2)均大于0.999。6种杀菌剂的加标回收率为60.4%~120%,相对标准偏差(RSD)为2.15%~15.1%(n=6)。该法能满足橙子、香蕉、苹果和菠萝中6种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量的检测要求。