柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸的光学纯度

用苯胺对四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸(TTCA)进行柱前衍生,将其衍生物在手性固定相上拆分,通过二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对其衍生物进行检测,建立了一种拆分TTCA消旋体、测定TTCA光学纯度的新方法。以正己烷和乙醇或异丙醇为流动相,在DNB-Leucine手性固定相上对TTCA衍生物进行了拆分,并考察了流动相组成和柱温对其衍生物分离的影响,获得较优分析条件,分离因子大于1.2。非手性试剂苯胺柱前衍生化法测定(R)-TTCA的光学纯度与旋光度方法比较,结果一致,相对偏差小于1.34%。     

柱前衍生化-HPLC测定仲丁胺对映体的纯度

用3, 5-二硝基苯甲酸对仲丁胺进行柱前衍生, 将其衍生物在CHIRALCEL OD-H手性固定相上拆分, 并通过二极管阵列紫外检测器对其衍生物进行检测, 建立了一种拆分仲丁胺消旋体、测定仲丁胺光学纯度的新方法. 以正己烷和乙醇或异丙醇为流动相, 在CHIRALCEL OD-H手性固定相上对仲丁胺衍生物进行了拆分, 并考察了流动相组成和柱温对该对映体衍生物分离的影响, 获得较好的分析条件, 分离因子大于1.2. 非手性试剂柱前衍生化法测定仲丁胺光学纯度与旋光度方法比较, 结果一致. 方法可用于仲丁胺对映体的质量控制.     

用非手性衍生化法提高肾上腺素类药物在手性固定相上的分离度

建立了高效液相色谱法分离肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的苄氧羰基衍生物对映体的方法.以氯甲酸苄酯为衍生化试剂,在室温、碱性条件下,对3种肾上腺素类药物进行衍生化反应.采用手性CHIRALPAKAD-RH色谱柱,在检测波长为226 nm条件下,考察了流动相、流速、柱温对对映体手性分离的影响.结果表明,肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素衍生物对映体分别在乙醇为流动相、流速为0.5 mL/min、柱温为25 ℃;甲醇-乙醇(体积比3:1)为流动相、流速为1.0 mL/min、柱温为25 ℃;甲醇-水-四氢呋喃(体积比150:20:7)为流动相、流速为0.5 mL/min、柱温为25 ℃时,分离效果最佳.     

手性固定相HPLC法拆分3-叔丁基己二酸对映体

用苯胺对3-叔丁基己二酸对映体进行柱前衍生后,在CHIRALCEL OD-H手性固定相上拆分,并通过二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测器对其衍生物进行检测,首次建立了一种拆分3-叔丁基己二酸消旋体和测定3-叔丁基己二酸光学纯度的新方法。考察了流动相组成、柱温和流速对该对映体衍生物分离的影响。结果表明,3-叔丁基己二酸衍生物对映体在正己烷-异丙醇(体积比90∶10)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,柱温为30℃时,分离效果最佳。在优化的实验条件下,分析在10 min内完成,分离因子和分离度均大于1.5。在质量浓度为2~160 mg/L范围内,(+)-3-叔丁基己二酸衍生物和(-)-3-叔丁基己二酸衍生物的回归方程分别为y1=2 116.4x1-3 541.3(r12=0.999 4)和y2=2 097.6x2-4 774.1(r22=0.999 1)。该方法操作简单、重复性好,可用于3-叔丁基己二酸对映体的质量控制。     

3-氨基-9-乙基咔唑衍生化寡糖混合物的高效液相色谱分离及激光解吸电离飞行时间质谱分析

建立了以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)为衍生化试剂对寡糖的标记方法。寡糖的还原端与AEC的伯氨基反应生成烯胺,再被NaBH3CN还原为二级胺,使得寡糖被AEC标记。衍生物通过反相高效液相色谱分离纯化,采用的色谱柱为Waters Symmetry C18柱(3.9 mm×150 mm,5 μm),乙腈和乙酸铵水溶液(pH 4.5)为流动相,梯度洗脱,在254 nm波长处检测,并以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析。在此衍生化条件和色谱条件下,葡寡糖衍生物分离良好,并且AEC衍生可显著提高葡寡糖的质谱检测灵敏度。该方法适用于寡糖的分离纯化和结构分析,并与生物质谱具有良好的兼容性,表明该方法在微量寡糖链分析方面有广阔的应用前景。     

PMP柱前衍生高效液相色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成

建立了柱前PMP衍生高效液相色谱法分离检测8种中性糖、2种糖醛酸及2种糖胺的方法。筛选出适合PMP衍生物分离的色谱柱为Ec lipse XDB-C18,以0.1 mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相,考察了pH值和乙腈体积分数对各种糖的PMP衍生物的保留及分离的影响,确定最佳pH值为6.7,最佳乙腈体积分数为17%;比较了不同衍生反应时间和萃取除杂前不同量盐酸中和反应产物时醛糖-PMP衍生物的峰面积大小变化,从而得到较佳的样品衍生化条件。应用优化的色谱条件和样品制备方法,测定了由杜氏盐藻提取纯化的多糖级分PD4 a和PD4b的单糖组成,其测定结果与高效阴离子交换色谱法的结果基本一致。     

κ-卡拉胶寡糖AEC柱前衍生物的LC-ESI-MS/MSn分离分析

以κ-卡拉胶为原料, 经盐酸水解得到一系列寡糖混合物. 以3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole, AEC)为衍生化试剂, 对酸解得到的κ-卡拉胶寡糖进行柱前衍生, 采用反相C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm), 乙腈和乙酸铵水溶液(pH 4.5)为流动相, 梯度洗脱, 在254 nm波长处检测, 建立了κ-卡拉胶寡糖衍生物的高效液相色谱(HPLC)分离以及液相色谱-电喷雾质谱联用(LC-ESI-MS)分离分析的方法, 并对AEC衍生后的κ-卡拉胶寡糖进行多级质谱裂解(MSⁿ), 进一步获得了κ-卡拉胶寡糖的结构信息. 该方法对κ-卡拉胶寡糖的结构分析、构效关系等方面的研究有参考价值.     

9-蒽醛衍生化-高效液相色谱法拆分α-氨基酸甲酯和几种脂肪胺对映体

采用高效液相色谱法,以9-蒽醛为衍生试剂,在5种多糖衍生物的手性固定相(CSPs)上对几种α-氨基酸甲酯对映体进行了手性分离。色谱条件如下: 流动相为含3%～10%(v/v)异丙醇的正己烷溶液,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm。结果表明,α-氨基酸甲酯-9-蒽醛亚胺衍生物在Chiralcel OD柱或Chiralcel OD-H柱上的手性分离结果优于其他CSPs,而且在Chiralcel OD柱或Chiralcel OD-H柱上全部得到了基线拆分(α=1.24～5.47, Rs=2.56～13.90), L-对映体在这两种色谱柱上的保留强于D-对映体。同时还考察了几种脂肪胺在5种多糖衍生物手性固定相上的对映体拆分效果,结果表明脂肪胺的9-蒽醛亚胺衍生物在Chiralcel OD柱或Chiralcel OD-H柱上的分离效果良好。该法可用于其他α-氨基酸酯和胺类化合物对映体的分析。     

27种胺类物质与间甲基苯甲酰氯的衍生化特点及LC-MS定性分析方法

研究了27种胺类物质在与间甲基苯甲酰氯的衍生化过程中,活泼氢与衍生化试剂的反应情况.建立了超高液相色谱-质谱分析27种胺类衍生物的定性分析方法.使用Waters ACQUITY UPLCHSS T3色谱柱(Φ1.8μm,3.0 mm×150 mm)为分离柱,乙腈和甲酸(体积比为0.1%)水溶液为流动相,采用2种梯度洗脱程序,经液相色谱分离后,质谱采用电喷雾电离源正离子模式,以各种胺类衍生化合物的选择离子[M+H]+监测模式进行定性分析.试验发现,仪器检出限可达0.2 mg/L,可以用于胺类物质的快速定性检测.     

高效液相色谱-电喷雾质谱联用分析PPMP衍生化的壳寡糖

以1-(4-异丙基)苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PPMP)为衍生化试剂在氨水介质中对壳寡糖链进行衍生化,衍生化产物用RP-HPLC分离和ESI-MS分析。结果表明在确定的衍生化条件下,PPMP和壳寡糖的衍生化产物主要为单分子衍生物,此单分子PPMP衍生物在ESI-MS的正负离子模式下均有较好的响应,并且在RP-HPLC柱上能够实现很好的分离。据此建立了PPMP柱前衍生HPLC/ESI-MS在线联用检测壳寡糖混合物组成的方法。该法可作为壳寡糖样品在质量控制、构效关系研究等方面的方法参考。     

Application of a new chiral derivatizing agent to the enantioseparation of secondary amino acids

A new chiral derivatizing agent, (S)-N-(4-nitrophenoxycarbonyl)phenylalanine methoxyethyl ester, (S)-NIFE, was applied for the high-performance liquid chromatographic separation of enantiomers of 19 unnatural secondary amino acids: proline, pipecolic acid analogues, piperazine-2-carboxylic acid, morpholine-3-carboxylic acid, thiomorpholine-3-carboxylic acid and analogues containing the 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline, 1,2,3,4-tetrahydronorharmane, 1,2,3,4-tetrahydro-2-carboline and 2-benzazepine skeletons. Excellent resolutions were achieved for most of the investigated compounds by using a reversed-phase mobile phase system. The conditions of separation were optimized by variation of the mobile phase composition.     

R－四氢噻唑－2－硫酮－4－羧酸酯的合成

R-四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸甲酯可作为不对称合成试剂[1],它是由L-半胱氨酸甲醋盐酸盐与二硫化碳反应成环得到的.我们曾由R-四氢唾哇-2-硫酮-4-羧酸(TTCA)与乙醇反应在硫酸铁水合物催化下得到R-四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸乙酯,产率为68%.     

高效液相色谱测定单偶氮染料合成中的原料及中间体

采用高效液相色谱法,对以甲酸铬、4-氯-2-氨基苯酚和2-萘酚为原料合成反应产物单偶氮染料进行分析,以体积比为80∶16∶3∶1的乙腈-水-乙酸-三乙胺为流动相,C18柱为固定相,紫外检测器检测波长为313nm。实验探讨了色谱柱、流动相及pH值等因素对分离效果的影响,确定了最佳色谱条件。该法对甲酸铬、4-氯-2-氨基苯酚、2-萘酚、反应中间体及单偶氮染料的检出限(S/N=3)分别为0.30、0.12、0.17、0.21、0.05g·L-1,这五种组分回收率为95.9%～102.5%,相对标准偏差(RSD)为0.65%～4.16%。该方法简便快速,准确度高,可用于实际生产质量控制分析。     

High-Performance liquid chromatographic separation of enantiomers of unusual amino acids possessing cycloalkane or cycloalkene skeletons on a chiral crown ether containing stationary phase

Summary Direct reversed-phase high-performance liquid chromatographic methods were developed for the separation and identification of the enantiomers of mono- and bicyclic racemic β-amino acids:cis- andtrans-2-aminocyclopentane-1-carboxylic acids,cis- andtrans-2-aminocyclohexane-1-carboxylic acids,cis- andtrans-2-amino-4-cyclohexene-1-carboxylic acids,diendo- anddiexo-3-aminobicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylic acids anddiendo- anddiexo-3-amino-5-bicyclo[2.2.1]heptene-2-carboxylic acids. Enantioseparation was carried out by the application of a chiral stationary phase, Crownpak CR(+). The conditions of separation were optimized by changing the temperature, the flow rate and the pH of the mobile phase. Presented at: Balaton Symposium on High-Performance Separation Methods, Siófok, Hungary, September 3–5, 1997.     

C18柱串联冠醚手性柱高效分离3种芳香族氨基酸对映体

将C18柱与手性冠醚柱串联,建立了一种反相高效液相色谱法用于3种芳香族氨基酸对映体同时拆分的方法.考察了反相色谱流动相的组成、pH值、柱温、流速对对映体拆分的影响.实验结果表明,当流动相为HClO4-乙睛溶液(86:14,V/V,pH 2.0)、柱温20℃、流速0.4 mL/min时,3种氨基酸对映体可获得基线分离.进一步对比了C18柱、冠醚手性柱和串联顺序不同的4种分离模式,结果表明,C18柱不能拆分氨基酸对映体,仅能分离不同种类氨基酸;冠醚手性柱可分离氨基酸映体,但不同种类氨基酸色谱峰出现重叠;串联模式能实现3种氨基酸对映体的基线分离,实现双柱优势互补,而串联顺序对分离影响不大,仅影响色谱峰的峰形.     

原子转移自由基聚合技术制备新型手性配体交换色谱固定相及对手性化合物的拆分

采用原子转移自由基聚合(ATRP)技术, 以溴代硅胶为引发剂, CuCl/2,2'-联吡啶(Bpy)为催化体系, 水为溶剂, N-丙烯酰基-L-脯氨酸为单体, 室温下在硅胶表面进行聚合反应, 制得硅胶接枝聚N-丙烯酰基-L-脯氨酸分子刷. 通过改变ATRP反应体系中单体的量, 制备了3种不同键合量且键合量可控的手性配体交换色谱固定相, 利用元素分析和热重分析对其进行表征. 考察了配体接枝率、 流动相Cu²⁺浓度、 pH值和柱温等对DL-氨基酸和α-羟基酸拆分的影响, 优化了色谱分离条件, 探讨了拆分过程的热力学. 结果表明, 所合成的手性配体交换色谱固定相能够分离9种DL-氨基酸和α-羟基酸, 其中DL-酪氨酸、 DL-色氨酸和DL-苏氨酸3种氨基酸可同时进行拆分, 且拆分过程由熵控制.     

Separation of N-nitrosoamino acids by C18 reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography and compatible detection by electrospray ionization mass spectrometry.

Four non-volatile N-nitrosoamino acids, namely N-nitrososarcosine, N-nitrosoproline, N-nitrosothiazolidine-4-carboxylic acid and N-nitroso-2-methyl-thiazolidine-4-carboxylic acid were separated by C18 reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography (HPLC) using 1.4 mM C16-cetyltrimethylammonium chloride in methanol-water-acetonitrile (60:35:5, v/v) as the mobile phase. The N-nitrosoamino acids were sensitively detected by negative electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) in the form of the deprotonated carboxylate anion, [M-H]-. Compatibility problems associated with HPLC separation and ESI-MS detection, such as formation of solvent cluster ions and the effects of co-eluting anions of the ion-pairing reagent, were systematically investigated. The optimized experimental conditions for separation and detection of N-nitrosoamino acids were described.     

正相高效液相色谱法分离和测定2—（4—羟基苯氧基）丙酸

采用在硅胶柱（ＺＯＲＢＡＸ ＳＩＬ）上，以正己烷：乙酸＝７０：３０：２．５为流动相及ＵＶ检测器（２５４ｎｍ）的高效液相色谱法分离和测定２－（４－羟基苯氧基）丙酸。在选定的色谱操作条例上，２－（４－羟基苯氧基）丙酸与杂质对苯二酚等之间具有良好的分离效果。该方法具有较好的重现性和准确性。     

Determination of marker residue of Olaquindox in fish tissue by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

Methyl-3-quinoxaline-2-carboxylic acid (MQCA) is the last major remaining detectable metabolite of Olaquindox in animal tissue. A rapid, sensitive and specific ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) method was developed for the detection and quantification of MQCA in fish tissue using deuterated quinoxaline-2-carboxylic acid (d(4)-QCA) as internal standard. Various parameters affecting sample preparation, LC separation and MS/MS detection were investigated, and the optimal conditions concerned were determined. Fish tissue samples were subject to hydrochloric acid hydrolysis followed by Oasis MAX solid-phase extraction clean-up; analysis was performed using UPLC coupled to electrospray MS/MS. The chromatographic separation was achieved in less than 5 min. The limit of detection and the limit of quantification were 0.1 and 0.25 ng/g, respectively. The average recoveries of MQCA, spiked at levels of 0.25-50.0 ng/g, were from 92.7 to 104.3%. The relative standard deviation values were <6%. The validated method was successfully applied to analyze 60 batch samples collected from the local market.