一种能直接染色鉴定氨基酸的薄层展开剂及其应用

1　实验部分1.1　主要仪器和试剂　　薄层色谱设备,微量加样器。所用试剂均为分析纯。20种合成蛋白质的氨基酸单标准对照液的质量浓度均为10g/L。其中,半胱氨酸先用2mol/L盐酸溶解;酪氨酸、色氨酸先用0 25mol/LNaOH溶解,然后再分别以蒸馏水稀释;其余氨基酸都用10mmol/LNaOH作溶剂。标准混合对照液由对应的10g/L的氨基酸单标准液等体积混合而成。显色液:质量浓度为7g/L的茚三酮乙醇溶液。1.2　样品处理　　按常规方法制备醇溶蛋白、谷蛋白、牛血清白蛋白、鱼精蛋白、酪蛋白等5种碱解的氨基酸供试液;羽毛粉经发酵微生物释放的蛋白酶水解…     

微波技术在烟草游离态及蛋白质结合态氨基酸分析中的应用研究

研究了微波萃取烟草中游离氨基酸和微波水解烟草蛋白质的样品前处理方法,对微波萃取和微波水解条件进行了优化。微波萃取后的游离氨基酸及微波水解后的氨基酸总量采用氨基酸分析仪测定,蛋白质中的氨基酸用差减法计算。微波萃取氨基酸的最佳条件为:盐酸浓度0.05 mol·L-1,物料比1∶20,微波萃取温度50℃,微波萃取时间10 min,该条件下得到的游离氨基酸萃取率与超声30 min的结果基本一致;微波水解蛋白质的最佳条件为:盐酸浓度6 mol·L-1,物料比1∶100,水解温度140℃,水解时间60 min,与传统水解24 h的结果基本一致。用微波辅助法萃取烟草中的游离氨基酸及水解烟草蛋白质,样品前处理时间大大缩短,分析结果令人满意。     

微波水解-液相色谱-原子荧光光谱法测定硒蛋白中的硒代氨基酸

针对酶解法测定硒代氨基酸操作复杂,时间长,水解不完全且水解产物不稳定等问题,建立一种微波水解-液相色谱-原子荧光光谱仪测定硒蛋白中硒代氨基酸的方法。样品经HCl(6 mol/L)微波水解后,调节pH值至7.5,采用阴离子色谱柱,pH=6.0的(NH_(4))_(2)HPO_(4)(40 mmol/L)溶液为流动相,流速0.6 mL/min,等度洗脱12 min的条件对硒代胱氨酸(SeCys_(2))、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)进行分离,用原子荧光光谱仪测定其含量。微波水解条件采用星点设计-响应面法进行优化,优选最佳水解条件为:称样量20 mg,水解温度150℃,水解时间40 min。SeCys_(2)、MeSeCys和SeMet均在0~100 ng浓度范围内呈线性关系,相关系数均大于0.999,检出限分别为0.07、0.03和0.14 mg/kg,RSD分别为5.6%、4.6%、3.7%(n=6)。用来测定硒代氨基酸,耗时短,成本低,水解完全,操作简单,水解产物稳定,能够科学评价硒蛋白中硒代氨基酸的组成,对硒蛋白产品的质量控制和溯源提供了科学方法,值得推广应用。     

高效液相色谱法研究氨基酸测定中鸡蛋样品的微波水解

利用Pico-Tag高效液相色谱法（HPLC）研究了氨基酸分析中一种新的水解方法——微波水解法,鸡蛋样品以内含1％苯酚的6mol／L盐酸作为水解液水解,仅需7min即可求解完全,平均回收率为95％,相对标准偏差小于2％。方法简便、快速、准确、重现性好,适用于不同样品的水解处理。     

HPLC Detemination of Amino Acids in Latex Hydrolyzates Deproteinized with Alkaline Proteinase

采用盐酸水解、邻苯二甲醛－氯甲酸芴甲酯（OPA－FMOC）柱前衍生反相高效液相色谱法测定了经碱性蛋白酶脱蛋白处理后的天然胶乳中可溶性蛋白质的氨基酸含量。从16种氨基酸的变化考察了所选酶对乳胶中可溶性蛋白质的水解性能,以氨基酸总量变化评价脱蛋白的效果。结果表明,所选用的碱性蛋白酶对胶乳中的可溶性蛋白的肽键都能水解,在水解过程中蛋白质的氨基酸的组成是变化的。该法对胶乳中可溶性蛋白质的检出限达1.5mg/L（进样5μL,S/N=2）,结果不受蛋白质中氨基酸组成变化的影响。对牛血清白蛋白的氨基酸组成分析结果表明,该法准确度高。     

高效液相色谱法在脱蛋白天然胶乳研究中的应用

采用盐酸水解、邻苯二甲醛－ 氯甲酸芴甲酯（ＯＰＡ－ ＦＭＯＣ） 柱前衍生反相高效液相色谱法测定了经碱性蛋白酶脱蛋白处理后的天然胶乳中可溶性蛋白质的氨基酸含量。从１６ 种氨基酸的变化考察了所选酶对乳胶中可溶性蛋白质的水解性能, 以氨基酸总量变化评价脱蛋白的效果。结果表明, 所选用的碱性蛋白酶对胶乳中的可溶性蛋白的肽键都能水解, 在水解过程中蛋白质的氨基酸的组成是变化的。 该法对胶乳中可溶性蛋白质的检出限达１ ．５ ｍｇ／ Ｌ（ 进样５ μＬ, Ｓ／ Ｎ＝ ２） , 结果不受蛋白质中氨基酸组成变化的影响。 对牛血清白蛋白的氨基酸组成分析结果表明, 该法准确度高。     

柱前在线衍生-HPLC内标法快速测定脑蛋白水解物注射液中的氨基酸

建立了利用高效液相色谱仪快速测定脑蛋白水解物注射液中氨基酸含量的方法.样品处理采用先提取后水解转化的方法,色谱分离使用反相C18分析柱二元高压梯度洗脱;使用二极管阵列检测器检测,波长为260 nm;分析时间为14 min.各氨基酸在4.5-900μmol/L范围内线性关系良好,相关系数为0.998 7-0.9999;检...     

Fmoc柱前衍生法用于高效反相色谱测定氨基酸

HPLC测定氨基酸,目前最为普及的衍生方法是邻苯二甲醛柱前衍生法,此方法最大的缺点是测不出具有亚胺基的氨基酸,如脯氨酸。 氯甲酸芴甲酯(9-芴甲氧羰酰Fmoc-Cl)是近年来用于多肽合成的新型氨基保护剂,它可以和全部氨基酸反应并生成荧光化合物,因此有可能做为分析全部氨基酸的荧光衍生剂。本文报告了以Fmoc-Cl对氨基酸做柱前衍生及反相色谱分离条件,并定量地测定了水解多肽中全部氨基酸的残基数。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定七种中药补养药中氨基酸

首次分离并测定了七神中药补养药中氨基酸，为其补益作用提供了科学依据．并建立了中药补养药的FMOC-氨基酸色谱测定方法。以FMOC-Cl(9-芴基甲氧基羰酰氯)为柱前衍生试剂，用反相高教液相色谱法测定氨基酸是国内报道甚少的新方法。该法衍生操作简单，衍生反应迅速．衍生物稳定，方法的灵敏度高、分辨率好，整个分析过程简捷，耗用时间短，优于用氨基酸分析仪分析氨基酸。常用的OPA(邻苯二甲醛)柱前衍生法不能直接测定二级胺类的氨基酸，该法则可直接测定一级及二级胺类的氨基酸．同时，该法受样品基质干扰少，从而为衍生物样品的氨基酸分析开辟了广阔前景。本文用该法测定了七种氨基酸，获得了较满意结果，并认为该法对中草药及重要天然植物资源的研究是一个简捷，准确且极其实用的新方法。     

天花粉蛋白化学 Ⅳ.天花粉蛋白的基本一级结构

前文报道从我国民间用于引产的中草药天花粉中提取到活性组分结晶天花粉蛋白和它的物理化学性质,N-端氨基酸顺序的测定及其溴化氰降解碎片CBa的顺序分析. 天花粉蛋白是一个由224个氨基酸残基组成的单一肽链的简单蛋白质,其N-末端残基为Asp,C-端顺序经羧肽酶A测定,并结合其水解动力学的计算机拟合为     

PTH-氨基酸的高压液相色谱分离

蛋白质和多肽是由各种氨基酸通过肽键相连而成,要阐明蛋白质的一级结构需先将其序列降解,然后测定依次降解出来的氨基酸。通常用Edman方法来降解蛋白质N-端氨基酸,使生成苯基海硫因氨基酸(简称PTH-氨基酸),而鉴定PTH-氨基酸常用的方法是气相色谱、薄层色谱和将降解生成的PTH-氨基酸再水解测定氨基酸的方法。近几年来,用高压液相色     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的结构研究

测定了短小芽孢杆菌碱性蛋白酶BP的分子量为19 500,分析了它的氨基酸组成。用N-溴代琥珀酰亚胺对酶进行了化学修饰,以紫外光谱法测得此酶含有2个色氨酸残基,其中一个残基为酶表现活性的必需基团,且位于分子表面。用荧光表面猝灭剂法推测另一个残基也位于分子表面或临近分子表面。通过其园二色谱证明此酶为无规则卷曲构象。     

气质联用技术鉴定颐和园彩画胶料及相关问题

为了鉴定颐和园彩画的有机胶料,利用气相色谱质谱联用技术(GCM S)对3个颐和园建筑彩画YH-1、YH-2、YH-3进行了分析。样品前处理包括氨水萃取蛋白、固相萃取C4柱排杂,微波辅助盐酸水解蛋白质、硅烷试剂进行氨基酸衍生化。以我国古代常用胶料动物胶、蛋、牛奶和不同配比的动物胶与蛋的混合胶作为标准胶料,以正亮氨酸为内标、利用气相色谱质谱联用技术测定胶料中的丙氨酸、甘氨酸等14种氨基酸含量。在分析胶料氨基酸组成特征的基础上结合主成分分析,鉴定出颐和园3个彩画样品均属于动物胶与蛋组成的混合胶,并对混合胶在绘画中的使用及其稳定性等相关问题进行了初步探讨。该研究丰富了颐和园彩画的制作材料,为我国彩绘文物胶料鉴定和为后期"原材料"的修缮和保护提供了科学依据。     

毛细管气相色谱测定胶原蛋白和卵清蛋白氨基酸

讨论了纳克量级(ppb)的18种氨基酸在石英毛细管住气相色谱的分离和定量测定。用此法对胶原蛋白和卵清蛋白水解氨基酸进行了定量。结果的精确度为0.8～7.3%。氨基酸的衍生化采用N-TFA-butyl系统,分二步完成,第一步在酸性介质中用亚丁醇酯化;第二步是用三氟醋酐酰化。氨基酸回收率在85%以上。蛋白质水解在6N恒沸点盐酸中充氮气,在145±2℃加热4小时完成。     

电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-OES)测定铅泥、铅烟灰中铟量

建立了用硝酸、盐酸、氢氟酸、高氯酸分解样品,氢溴酸-盐酸混合酸除去样品中锑和锡,采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)测定铅泥、铅烟灰中铟量。确定了仪器最佳测定条件,选择了最优分析谱线,精密度试验及加标回收试验验证了方法的可行性及准确性。该方法简单易操作,结果可靠。     

丝胶蛋白源Tn和T抗原的释放制备及质谱分析

以蚕茧丝胶蛋白源Tn抗原和T抗原为研究对象,采用“一釜法”、氨水催化法和链霉蛋白酶E(Pronase E)水解法对丝胶蛋白O-糖链进行释放,并通过固相萃取柱进行分级纯化,以高效液相色谱仪(HPLC)进行分离制备;利用电喷雾质谱(ESI-MS)、串联质谱(MS/MS)及在线液相色谱-质谱联用仪(Online LC-MS)进行了结构鉴定和定量分析.结果表明,丝胶蛋白中O-GalNAc含量为1.58μg/g, O-GalNAcGal含量为0.54μg/g,二者丰度比约为5.3∶1;并且氨水可高效释放出其还原性O-连接单糖GalNAc,通过液相色谱法可实现其精细分离纯化,而以等量Pronase E对丝胶蛋白水解可有效释放出Tn抗原和T抗原.     

用碳糊修饰电极测定氨基酸的伏安法研究 Ⅰ.色氨酸和酪氨酸在聚酰胺修饰碳糊电极上的电化学行为

用含１０％聚酰胺的修饰碳糊电极研究了测定色氨酸和酪氨酸的伏安法,发现在０．２ｍｏｌ／Ｌ盐酸－醋酸钠底液中色氨酸和酪氨酸有良好的氧化峰响应。结合２．５次微分技术,两种氨基酸的检测浓度线性范围良好,色氨酸和酪氨酸的相对标准偏差分别为５．２％和７．０％,检测限分别为０．０２４μｍｏｌ／Ｌ和０．０３４μｍｏｌ／Ｌ。检测特性比文献报道有较大的改善。文中对电极过程进行了讨论。     

蛋白质水解液中氨基酸组成的定量分析

以氯甲酸－9－芴基甲酯（FMOC－Cl）为柱前衍生化试剂在液相色谱上分离17种常见氨基酸的衍生物并测定其摩尔吸光系数。用绝对分析法和标准曲线法对标准氨基酸溶液进行了定量分析，除组氨酸外两种方法测定结果的相对偏差为5．00％以内。对氨基酸的稳定性进行了模拟水解实验，发现在110℃/24h的水解条件下，丝氨酸等不稳定氨基酸的降解较在150℃/1.5h条件下小。用绝对分析法测定测定了牛胰岛素不同水解条件下水解液中氨基酸的含量，大部分氨基酸的相对收率都接近100％。     

二阶导数紫外吸收光谱测定复合氨基酸注射液中的色氨酸和苯丙氨酸的含量

复合氨基酸注射液是含有11种氨基酸及甘露醇的复方制剂。文献曾报导用二阶导数光谱测定蛋白质及天然物中的色氨酸;徐绪温等使用双波长分光光度计,用导数光谱法测定了复合氨基酸注射液中色氨酸,本文提出用二阶导数光谱直接测定色氨酸和苯丙氨酸含量的方法。实验方法 (一)仪器与试剂所用仪器为岛津UV-240型自记式紫外分光光度计OP1-1附件。氨基酸标准物均为广州侨光制药厂提供的日本进口试剂,按药典检定合格;甘露醇,分析纯。复合氨基酸注射液由广州侨光制药厂提供,为内含11种氨基酸及甘露醇的无菌水溶液,     

质量平衡法测定盐酸海洛因纯度

研究了盐酸海洛因纯度的定值技术。对经筛选的盐酸海洛因原料进行液相色谱–质谱、红外光谱、核磁及离子色谱定性分析,采用质量平衡法对盐酸海洛因原料进行纯度测定。在基于色谱的质量平衡法的基础上优化了检测条件,确定了主成分的含量,用卡尔费休法测定样品水分含量,最终得到盐酸海洛因纯度定值为95.1%。该分析结果的标准不确定度为0.32%。