辣根过氧化物酶对心肌线粒体过氧化损伤的保护作用

以黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤自由基诱生系统建立了稳定的离体心肌线粒体的损伤模型，并应用此模型研究辣根过氧化物酶对心肌线粒体自由基氧化损伤的保护作用，结果表明，辣根过氧化物酶能抑制心肌线粒体中氧自由基的形成，降低膜脂的过氧水平，保护了线粒体膜酶活性，有效地防止自由基对线粒体结构和功能的损伤。     

动静结合 演绎精彩

所谓"动静结合",这里是指在研究的两个几何图形中,一个图形随着两点(一动一定或两个动点)之间线段长度的改变,根据题目条件其生成的图形也随之改变,即称之为"动图",另一个图形静止不变,即称之为"静图",两者结合叫动静结合.纵观2011年学业评价考试题,笔者发现这类试题呈上升趋势,它们集     

分子对接和动力学模拟提高嗜热蛋白酶PhpI的活力

通过分子对接和动力学模拟对嗜热蛋白酶的分子进行改造, 确定蛋白酶PH1704(PhpI)定点突变残基, 并通过分子生物学实验进行验证. 突变体K43C的蛋白酶活力提高了5.8倍. 分子动力学模拟结果表明, 经过8 ns的动力学模拟后, K43C突变体二级结构由野生型的S2片层(F11-E12-D13)变成环状结构. E12和K43均是活性位点的重要残基, 这种变化将导致活性位点的柔性增强, 有利于催化反应的发生.     

古细菌Aeropyrum pernix K1超嗜热酯酶APE1547的稳定性

研究了纯化的超嗜热酯酶APE1547的稳定性. 结果表明, 该酶的稳定性非常好, 蛋白的质量浓度为0.4 mg/mL时, 90 ℃的半衰期为20 h, 0.2 mg/mL时的半衰期为12 h; 而蛋白的质量浓度为0.04 mg/mL时, 保温2.5 h时残余活力仍在50%以上. 同时还研究了热变性时该酶表面疏水氨基酸的变化. 该酶的pH稳定性也很好, pH在6.5-9.0范围内作用24 h, 酶依然很稳定, 残余酶活力大于93％; 同时该酶还具有很强的耐有机溶剂的特性.     

高分子添加剂对纤维素酶糖化力的影响

研究了几种高分子材料对纤维素酶水解作用的影响,强聚阳离子(PⅠ、PⅡ)、中强聚阴离子(PⅢ)高分子材料能促进酶的糖化作用,而强聚阴离子(PⅣ)高分子材料则不能,添加PⅠ(1.3×10~(-1)mol/L)、PⅡ(1.3×10~3mol/L)、PⅢ(1.3×10~2mol/L)分别使纤维素酶棉花糖化力提高190％、45％、75％,初步探讨了高分子材料促进纤维素酶糖化力的机理。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的结构研究

测定了短小芽孢杆菌碱性蛋白酶BP的分子量为19 500,分析了它的氨基酸组成。用N-溴代琥珀酰亚胺对酶进行了化学修饰,以紫外光谱法测得此酶含有2个色氨酸残基,其中一个残基为酶表现活性的必需基团,且位于分子表面。用荧光表面猝灭剂法推测另一个残基也位于分子表面或临近分子表面。通过其园二色谱证明此酶为无规则卷曲构象。     

嗜热蛋白酶PH1704别构中心量子化学计算与突变体动力学简

通过量子化学计算,确定嗜热菌Pyrococcus horikoshii OT3的PH1704蛋白酶别构位点的关键残基为Arg113,Tyr120和Asn129. 其中,Arg113及Asn129与别构抑制剂结合,参与别构调控. Tyr120残基位于亚基交界面附近,并与亲核残基Cys100之间以氢键相连,可通过影响亚基聚合来影响酶的亲核催化. DJ-1超家族的4种构建蛋白的结构显示,120位点位于亚基交界面处,影响亚基的聚合,进而影响蛋白酶的活力,并间接参与别构调控. 分子生物学实验显示,突变体R113T/Y120P/N129D的kcat/km(L·μmol-1·min-1)值是野生型kcat/km值的6倍,h系数由野生型的0.86转变为1.3,负协同效应消失. 113和129位点处阴离子别构剂脱离,从而破坏113,120和129位点间的封闭环结构,使AC交界面α7螺旋(124~129,524~529)间聚合度增强;120位点残基由Tyr转变为Pro,与Cys100间氢键断裂,亲核进攻的阻力减小,从而使酶活力提高,别构负调控消失.     

N－羟甲基中卟啉诱导产生抗体的酶学性质研究

以Ｎ－羟甲基中卟啉为半抗原，通过动物免疫、细胞融合等技术筛选得到的细胞株１１Ｄ~１，该细胞株产生的抗体具有结合铁中卟啉的能力，且表现出过氧化物酶活力。进一步研究表明，该抗体对半抗原及铁中卟啉的亲和力分别为：１．１×１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ；抗体－铁中卟啉复合物催化反应时，对底物过氧化氢的Ｋ_ｍ＝１３．０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｋ_（ｃａｔ）＝８６ｍｉｎ~（－１），与自然催化速度相比，活力提高１．８×１０~４（ｍｏｌ／Ｌ）~（－１）。     

嗜热蛋白酶PH1704别构中心量子化学计算与突变体动力学

通过量子化学计算, 确定嗜热菌Pyrococcus horikoshii OT3的PH1704蛋白酶别构位点的关键残基为Arg113, Tyr120和Asn129. 其中, Arg113及Asn129与别构抑制剂结合, 参与别构调控. Tyr120残基位于亚基交界面附近, 并与亲核残基Cys100之间以氢键相连, 可通过影响亚基聚合来影响酶的亲核催化. DJ-1超家族的4种构建蛋白的结构显示, 120位点位于亚基交界面处, 影响亚基的聚合, 进而影响蛋白酶的活力, 并间接参与别构调控. 分子生物学实验显示, 突变体R113T/Y120P/N129D的k_cat/k_m(L·μmol^-1·min^-1)值是野生型k_cat/k_m值的6倍, h系数由野生型的0.86转变为1.3, 负协同效应消失. 113和129位点处阴离子别构剂脱离, 从而破坏113, 120和129位点间的封闭环结构, 使AC交界面α7螺旋(124~129, 524~529)间聚合度增强; 120位点残基由Tyr转变为Pro, 与Cys100间氢键断裂, 亲核进攻的阻力减小, 从而使酶活力提高, 别构负调控消失.