人乳头瘤病毒HPV-16衣壳蛋白的结构特征

人乳头瘤病毒HPV-16是引发子宫颈癌的主要元凶.研究HPV-16病毒的结构特点,对于二十面体病毒几何结构的认识、描述和疫苗设计具有重要意义.综述了HPV-16病毒的衣壳结构特征、衣壳蛋白,分析了它们之间的相互作用,并试探性地指出了HPV-16衣壳几何结构的数学问题.     

登革热病毒检测的生物传感技术

登革热病毒是由伊蚊传播的单链RNA病毒,属于黄病毒科.目前暂无靶向抗病毒药物及有效疫苗能够及时防控.由于其临床检测的重要性,近年来,陆续出现了检测登革热病毒感染的新方法,试图早期发现并控制这种感染.本综述主要阐述登革热病毒诊断相关标志物检测的生物传感技术,包括光学、电化学、酶联免疫吸附试验等生物传感方法,对不同检测方法...     

兔子朊蛋白结构稳定性的分子动力学研究(英文)

朊蛋白病是一种能够对人类和动物带来致命影响,并具有高度传染性的神经退行性疾病.兔子是目前已经报道的哺乳类动物中对朊蛋白病免疫的少数几个物种之一.我们将分子动力学和操控式分子动力学模拟相结合,研究了兔子正常朊蛋白的结构稳定性;同时讨论了蛋白结构的收敛性及刚性分布,并揭示了兔子朊蛋白中关键二级结构的动力学以及受力各向异性特征,证实了兔子朊蛋白结构的稳定性特征.     

寨卡病毒抑制剂的虚拟筛选、设计、合成及生物活性研究

由甲基转移酶和RNA聚合酶组成的多功能蛋白(NS5)是寨卡病毒复制过程中起主要作用的蛋白组分,其甲基转移酶(5M5B)部分是病毒复制和宿主固有免疫应答的中心参与者,因此被作为潜在抗寨卡病毒药物开发的首选靶标蛋白.将5M5B作为受体,利用其已知的结合位点与200多万个化合物小分子进行虚拟筛选,得到抗寨卡病毒的先导化合物2a,并对该先导化合物进行结构优化、改造、活性预测、化学合成、药理活性研究.使用~1H NMR和~(13)C NMR对所有合成的化合物进行了表征,并进行了体外活性测试.结果表明化合物3a[IC_(50)=(7.69±0.36)μmol·L~(-1)]的体外活性优于广谱抗病毒药利巴韦林活性[IC_(50)=(8.15±0.42)μmol·L~(-1)],本研究的方法与结果对寨卡病毒抑制剂的结构设计研究具有重要的指导作用.     

喷射式流动注射电化学发光免疫检测禽流感H9亚型

利用磁分离和生物素亲和素技术,形成亲和素化磁微球-生物素化抗体-抗原-钌标抗体的免疫夹心复合物,初步建立了体外免疫诊断试剂的制备方法,并利用喷射式流动注射电化学发光体系对制备出的禽流感病毒H9免疫复合物进行检测。实验选择最适的包被抗体,检测抗体和封闭剂,优化Ru标抗体的最佳稀释度。在生物素化的兔抗H9多抗作为亲和素化的磁微球的结合抗体,鼠抗H9单抗作为Ru(bpy)32+标记抗体,2%BSA作为封闭剂,1:50倍稀释的Ru-鼠抗H9单抗条件下,非特异性吸附最低。测定不同浓度的H9抗原,发现抗原浓度在3.125～100μg/mL范围内与电化学发光强度呈较好的线性关系。实验还测定了不同亚型的禽流感病毒、不同来源的毒株和鸡的棉拭子样品。     

金表面抗原抗体的固定及其荧光法的测定

抗原或抗体的固定是制作免疫传感器的基础 .免疫传感器由固定于载体的具有识别作用的抗原或抗体以及指示免疫反应的换能器组成 .金表面自组装技术固定生物分子既可用电化学检测 ,也可用光学检测和质量检测 ,因而近年来用金表面自组装技术固定生物分子的研究越来越多 .其原理是利用金硫键固定含巯基的化合物 ,然后用偶联剂将生物分子连接固定在金表面 ,或者直接将有巯基的生物分子固定在金表面 [1,2 ] .本文报道了在金表面自组装技术固定兔 Ig G和山羊抗兔 Ig G的方法基础上 ,建立了抗体竞争法、夹心法和抗体过剩法测定兔 Ig G和山羊抗兔 …     

纳米生物材料在抗病毒疫苗佐剂中的应用

病毒引发的传染病严重危害人类的健康,新型冠状病毒(COVID-19)感染的肺炎疫情已构成全球重大公共卫生事件。疫苗接种是有效防止病毒感染和控制传染病蔓延的重要途径。常规疫苗往往存在半衰期较短、免疫原性不强、靶向性弱、吸收慢、储存和运送要求高等问题。近年来,纳米生物材料由于具有较低的全身毒性,更强的组织靶向性,较高的比表面积和更低的免疫滴度,有望作为疫苗佐剂用于病毒感染性疾病的预防和治疗。本篇综述了纳米生物材料作为抗病毒疫苗佐剂的分类、作用途径和机制,并结合目前正在世界范围内流行的新型冠状病毒肺炎,描述了纳米生物材料在新冠疫苗中的应用。最后,总结了纳米生物材料在抗病毒疫苗佐剂中面临的挑战。     

中国试验成功非典疫苗

2003年11月22日,从国家食品药品监督管理局获悉,经过6个多月的努力,我国SARS疫苗研究获重大突破。动物试验显示,疫苗不仅能完全抵抗SARS病毒的攻击,而且没有毒副作用。 SARS疫苗研究项目是由全国防治非典型肺炎指挥中心科技攻关组组织实施的,参与项目的科研人员全部是国内疫     

DNA分子结构的多态性研究(Ⅲ)——生物大分子探针吖啶橙诱导λ-DNA由线型向环型的转变

病毒和细胞体内的DNA是以高度紧密的凝聚态存在的.自从在体外发现亚精胺、精胺可诱导无规卷曲的DNA形成有序、独特的凝聚结构形态以来,许多学者深入研究了多价阳离子的诱导特性,以期阐明DNA在病毒内的组装和染色体中凝聚作用的机制[1,2].     

菜豆凝集素抑制剂的设计与凝血活性

针对菜豆凝集素二聚体复合物的结构特征,利用计算机辅助药物设计的方法设计抑制剂以破坏复合物结构;进一步采用标准的Fomc保护氨基酸NT氨基的固相法合成纯化了小肽抑制剂.体外兔血红细胞凝集实验结果表明,该小肽对菜豆凝集素的凝血能力有一定的抑制效果.该方法为植物凝集素凝血研究及菜豆相关的食品安全问题提供了一个新思路.     

桑毛虫NPV—同源寄主细胞系SIE-Es-1离体系统的研究——Ⅰ.封存体和未埋入型病毒及其感染机制的探讨

本文首次报道建立了桑毛虫核多角体病毒(EsNPV)—同源寄主细胞系SIE-Es-1离体系统,根据NPV在离体细胞系和活体内复制的特征,综合NPV流行病的特点,对病毒两种表型提出看法:将封存病毒的多角体称封存体(OB);游离在多角体外的包括从多角体内释出的病毒称未埋入型病毒(NOV),籍此认为:NPV感染周期有两个循环,大循环(OB—OB)系指NPV从一寄主个体向另一个体或群体世代间作传播,OB具有NPV在寄主体外的存留史,又称贮存相;小循环(NOV—NOV)系指NPV在组织和细胞间作传播,为感染相,NPV活体和离体复制各具特点,前者两个循环共存,后者只有NOV—NOV循环。     

一组小鼠白血病细胞系的建立及生物学特性的研究

本支建立了一种经PHA-脾条件培养液刺激,在体外形成白血病干细胞克隆后,再经体内传代,发病后在体外连续培养建成白血病细胞系的新方法。采用此方法成功地建立了T抑制淋巴细胞白血病L7811-85,L7212-85细胞系,非T非B淋巴白血病L1210-86,B淋巴白血病P388-86及红白血病FLCL细胞系等。对上述细胞系进行了较系统的生物学特性研究。电子显微镜观察中发现,白血病细胞的病毒颗粒在体外传代时A型颗粒消失,C型颗粒出现。并发现在L7811-85细胞系培养上清液分离的组分中,有白血病相关抑制活性的存在。     

体积排阻色谱法定量检测9种型别人乳头瘤病毒原液中病毒样颗粒

据统计,5%以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致。HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生。例如,9价HPV疫苗可有效预防90%以上HPV相关癌前病变。人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原。VLP由360份衣壳蛋白L1组成。VLP的含量测定对HPV原液和HPV疫苗的质量评价至关重要。该文发展了一种以体积排阻色谱(SEC)为基础的9种型别人乳头病毒样颗粒的定量方法。实验优化了包括色谱柱类型、色谱柱孔径、流动相离子强度和流动相pH值在内的色谱条件。经过考察,以SHIMSEN Ankylo SEC-300色谱柱(300 mm×7.8 mm, 3 μm)为固定相,以含有300 mmol/L NaCl和50 mmol/L磷酸盐(pH 7.0)的缓冲溶液为流动相时,VLP的色谱峰更窄,从而可获得更高的响应和更好的灵敏度,因此选择该色谱条件用于VLP与基质的分离。优化所得的方法具有较宽的线性范围,良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于5.0%)和灵敏度(定量限为4.58~15.24 μg/mL)。将方法用于HPV原液中VLP的含量测定,监测VLP的稳定性。结果显示,HPV原液中VLP颗粒不稳定,于4 ℃放置一周后,VLP含量与生产后立即测得的含量相比存在一定程度的降解。此外,方法还可用于疫苗上清液中游离蛋白质的分析,监测铝佐剂对VLP的吸附情况。被测厂家的铝佐剂可较好的吸附VLP,无明显残余蛋白质检出。与传统的蛋白质定量方法相比,如Folin-酚法(Lowry法),该法具有操作简单、自动化程度高、分析通量高等优点,可实现VLP含量的批量化分析。     

水貂病毒性肠炎细胞培养灭活疫苗及其免疫研究

本文通过敏感性不同细胞系交替选育或新分离鉴定均获得了增殖滴度高达HA8192~×或TCID_(50) log_(10)~(9.7)以上的超高增殖率株MEV,证明S_(18株)和L_(12株)为最佳制苗用毒株。本研究创建了MEV组织培养的最佳方法与高效价无血清MEV抗原大批量生产和检验的最新工艺。在筛选出最适病毒灭活条件的基础上,研制成功了安金高效的MEV无血清细胞培养灭活矿油苗和铝胶苗,能常年大批量生产并广泛应用于全国。测定了两种佐剂疫苗免疫反应动力学变化规律,创建了细小病毒疫苗体液免疫效力和免疫保护率的检定指标及其实验动物模型。制定了MEV疫苗制造及检验规程。     

聚糖的合成及其在糖疫苗研究中的应用

糖类在各种生命活动过程中发挥着重要的作用,但聚糖的获得性问题和其相对较弱的免疫原性一直限制了糖化学生物学尤其是糖疫苗研究的发展.近年来,聚糖和糖复合物化学合成技术的进步很大程度上促进了糖疫苗(包括抗菌疫苗、抗肿瘤疫苗、抗HIV疫苗等)研究的兴盛.其中,寡糖一釜合成策略和固相合成策略大大提高了聚糖合成的效率;聚糖与载体蛋白偶联的复合物也成功提高了糖抗原的免疫原性.本文将结合本课题组的相关研究工作,简述糖类化合物化学合成的方法和策略方面的研究进展及其在糖疫苗研究中的应用,希望对更好地理解糖化学生物学特别是糖疫苗有所帮助.     

支持向量机和线性判别分析用于禽流感病毒编码蛋白识别

以支持向量机(SVM)和线性判别分析(LDA)对200条禽流感病毒、100条B型流感和100条C型流感病毒蛋白共400条为训练集样本,从表征序列的200个整体与局部变量中以逐步(stepwise)方法选取24个变量作为LDA模型的输入建立线性识别模型,病毒蛋白总识别率达99.8%,留一法交互检验总识别率为99.4%.从原始200变量中经主成分分析得16个主成分作为SVM的输入,以径向基核函数(RBF)SVM建立非线性识别模型,病毒蛋白总识别率为99.8%,留一法交互检验总识别率为99.2%.以100条禽流感、50条B型流感和50条C型流感病毒编码蛋白质共200条为测试集样本,得LDA模型,对其总识别正确率为95.4%,SVM模型对其总识别正确率为96.5%.识别结果表明,两个模型都可较好识别禽流感病毒蛋白,并且SVM对禽流感病毒蛋白的识别结果优于LDA.     

高效液相色谱测定疫苗中硫柳汞

建立了疫苗中硫柳汞含量的反相高效液相色谱测定方法。样品溶液经离心及膜过滤后直接进样分析,以甲-醇0.02 mol.L-1乙酸铵溶液(体积比30∶70)为流动相可有效地改善硫柳汞的峰形对称度,克服强酸性溶液体系下方法重现性差的不足。结果表明,该方法简便快捷、定量结果准确、重现性强,可用于疫苗生产和使用中的质量控制。     

家蚕核多角体病毒基因库

本文报道家蚕核多角体病毒基因组DNA经限制性内切酶SalI酶解,琼脂糖凝胶电泳分离,得0.70至 10.0kb大小不同的29种片段.所得 DNA片段与 SalI酶解之质粒pBR 322 DNA进行体外重组后,经转化大肠杆菌 HB 101菌株,获得带重组质粒克隆株.根据重组质粒DNA 中SalI酶插八片段的分子量、Southern法DNA杂交及多种限制性内切酶酶切点等方法鉴定,证明已将家蚕核多角体病毒DNA的24种不同大小的片段克隆在质粒 pBR 322 中.克隆的 DNA片段总长度占病毒基因组DNA的百分之八十。     

微悬臂免疫传感器用于单纯疱疹病毒的无标记测定

人类单纯性疱疹病毒(HSV)为人类易感病毒之一,在病毒性疾病的流行病学研究,分子生物学研究及临床诊治上倍受关注.传统的HSV感染实验室检测主要是HSV分离培养和血清免疫学方法,但敏感性欠佳,且费时费力,建立快速HSV检测方法非常有必要.     

HIV-1病毒DNA与整合酶结合后的构象变化

用分子动力学(MD)模拟方法优化了HIV-1病毒DNA与整合酶(IN)二聚体(IN2)复合物模型结构, 并分析了HIV-1病毒DNA结合IN2后的构象变化. 结果表明, 按照HIV-1病毒DNA与IN2结合能力的强度, 病毒DNA可分为五个区域: 非结合区、强结合区1、弱结合区、强结合区2和反应区, 并用结合自由能计算验证了该分区的合理性. 与未结合IN2的病毒DNA相比, 复合物模型中病毒DNA除了非结合区碱基外, 其它四个区域的碱基构象变化较大. 复合物模型中病毒DNA主链较大程度地偏离标准B型DNA以及结合部位的小沟变宽都是识别IN的结构基础. 模拟结果与实验数据吻合较好, 为基于HIV-1 IN的药物分子设计提供了一定的结构信息.