高亲和力抗eGFP纳米抗体的筛选与应用

将增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, eGFP）免疫羊驼后构建纳米抗体免疫库,固相淘选eGFP纳米抗体;构建E.coli Rosetta表达载体,诱导表达纳米抗体,并鉴定其结合活性及特异性;辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase, HRP）标纳米抗体,确定其工作浓度及稳定性;将纳米抗体与纳米磁珠偶联应用于免疫沉淀B13-EGFP融合蛋白。四免后抗血清滴度超过1.28×106,获得库容量为1.85×108 cfu的抗eGFP纳米抗体噬菌体展示文库;原核表达10种独特基因序列的纳米抗体,均为可溶性表达;采用ForteBio Octet确定出纳米抗体4-28与eGFP的亲和常数（KD）最高,达到9.67×10-11M;纳米抗体4-28与eGFP、绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）特异性结合;HRP标记纳米抗体4-28检测范围是1:10 000～1:25 000(浓度100～40 ng·mL-1),比市场上现有的检测二抗（稀释范围1:5 000～1:20 000）灵敏度更高;纳米抗体4-28偶联羧基化纳米磁珠,免疫沉淀B13-eGFP融合蛋白,实现了简单快速分离目的蛋白B13-eGFP。     

基于生物素化纳米抗体检测拟除虫菊酯代谢物3-苯氧基苯甲酸的研究

该研究在前期已制备获得的拟除虫菊酯代谢物3-苯氧基苯甲酸（3-PBA）纳米抗体（Nb）基础上,将其进行生物素化,并利用多聚辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（polyHRP－SA）进行信号扩增,建立了基于生物素－亲和素系统高灵敏间接竞争ELISA检测3-PBA残留的分析方法。对抗原抗体工作浓度、缓冲液条件（pH值、离子浓度、吐温－20浓度）及polyHRP－SA浓度进行优化后,所建方法对3-PBA的半抑制浓度（IC50）为1.7 ng/mL,线性范围为0.37～7.4 ng/mL,检出限（LOD）为0.15 ng/mL。将该方法用于人尿样品（高温酸水解后固相萃取净化）和环境水样品（简单过滤）中3-PBA的检测,加标回收率分别为87.0%～127%和78.0%～113%,相对标准偏差（RSD）不大于10%。该方法具有灵敏度高、操作简便,适用于生物与环境样本中3-PBA的快速筛查。     

一类抗体免疫下具有治愈率的HIV-1感染模型[英文]

本文主要研究一类抗体免疫下具有治愈率的HIV感染模型的动力学行为. 该模型不仅考虑潜伏阶段的感染细胞而且潜伏期的感染细胞可以治愈转化为健康的易感细胞. 通过构造Lyapunov函数, 证明了在一定条件下, 系统的无感染平衡点,无免疫平衡点以及感染平衡点的全局渐近稳定性.     

基于IgY的ELISA定量检测甲鱼系统性败血症球状病毒

为了对甲鱼系统性败血症球状病毒(STSSSV)进行快速检测,以抗STSSSV卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,Ig Y)为一抗,以羊抗鸡Ig G(HRP-Ig G)为二抗,建立STSSSV检测的间接酶联免疫吸附(ELISA)与血凝抑制(HI)实验,对两者进行了比较.运用ELISA对感染病毒甲鱼的血清、肝脏、粪便、及饲养环境水样进行了STSSSV检测.用ELISA分析了病毒稀释倍数及其2的对数值与OD492nm值间的线性关系,建立STSSSV的ELISA定量检测方法.结果显示:ELISA较HI更灵敏,其对STSSSV的检测灵敏度为3.98 ng·m L-1,能够在携带该病毒尚未显症的隐性感染的甲鱼血清和甲鱼粪便与养殖水中检测出STSSSV.ELISA对其他水产病毒无交叉反应,特异性强.ELISA定量检测限度范围为0.031~4μg·m L-1.本研究建立的间接ELISA方法为STSSSV的定性、定量提供了准确有效的检测手段.     

糖胺聚糖的荧光标记及其与硫酸软骨素抗体的相互作用

以1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺为催化剂,将糖胺聚糖(肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素A,B,C,D,E)中糖醛酸的羧基与氨基荧光素中氨基偶联,分别得到各荧光标记糖胺聚糖.将标记糖胺聚糖用点样仪点在硝酸纤维素包被玻璃芯片上,分别探讨其在硝酸纤维素薄膜上的保留率及其与硫酸软骨素抗体(克隆...     

抗体和寡核苷酸双标记纳米金生物探针的制备及生物学特性

纳米金通过静电吸附抗体, 与寡核苷酸共价结合制备双标记纳米金生物探针, 比较了双标记纳米金生物探针和单标记抗体IgG或ss-DNA的稳定性和反应性. 结果表明, 在水溶液中纳米金由于ss-DNA的结合使IgG抗体的吸附能力明显改善, IgG的吸附也影响二硫苏糖醇(DDT)对ss-DNA的解离作用. 双标记纳米粒上覆盖(50±15)条ss-DNA和(10±2)条IgG, 较单标记ss-DNA纳米金上的(70±15)条要少. 斑点免疫和杂交实验证明, 纳米金表面标记的IgG和ss-DNA具有良好生物学活性. 双标记纳米金生物探针在超微量蛋白质的检测中具有应用价值.     

抗体药物偶联物

单克隆抗体(单抗)药物是发展最为迅速的一个领域,在过去25年间大约有近30个单抗药物面世,主要用于抗癌和炎症;最近一种新的抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate,ADC)技术取得了极大的成功。ADC是通过一个特殊的化学单元将单抗和小分子药物连接起来,充分利用抗体原有的亲合性和选择性,以及小分子药物的强药效,来降低小分子药物的毒性或延长小分子化合物的半衰期。随着一些链接技术的成熟和ADC药物上市,未来ADC将成为治疗疾病的重要手段。为了成功研制出一个新的ADC,需要对单抗、小分子药物和链接进行不断优化。一些新技术的问世也将极大促进ADC的发展。     

Purification and Characterization of Protein Tyrosine Phosphatase MEG1 and Preparation of Anti-PTPMEG1 Antibody

<正>PTPMEG1 is an intracellular protein tyrosine phosphatase(PTP),which contains FERM and PDZ domains. This study focuses our attention on the expression,purification and characterization of catalytic domain of PTPMEG1(△MEG1) and preparation of its polyclonal antibody.A cDNA fragment encoding△MEG1 protein(amino acid residues 643—926) was amplified by PCR and then cloned into the pT7-7 vector.Both soluble and insoluble recombinant△MEG1 proteins were observed after induction by IPTG.Soluble△MEG1 was purified via two chromatographic steps,and the purified enzyme was characterized.With para-nitrophenylphosphate(pNPP) as a substrate,△MEG1 exhibited typical enzymatic characteristics of classic PTPs and classical Michaelis-Menten kinetics.Insoluble△MEG1,which was mainly distributed in the inclusion body of E.coli cells extracts,was purified by preparative electrophoresis gel for the preparation of the polyclonal antibody.A rabbit was immunized with△MEG1 purified by preparative electrophoresis to generate anti-△MEG1 antibody.Anti-serum was collected on 28th day after initial injection and purified via affinity chromatography.The purified polyconal antibody displayed a satisfactory titer and sensitivity.     

抗-CCP和RF联合检测对RA的临床诊断价值探讨

目的分析抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子联合检测对类风湿性关节炎的临床诊断效果。方法选2014年10月至2016年12月在广东省茂名市电白区中医院就诊的类风湿性关节炎患者100例(研究组),及同时期健康体检者100例(对照组)为研究对象,观察抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子阳性检出率。结果研究组患者抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子的阳性检出率均要高于对照组患者,两组数据之间进行比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子联合检测的灵敏度、特异度较高,是作为鉴别类风湿性关节炎疾病的重要指标,值得临床推广及应用。     

对克伦特罗具有高特异性的酶联免疫吸附分析法研究

合成了克伦特罗(CL)半抗原2-(1-(4-氨基-3,5-二氯苯基)-2-(叔丁胺基)乙氧基)乙酸,采用活性酯法将半抗原与牛血清白蛋白偶联合成免疫原,经免疫、分离、纯化获得抗CL多克隆抗体,建立了对CL具高特异性的直接竞争酶联免疫吸附分析(dc-ELISA)法。本方法对CL检测的线性浓度范围为1.0×10!4～1.0 mg/L,定量检测下限为0.13μg/L。在尿样中添加CL标准至含量分别为10.0和1.0μg/L,dc-ELISA法检测的回收率分别为90.0%～115.9%和80.5%～112.4%;相对标准偏差(RSD)分别为7.1%和12.6%(n=10)。特异性实验结果表明:抗体与CL结构类似物沙丁胺醇(SAL)的交叉反应率<0.3%,因此本研究所制备的抗体可有效避免现有克伦特罗ELISA试剂盒、胶体金检测试纸假阳性率高的问题。