电喷雾质谱在寡糖序列分析中的应用

选取具有不同结构特征的N-糖链、硫酸软骨素寡糖、人乳寡糖以及海洋来源的壳寡糖、褐藻胶寡糖、卡拉胶寡糖和硫酸岩藻寡糖等,对电喷雾质谱在寡糖的主链序列、分支位点、硫酸基取代位置确定、单糖组成和聚合度分析等方面的应用技术及碎片离子的断裂规律进行了总结.根据相邻同类碎片离子之间的质荷比差值可初步判断寡糖的单糖组成类型;通过与色谱分离技术联用或衍生化方法可提高寡糖的分辨率和离子化效率,并测得寡糖的分子量及聚合度;借助串联质谱及对寡糖还原端的特异性标记,可获得寡糖的还原端残基和部分序列信息;根据寡糖产生的特征碎片离子及其丰度大小可判断残基的特定位置和类型.另外,寡糖的分支通常作为一个整体发生糖苷键断裂或产生D离子,据此可判断分支点的位置;根据硫酸寡糖产生的特异性跨环断裂碎片,可以确定硫酸基的连接位置.这些规律和方法的总结为未知寡糖的结构和序列的分析提供了启发和指导.     

糖胺聚糖的荧光标记及其与硫酸软骨素抗体的相互作用

以1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺为催化剂,将糖胺聚糖(肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素A,B,C,D,E)中糖醛酸的羧基与氨基荧光素中氨基偶联,分别得到各荧光标记糖胺聚糖.将标记糖胺聚糖用点样仪点在硝酸纤维素包被玻璃芯片上,分别探讨其在硝酸纤维素薄膜上的保留率及其与硫酸软骨素抗体(克隆...     

柱前衍生高效液相色谱法分析海洋褐藻多糖药物的糖醛酸组成

采用三氟乙酸(TFA)分别将藻酸双酯钠(PSS)、甘糖酯(PMS)和古糖酯(PGS)3种海洋褐藻多糖药物进行降解,再与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行柱前衍生,建立了3种药物糖醛酸组成分析的高效液相色谱方法.结果表明:PSS、PMS、PGS的最适降解条件:在110 ℃下降解6 h,TFA浓度3 mol/L;最适衍生条件:反应温度70 ℃,反应90 min,PMP与供试品的摩尔比为12∶ 1,NaOH与供试品的摩尔比为2∶ 1;色谱条件为:0.1 mol/L 磷酸盐(pH 6.7)缓冲液-乙腈(82∶ 18,V/V),检测波长:245 nm,流速:1 mL/min.在此色谱条件下,甘露糖醛酸(M)和古罗糖醛酸(G) 分离良好,测得PSS、PMS、PGS的M/G分别为2.37±0.05、6.60±0 22和0.22±0 03,该方法具有良好的精密度和重现性,灵敏度高,适合于海洋褐藻多糖类药物的微量分析.     

亲水作用色谱在糖类化合物分析中的应用

糖类化合物的结构和组成分析对于探究糖的结构与功能的关系具有重要作用。亲水作用色谱(HILIC)对糖类等极性化合物具有良好的分离效果。该文介绍了适合糖类分析的常用HILIC柱固定相及其分离机制,论述了强洗脱溶剂比例、流动相p H值、缓冲盐浓度和色谱柱温度对HILIC分离效果的影响,并举例说明了HILIC法在单糖组成、糖胺聚糖二糖组成、寡糖聚合度、糖苷、糖脂、糖醇以及N-/O-糖链分析中的应用。     

利用糖芯片研究半乳寡糖与蓖麻凝集素和鸡冠刺桐凝集素间的相互作用

建立了用糖芯片技术研究寡糖与凝集素相互作用的方法.以新乳糖-N-四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、λ-卡拉胶四糖(L4)和琼胶五糖(A5)为原料,经还原胺化法分别将其与1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺偶联得到拟糖脂,再将其与卵磷脂和胆固醇按4∶2∶5比例混合制备成脂质体后,用全自动芯片点样仪将其点印在硝酸纤维素膜包被的玻片上制成糖芯片,并进行寡糖与凝集素的结合实验.结果表明,蓖麻凝集素(Rieinus communis agglutinin 120,RCA120)特异性识别非还原端糖残基为Galβ(1 →4)的寡糖,而鸡冠刺桐凝集素(Erythrina cristagalli lectin,ECL)特异性识别非还原端糖残基为Galβ(1→4)GlcNAc的LNnT.采用接触式芯片点样仪制备糖芯片,并用荧光扫描仪对糖与凝集素结合信号进行检测,增加了灵敏度和准确性.本方法不仅适合于糖与蛋白相互作用的研究,也有助于加快糖类药物的发现.     

糖类化合物PMP衍生分析进展

糖类物质的结构与组成分析在揭示其生物学功能方面发挥着重要作用,糖类化合物的衍生化分析是实现其高灵敏度定性和定量检测的有效方法。该文对一种条件温和、灵敏度高、选择性好的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)的衍生化分析方法在糖类化合物的单糖组成、聚合度、取代度、异构体分析以及在N/O-糖链的释放和定量分析等方面的应用进展进行了综述。     

固相酸解法制备古糖酯寡糖及其电喷雾质谱分析

以褐藻酸中分离的聚古罗糖醛酸(PG)为原料, 以三氧化硫-吡啶为硫酸酯化试剂, 采用正交实验法确定了制备高硫酸酯基取代古糖酯(PGS)的最佳工艺条件, 并采用2D-NMR分析对其结构进行了确证. 本文建立了一种新的环境友好型固相酸解方法以制备PGS的寡糖(即采用732#阳离子交换树脂这种固态酸对PGS进行降解). 结果表明, 当732#阳离子交换树脂用量为200 mg/mL、PGS的质量分数为2%时, 在100 ℃下降解6 h可得到重均分子质量(Mw)小于3000的PGS寡糖, 经Bio-Gel P6凝胶层析柱分离可以得到13个聚合度单一的寡糖组分F1~F13. 电喷雾质谱(ESI-MS)分析结果表明, F1~F13分别是聚合度为1~13的PGS寡糖.     

一种海洋弧菌(Vibrio sp. WYA)褐藻胶裂合酶降解特性研究

从海洋弧菌(Vibrio sp.  WYA)中得到一种褐藻胶裂合酶， 将其分别作用于寡聚甘露糖醛酸和古罗糖醛酸纯品(dp5~7)以及褐藻胶， 采用HPTLC和FPLC等技术对产物进行分析， 并应用ESI\|MS和NMR进行结构分析. 结果表明， 该酶最小识别片段为六糖， 终产物主要为三糖， 且识别和切割位点为甘露糖醛酸残基.     

几种寡聚古罗糖醛酸的制备和结构表征

以多聚古罗糖醛酸为原料,在稀酸加压条件下进行酸水解得到寡聚古罗糖醛酸混合物,用低压凝胶渗透色谱(LPGPC)和高效液相色谱(HPLC)进行分离纯化,并用荧光基团辅助碳水化合物电泳(FACE)检测纯度.运用IR,ESI/MS/MS,1D,2DNMR等方法对古罗糖醛酸二糖至五糖的化学结构进行了表征.     

污染肝素中多硫酸化硫酸软骨素的分步醋酸纤维素薄膜电泳分析

采用离子交换色谱法从污染肝素原料中分离出多硫酸化硫酸软骨素(OSCS),建立了分步醋酸纤维素薄膜电泳法分析污染肝素中OSCS含量的方法.结果表明,先以0.05 mol/L醋酸钡缓冲液(pH 5.0)电泳,再以0.15 mol/L醋酸锌缓冲液(pH 6.3)电泳,可以将肝素和OSCS完全分开,检出限为0.1 g/L; 通过灰度积分建立定量校准曲线,相关系数为0.9934,平均回收率为102.1%～106.1%; RSD为4.1%～6.0%.