用毛细管电泳研究酿酒酵母细胞凋亡过程

用乙酸和葡萄糖作为诱导试剂，研究酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）凋亡细胞的毛细管电泳特征及凋亡细胞DNA的荧光光谱特征。发现不同的诱导条件，凋亡细胞的形态、DNA片段化特征不同。荧光光谱证实：乙酸能与脱氧核糖核酸链上的特异位点相结合，形成一种新的加合物，从而断裂DNA；而葡萄糖诱导产生的凋亡过程是一种新陈代谢失调促凋过程，发现两者启动细胞凋亡程序的因素不同。     

键合紫杉醇的纳米胶束与C6胶质瘤细胞的相互作用

制备了键合紫杉醇(PTX)的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(PEG-PLA/PTX)的纳米胶束, 采用四氮唑(MTT)比色法、流式细胞术、透射电镜及激光共聚焦显微镜等技术, 考察了PEG-PLA/PTX胶束对C6胶质瘤细胞的影响, 包括C6细胞超微结构的变化和细胞周期的改变, 以及纳米颗粒在细胞内的分布, 探讨了PEG-PLA/PTX胶束对肿瘤细胞的作用机理. 结果表明, PEG-PLA/PTX胶束进入到C6细胞内, 聚集于细胞浆中, 通过与细胞核中DNA的作用改变细胞生长的周期, 造成在G2-M期的阻滞, 引起细胞的凋亡. 因此, PEG-PLA/PTX胶束有望用于脑胶质瘤的化疗.     

X波段微波辐照致心肌损伤及机理研究

 采用90 W/cm² X波段微波全身一次辐照大鼠10 min，分别于辐照后0，0.5，1，3，6，12，24 h断头处死，取左心室心肌组织，光镜观察心肌组织形态学损伤；TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡；RT-PCR检测大鼠心肌组织GSK3β，caspase-9和caspase-3 mRNA表达水平的变化；Western-blot法检测大鼠心肌组织GSK3β蛋白质磷酸化表达水平的变化；Caspase-9分析试剂盒检测心肌组织中caspase-9酶活性。研究结果表明：90 W/cm² X波段微波辐照可上调心肌组织GSK3β基因表达，使其蛋白磷酸化水平降低，解除了磷酸化对其活性的抑制，使GSK3β活性增强，从而参与了X波段微波辐照致心肌细胞凋亡的启动。90 W/cm² X波段微波辐照同时可使大鼠心肌组织中的凋亡相关蛋白激酶caspase-9和caspase-3基因表达上调，caspase-9酶活性增强，从而造成大鼠心肌细胞凋亡过程的启动，因此，GSK-3β及其下游介导的与凋亡相关的信号分子caspase-9和caspase-3的激活可能是X波段微波辐照致大鼠心肌细胞凋亡的重要途径之一。     

动物细胞凋亡相关基因p53和c-myc在大麦中的染色体定位

以人的原癌基因c myc和抑癌基因p53的cDNA为探针,经Southern杂交证明,它们在大麦基因组中存在同源序列.利用荧光原位杂交技术(FISH)进一步对大麦进行了染色体定位.在大麦有丝分裂中期染色体上p53有3个位点被检出,分别位于2L(第二染色体长臂)、2S(第二染色体短臂)和6L上,相应百分距离为84.27±0.75、46.24±15.44和19.23±0.53;c myc有2个位点被检出,分别位于5L和3S上,百分距离相应为75.90±6.62和47.63±5.20.利用改进的荧光原位杂交技术,使异源单拷贝或低拷贝基因在大麦姐妹染色单体上,同时出现信号的检出率达到了30%以上.     

负载紫杉醇的聚乳酸纳米纤维对宫颈癌的抑制作用

从细胞水平和动物模型两个层次上研究了负载紫杉醇的聚乳酸纤维毡诱导U14宫颈癌细胞凋亡和抑制小鼠U14皮下移植瘤生长的能力.将U14细胞在纤维毡存在下孵育48 h,经Annexin V-FITC及PI双染后行流式细胞分析.结果表明,载药纤维(折合紫杉醇浓度40)g/mL)组总凋亡细胞比例(25.6%)明显高于对照组(1.0%)和未载药纤维组(1.5%).建立U14宫颈癌皮下移植瘤小鼠模型,将其随机分为3组.A组为对照组,不做任何处理.B、C组小鼠以纳米纤维毡覆盖于肿瘤表面,覆盖率约为70%～75%.其中B组纤维毡为纳米聚乳酸电纺丝纤维,不载药,C组为同种材料纤维毡,载有33 wt%紫杉醇.经处理后第7、14天每组各处死动物5～7只,剥离肿瘤,照相,称重,计算抑瘤率.结果表明,载药纤维对U14宫颈癌皮下移植瘤有明显抑制作用(48%～56%).用未载药聚乳酸纤维包裹肿瘤表面,肿瘤质量与对照组无显著差别,说明聚乳酸纤维本身对肿瘤没有抑制作用,载药纤维组所观察到的抑瘤效果为紫杉醇从纤维毡中释放所致.     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Siha细胞增殖与凋亡作用的影响

为探讨海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Siha细胞株增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了细胞增殖情况,在流式细胞仪用Annexin V和PI双染检测了细胞的凋亡率,PI单染法测定了细胞周期,Hoechst 33258/PI荧光染色法观测了Siha细胞的形态学改变,RT-PCR法测定了宫颈癌Siha细胞株内Bcl-2,Bax基因表达。结果表明,海洋珍珠生物提取液在一定质量浓度范围内,以浓度依赖性的方式抑制宫颈癌Siha细胞的生长(P0.05);以0,6,30和60μg/mL海洋珍珠生物提取液处理细胞24 h,Siha细胞早期凋亡率分别为5%,7.1%,32.25%和31.95%,晚期凋亡比例为0.45%,2.85%,8.55%和23.2%;荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变;RT-PCR显示海洋珍珠生物提取液处理后宫颈癌Siha细胞内的Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高。提示海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性的方式抑制宫颈癌Siha细胞增殖,并通过降低Bcl-2 mRNA,升高Bax mRNA来诱导细胞凋亡。     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

12-羟基二十碳四烯酸与细胞增殖及凋亡关系研究进展

细胞维持正常增殖需要体内复杂而精密的调控,其中细胞内信号转导是极其重要的一方面,若细胞内的信号转导调控失调导致细胞恶性增殖就会形成肿瘤。众多研究表明,花生四烯酸的代谢产物12-羟基二十碳四烯酸（12-HETE）与正常细胞及癌变细胞的增殖、迁移密切相关。大多数肿瘤细胞都可产生12-HETE,在肿瘤发生时,较高的12-HETE浓度是重要的信号分子,并在多条信号途径中起重要作用。本文现就12-HETE与细胞增殖及凋亡关系的研究进展作一综述。     

酿酒酵母凋亡细胞的毛细管电泳行为研究

用醋酸诱导酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)作为细胞凋亡过程,用扫描电镜和流式细胞术两种检测技术确证其细胞凋亡特征：用800mmol／L乙酸诱导21h后的细胞在电镜图上出现明显表面皱缩、细胞壁内陷;流式细胞图上出现典型凋亡峰——亚二倍体峰。详细探讨其高效毛细管电泳的行为,发现凋亡细胞在300nm处的强吸收峰消失;凋亡细胞核在220nm处,12～18min之间出现了一个新的分离峰。研究表明,毛细管电泳非常适于对细胞凋亡过程进行动态特征监测。