寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因

用５个化学合成的寡聚脱氧核苷酸片段作为诱变引物，对枯草杆菌蛋白酶Ｅ基因（ＡｐｒＥ）同时进行体外诱变．转化子经打点杂交及温度梯度洗膜法筛选出了若干在５个预定位点同时突变了的突变子，其突变效率达到５０％．同时还得到了１个四点突变的突变子．突变子经ＤＮＡ测序分析，充分肯定了突变的可靠性     

新疆鹤虱属新分类群

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分子动力学研究抑制剂APV与HIV-1蛋白酶的作用机制

采用分子动力学模拟和结合自由能计算研究了抑制剂APV与HIV-1蛋白酶的作用机制. 研究结果表明范德瓦尔斯作用主控了APV与HIV-1蛋白酶的结合. 采用基于残基的自由能分解方法计算了抑制剂-残基相互作用,结果表明9个残基Gly27、Ile32、Val47、Ile50、Ile84、Ala28′、Gly49′、Ile50′和Arg87′与APV产生了大于1.0 kcal/mol的强相互作用,而且证明CH-π,CH-O相互作用和极性作用是其结合的主要形式. 期待该结果可以为以HIV-1蛋白酶为靶标的抗艾滋病药物设计提供理论上的指导.     

荧光假单胞杆菌胞外蛋白酶的纯化及热稳定性

从原料乳中分离获得一株荧光假单胞菌Rm12, 该菌株分泌的胞外蛋白酶具有很强的耐热性, 其发酵上清液经过硫酸铵沉淀、阴离子层析、疏水层析和分子排阻层析纯化得到SDS-PAGE均一蛋白酶, 经鉴定确认该酶是一种新的金属蛋白酶, 命名为Ht12, 对Ht12的基本特性和热稳定性进行了研究. 结果表明, 此蛋白酶分子量为45000, 含有较高的脯氨酸和二硫键, N末端氨基酸残基序列为MSKVKDKAIVSAAQAS, Mn2+对蛋白酶活力有促进作用. 该蛋白酶具有较高的热稳定性, 于160 ℃加热20 s, 保留活力3.8%.     

基质金属蛋白酶与天然黄酮醇类药物抑制剂识别机理的光谱学研究

基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteiriases, MMPs)是肿瘤细胞对正常组织的侵袭和转移过程中重要的调节因子, 可以水解多种细胞内、细胞外及细胞膜上的底物, 因而影响着多种细胞的行为.当MMPs表达异常时, 很多种病理会改变甚至恶化, 因此, MMPs已成为近年来备受关注的一类抗肿瘤药物靶标蛋白酶. 选用MMPs的几种天然黄酮醇类药物小分子抑制剂,利用荧光滴定光谱和紫外-可见(UV-Vis)吸收光谱相结合, 研究了它们与MMPs家族成员之一MMP-16之间的分子识别和作用机理. 研究结果表明, 这几种黄酮醇化合物不但对MMP-16显示出了较强的结合能力, 而且在结合模式、结合比和抗氧化性能等多方面都表现出了很强的结构-性能差异.     

双水相萃取法从风干香肠中分离提取蛋白酶

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的蛋白纯化方法。为了扩展该方法适应领域,同时为风干香肠形成过程酶系的研究提供具体方法。本实验研究了运用双水相技术分离提取风干香肠中蛋白酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度和类型以及盐浓度的影响进行了分析。确定了双水相组成体系为20%PEG1000(m/m)和25%MgSO4(m/m),在此体系中风干香肠的蛋白酶主要分布在上相,最高酶活12.37U/μg;纯化倍数为4.61;回收率为85%。通过分子筛层析对比,表明风干香肠经过双水相分离提取杂蛋白峰被除去,而蛋白酶峰几乎未受到影响,说明该双水相体系萃取香肠中蛋白酶具有良好的专一性。调解双水相pH值对蛋白酶的萃取没有影响,而添加电解质NaCl反而产生不利影响。     

沙田柚果肉汁中呋喃香豆素类化合物的液相色谱-质谱联用研究

采用反相高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术分析了沙田柚果肉汁提取液中呋喃香豆素类化合物.沙田柚果肉汁用乙酸乙酯和正己烷的混合液(体积比5:3)萃取,有机层经硅胶柱色谱分离后得若干个组分,用HPLC-MS对各组分进行定性鉴定.结果表明沙田柚果肉汁中含有6',7'-二羟基香柠檬素(6',7'-dihydroxybergamottin,6',7'-DHB)、香柠檬素(bergamottin)、5-甲氧基呋喃香豆素(bergapten)、5-甲氧基-8-异戊烯氧基呋喃香豆素(phellopterin)、6',7'-环氧香柠檬素(6',7'-epoxybergamottin)及二聚体对氧呋喃香豆素-6',7'-二羟基香柠檬素(简称FC574)6种呋喃香豆素类化合物.并经HPLC-MS/MS进一步验证了其化合物结构.     

CdTe量子点对胰凝乳蛋白酶的荧光标记

用巯基丙酸作为表面修饰剂在水相中制备了稳定的CdTe纳米量子点.利用量子点外层包被的巯基丙酸上的羧基,实现了量子点与胰凝乳蛋白酶的直接偶联.偶联后溶液的吸光度值略有增大而吸收峰位不变,同时荧光强度明显增强,荧光发射峰位稍有蓝移.通过荧光发射光谱确定了CdTe量子点与胰凝乳蛋白酶偶联的最佳反应条件为:pH 9.0,反应温度37℃,反应时间1.5 h.重点考察了NaCl浓度和胰凝乳蛋白酶浓度对量子点与胰凝乳蛋白酶偶联产物荧光强度的影响.     

宇佐美曲霉 L336酸性蛋白酶 发酵过程动力学研究

宇佐美曲霉栗色变种 L336是一株高产酸性蛋白酶的生产菌 ,采用转置培养法 ,对其发酵过程的 一些动力学特点进行了研究 ,结果表明 ,酸性蛋白酶是细胞利用内源营养从头合成的 ,属于非生长关联 型; 腺嘌呤是菌体生长的生长因子 ,代谢类似物对酶合成产生较大的抑制 ;而蛋白胨是酶合成的诱导因 子 ,发酵液溶氧水平较大地影响酶合成能力 . 本研究为其工业发酵工艺的构建提供了理论依据 .     

慈菇蛋白酶抑制剂的一级结构

慈菇蛋白酶抑制剂A和B经硫硫键还原及羧甲基化后,分别用内肽酶及溴化氰裂解,肽段经分离纯化后在气相蛋白质序列仪上进行序列分析,通过重叠肽段的拼接,阐明了全部一级结构.慈菇抑制剂A和B均由150个氨基酸残基组成,含有三对硫硫键.两者在结构上有91％的同源性,但与其它已知结构的丝氨酸蛋白酶抑制剂有明显不同.因而它是属于新的一族抑制剂.根据两者的结构特征.推测它们的活性中心均为Lys-Ser(44—45)和Arg-Tyr-Lys(77—79).在抑制剂A,B 13个残基差异中,其中第87位残基由Leu置换为Arg.这可能是引起两者抑制特性差异的主要原因.