根霉胞外羧甲基纤维素酶和β－葡糖苷酶的纯化研究

采用柱层析等步骤纯化了根霉Ｇ７的羧甲基纤维素酶及β－葡糖苷酶，回收率分别为４．５％和１９．６％．二种酶的最适酶反应温度都为５５°Ｃ，并都能在较大ｐＨ范围内保持稳定，其中羧甲基纤维素酶具有很高的耐热性，在１００°Ｃ水浴中保持１ｈ也仍可检测出约２０％的酶活性，最适反应ｐＨ为７．０～７．５；而β－葡糖苷酶的热稳性较差，其最适反应ｐＨ为５．０．该两种酶的分子量分别为２．５×１０４和９．５×１０４，而Ｋｍ值则分别为７．４０ｍｇｍＬ－１和０．２１３ｍｇｍＬ－１．     

聚乙烯醇重氮衍生物-聚甲基丙烯酸高分子复合物固定酶的制备和性质的研究

本文用聚乙烯醇缩对苯甲醛氯化重氮物和聚甲基丙烯酸复合物作为载体,制备了固定化纤维素酶和葡萄糖氧化酶。此固定化酶有较高的活性,贮存、反应稳定性和热稳定性比固定化前都有较大提高。     

等温滴定量热法和荧光滴定法研究十二烷基硫酸钠与纤维素酶的结合

用等温滴定量热法和荧光滴定法研究了阴离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS ）与绿色木霉纤维素酶相互作用的热力学，SDS结合纤维素酶的亲和力较弱，为较 小的放热反应，并伴随着一定程度的熵增，为焓和熵共同驱动的反应，而且存在着 显著的焓-熵补偿作用。该结合过程的摩尔恒压热容为较大的负值（-186 J·mol~ (-1)·K~(-1)），这表明疏水相互作用是形成复合物的主要作用力，SDS的加入使 纤维素酶的内源荧光发生猝灭，同时导致该蛋白荧光光谱最大发射峰位的红移和酶 活力的部分丧失，这表明SDS与纤维素酶的相互作用既包含结合反应也包含SDS诱导 该蛋白部分去折叠的过程。     

高分子复合物固定化纤维素酶的研究

<正> 固定化酶是将水溶性的酶用物理或化学方法处理,使之变成不溶于水的仍具有酶活性的酶衍生物。在催化反应中,它以固相状态作用于底物。固定化酶不但仍然具有酶的高度专一性及温和条件下高效率催化的特点,还可反复使用。这样,酶经固定后,稳定性有较大增加,可贮藏较长时间。 用高分子复合物固定生物酶是固定化酶的一个新的尝试。两种不同的高分子链通过氢键力、库伦力、范德华力、疏水键力等所谓次价键而聚集成高分子复合物。高分子复合物具有一些特殊功能,如优良的质量传递性能、对水、电解质的灵敏介电特性,对氧和水     

λ-卡拉胶有限水解物在蛋白质置换层析分离中的应用研究

λ－卡拉胶经过有限酸水解得到不同平均分子量的组分，选用平均分子量为21kDa的组分，作为蛋白质置换层析的置换制，用于纤维素酶的分离纯化。经过置换层析，使黑色葡萄状穗霉S607发酵液中难以通过常规的分子筛和离子交换层析分离的一个内切酶组分（EGⅢ）和一个β－葡萄糖苷酶组分得到较好的分离。     

提高纤维素酶水解效率和降低水解成本

在我国可大量转化乙醇的是纤维质材料.纤维质材料转化乙醇的关键问题是纤维质转化为糖的过程,提高纤维素酶转化效率的方法有:(1)对纤维质材料进行预处理;(2)研究纤维素酶的最适作用条件;(3)纤维素酶的重复利用;(4)合理的发酵工艺等.本文分析了纤维素的结构以及纤维素酶的作用方式,总结了目前研究较多的几种纤维质材料预处理方法,及其对纤维素酶水解率的影响,并对研究纤维素酶的最适作用条件、纤维素酶的重复利用以及合理的发酵工艺进行了综述和分析.     

绿色木霉纤维素酶分子侧链构象与侧链环境特征的研究

运用拉曼光谱分析技术能够揭示蛋白质分子基团振动特征,本文对绿色木霉(Triclwderrna viride)纤维素酶中的CBH Ⅱ在固态以及两种pH值的液态中酶分子的侧链构象与侧链环境状态进行了拉曼分析。结果揭示了CBHⅡ中胱氮酸的CαCβ-S-S’-Cα'Cβ'基团和C-S键,蛋氮酸(甲硫氮酸)的CαCβ-Cr-SC基团,HCβ-CγS基团和C-S键,以及半胱氮酸的HCβ-CγS基团和C-S键的构象特征。实验还证明14个色氮酸是部分暴露的,C2-C3-Cβ-Cβ侧链的扭转角[x^2.1]形式多样。在pH6．0和固体样品中,酶蛋白中酪氮酸均为强氢键供体,两种样品各有20．3％、25．1％是暴露于溶剂的。而pH8．0水溶液中酪氮酸酚羟基成键能力特点是既可做氢键供体,又可做氢键受体,它们有80％是暴露于溶剂的。     

低氮胁迫下苦荞根际土壤纤维素酶活性的响应机制：荧光光谱法测定

土壤纤维素酶参与土壤中养分的循环过程,分解纤维素为小分子糖分微生物生命活动提供能源物质,并且对生态系统有重要的指示作用。如何快速、精确的测定纤维素酶活性对土壤生态系统诊断、恢复等有重要指示意义。自然界中不同的氮肥处理及种植不同的苦荞品种均会对土壤纤维素酶活性产生影响。利用德国进口全自动进样酶标仪(InfiniteR 200 PRO),以4-Methylumbelliferyl β-D-cellobiopyranoside (Cel) 纤维素荧光物质为底物,将不同耐瘠性苦荞(迪庆苦荞-耐低氮;黑丰1号-不耐低氮)根际土壤以悬液形式用排枪吸取微量和荧光底物混合加入到96孔微孔板进行充分反映、培养测定土壤中纤维素酶活性,其中将对照板和样品放在同一个板块上,减少培养空间占用和操作时间。结果表明,除了苦荞成熟期的常氮处理,苗期和开花期的低氮处理条件下,纤维素酶活性均表现为迪庆苦荞根际土壤显著高于黑丰1号,迪庆根际纤维素酶活性在苗期低氮处理下高于黑丰39.50%;纤维素酶活性在迪庆苦荞的开花期和成熟期氮处理间有显著性差异,表现为常氮高于其他处理,而黑丰1号仅在开花期时常氮处理和其他处理之间有显著差异;灭菌处理酶活性显著低于常氮处理的54.29%,说明迪庆苦荞根际纤维素酶一部分来源于微生物的贡献,养分充足时微生物的活性更高,贡献越大。荧光光谱法分析出的纤维素酶活性表明耐瘠性品种迪庆苦荞可以通过增加根际土壤酶活性的方法来抵抗外界环境的胁迫,面对黄土高原养分贫瘠的土壤,可以考虑选种耐贫瘠的品种来降低成本增加收益。试验过程中,荧光标记的酶标仪测定方法与传统的测定方法相比更加快捷、准确和节约,同样适合大批量样品测定,可以为未来精准农业生产,测土配方施肥提供及时的数据支持。     

纤维素酶的二步分离纯化新工艺

 以普通定性滤纸为底物 ,经碱处理后 ,研究其对纤维素酶的亲和吸附作用。结果表明 ,普通定性滤纸对纤维素酶具有比较强的特异性吸附作用 ,能够从粗酶液中分离出纤维素酶 ,再经POROS 2 0HQ阴离子交换柱纯化后即可得到电泳纯的纤维素酶。该法大大简化了传统的纤维素酶纯化工艺 ,所得的纤维素酶活力极高 ,比活达 35 0U/mg以上 ,滤纸一步吸附后纤维素酶的纯化倍数为 9 5 5 ,活性回收率在 10 %左右。纯化后的纤维素酶为内切 β 葡聚糖酶 ,相对分子质量为 6 0 0 0 0 ,最佳 pH为 4 0 ,最佳温度为 70℃。     

纤维素酶水解老化纸张中纤维素物质的酶活力分析

应用3,5-二硝基水杨酸测定法,分析了纤维素酶水解老化纸张中纤维素物质的酶活力影响因素,根据酶活力确定了酶解反应条件。pH=4.8,温度为50℃,酶解时间为60min,加酶量为10kU/mL条件下,经纤维素酶水解后测得的还原糖量呈现一定的趋势,可以此来初步判定纸张纤维的老化程度。