十二烷基磺酸钠对大豆过氧化物酶活性和构象的影响

在不同的pH值体系中, 利用酶活测量、圆二色谱、荧光谱和电子吸收谱研究了十二烷基磺酸钠(SDS)对大豆过氧化物酶(SBP)活性与构象的影响情况. 在pH 2.6和4.2 的体系中, 少量的SDS分子可通过静电作用与SBP结合, 进而与SBP分子中的His169残基结合, 降低其与铁卟啉的配位能力, 使其Soret吸收带蓝移, 二级结构发生轻微的变动, 活性永久丧失. 在pH 5.2体系中, SDS和SBP分子都带负电, 由于静电排斥作用, SDS无法进入SBP的分子内部, 失去与SBP分子中His169残基结合的能力, 对SBP分子的二级结构没有影响, 仅对SBP分子的三级结构有所影响. 当SDS的浓度大于临界胶束浓度时, 由于胶束与SBP的静电排斥作用增强, 限制了铁卟啉中乙烯基的运动, 乙烯基与卟啉环的共轭程度增大, Soret 吸收带红移. 由于SBP活性可完全恢复, 此变化是可逆的.     

λ-卡拉胶有限水解物在蛋白质置换层析分离中的应用研究

λ－卡拉胶经过有限酸水解得到不同平均分子量的组分，选用平均分子量为21kDa的组分，作为蛋白质置换层析的置换制，用于纤维素酶的分离纯化。经过置换层析，使黑色葡萄状穗霉S607发酵液中难以通过常规的分子筛和离子交换层析分离的一个内切酶组分（EGⅢ）和一个β－葡萄糖苷酶组分得到较好的分离。     

Kinetic Studies on of Veratryl the Lignin Peroxidase Catalyzed Oxidation Alcohol by H2O2 in AOT/Isooctane/ Toluene/Water Reverse Micelles

The steady state kinetics of the lignin peroxidase （LIP） catalyzed oxidation of veratryl alcohol （VA） by H2O2 in a sodium bis（2-ethylhexyl） sulfosuccinate （AOT）/isooctane/toluene/water reverse micellar medium was studied and a comparison with the corresponding aqueous medium was made to understand the effect of the reverse micellar medium on the catalytic mechanism and kinetic parameters. Results indicated that the model reaction in the AOT reverse micelle followed the ping-pong mechanism with true kcat, Km,VA and KmH2O2 being 59.6min^-1, 13.9 mmol· L^-1 and 94.8 μmol·L^-1, respectively; inhibition of high level of H2O2 on LiP followed the reversible competitive pattern with Ki being 0.140 mmol·L^-1. The reaction mechanism and inhibition pattern in the AOT reverse micellar medium were the same as those in bulk aqueous medium, but the kinetic parameters except KmH2O2 were greatly different in the two media. The kcat and Ki values in the reverse micelle were approximately 2 and 20 times smaller than the corresponding values in the aqueous solution, but the Michaelis constant of VA was approximately 100 times greater than that in the aqueous solution. The above mentioned differences in the kinetic parameters were caused by the microheterogeneity and the interface of the AOT reverse micelle, which resulted in the partitioning of VA and H2O2, and by the changes of the conformation of LiP and the reactivity of the substrates.     

直链醇对反胶束体系中木素过氧化物酶催化活性的影响

根据研究发现, 在有醇作助表面活性剂的CTAB反胶束中木素过氧化物酶(LiP)不能表现活力, 而在水介质中CTAB对LiP的催化活性影响又不是很大. 为了揭示其中醇的影响, 本工作就不同碳链长度的醇对LiP酶催化性能的影响进行了研究. 由于CTAB反胶束体系中醇浓度较高, 且碳原子数大于4的直链醇在水中的溶解度又很小, 为此采用了LiP可在其中显示催化活性的CTAB正胶束、AOT反胶束和Brij30反胶束作介质, 通过研究这些介质中不同链长的醇对LiP催化活力的影响, 来探讨CTAB反胶束中木素过氧化物酶(LiP)不能表现活力的原因. 结果表明, 不管表面活性剂聚集体的结构、电性质及反胶束大小如何, 只要醇的浓度超过500 mmol•L^－1 (丁醇≥1200 mmol•L^－1), LiP在上述原本可显示活力的介质中均无催化活性. 据此推测CTAB反胶束中木素过氧化物酶(LiP)不能表现活力的原因主要是由助表面活性剂醇造成的.     

过氧化氢调控藜芦醇介导木素过氧化物酶催化氧化邻苯三酚红研究

木素过氧化物酶(LiP)催化H₂O₂氧化邻苯三酚红(PR)反应的氧化产物受H₂O₂与PR的摩尔比控制, H₂O₂与PR的摩尔比不同, 所得降解产物不一样. 分析表明, H₂O₂在LiP催化氧化PR过程中的双重作用(即低浓度的H₂O₂是LiP的激活剂, 高浓度的H₂O₂是LiP的抑制剂)是导致上述现象的根本原因. 藜芦醇(VA)对LiP催化氧化PR的反应有促进作用, 尤其是当H₂O₂与PR的摩尔比较高时这种促进作用更为明显; 然而PR对LiP催化氧化VA的反应却有抑制作用. 后者可以用来解释为什么在用白腐菌降解染料时在培养液中常常检测不到LiP的藜芦醇活力. 分析表明, VA的存在不但促进了LiP酶中间体LiP(II)和/或LiP(III)向LiP的转化, 使LiP的催化循环加速, VA生成的VA^＋·也间接氧化了染料PR, 从而使PR的氧化速率提高.     

非离子表面活性剂水溶液中木素过氧化物酶催化氧化藜芦醇反应稳态动力学研究

研究表面活性剂缔合体系中木素模型化合物的生物降解机制具有重要意义。本文以黄孢原毛平革菌在一定条件下分泌出的木素过氧化物酶（LiP)为生物催化剂,用分光光度技术研究了非离子表面活性剂TritonX-100存在下水溶液中LiP催化氧化藜芦醇（VA）反应的动力学。结果表明,在TritonX-100水溶液中,LiP催化氧化VA反应遵循乒乓机。稳态动力学参数测定表明,TritonX-100对上述酶促反应的最大反应初速率及VA的米氏常数影响不大,但使过氧化氢的米氏常数下降近50％。依据不同Triton-100浓度下（远低于、接近于和远大于其临界胶束浓度）酶促反应的动力学参数和VA的疏水性指数,我们认为该结果是表面活性剂单体对酶蛋白分子的修饰所致。