绿色木霉纤维素酶分子侧链构象与侧链环境特征的研究

运用拉曼光谱分析技术能够揭示蛋白质分子基团振动特征,本文对绿色木霉(Triclwderrna viride)纤维素酶中的CBH Ⅱ在固态以及两种pH值的液态中酶分子的侧链构象与侧链环境状态进行了拉曼分析。结果揭示了CBHⅡ中胱氮酸的CαCβ-S-S’-Cα'Cβ'基团和C-S键,蛋氮酸(甲硫氮酸)的CαCβ-Cr-SC基团,HCβ-CγS基团和C-S键,以及半胱氮酸的HCβ-CγS基团和C-S键的构象特征。实验还证明14个色氮酸是部分暴露的,C2-C3-Cβ-Cβ侧链的扭转角[x^2.1]形式多样。在pH6．0和固体样品中,酶蛋白中酪氮酸均为强氢键供体,两种样品各有20．3％、25．1％是暴露于溶剂的。而pH8．0水溶液中酪氮酸酚羟基成键能力特点是既可做氢键供体,又可做氢键受体,它们有80％是暴露于溶剂的。     

绿色木霉纤维素酶分子内氢键特征的研究

运用能够揭示蛋白质分子基团振动特征的激光拉曼光谱分析技术,对绿色木霉纤维素酶中的CBHⅡ在固态以及两种pH值的液态中酶分子内的氢键状态进行了分析。结果表明相对于纤维素酶固体干粉,液态中酶分子酰胺Ⅰ羰基氧原子作为氢键质子受体的能力为上升;酰胺Ⅱ与酰胺Ⅰ的β结构特征峰变化倾向相似。在3种样品中,酶蛋白中Trp均为强氢键供体,从成键能力方面证实了以往同类酶空间分析的结果。固体与pH 6.0水溶液酶蛋白中酪氨酸酚羟基成键能力也是强的。根据游离巯基分析可以判断绿色木霉CBHⅡ的成熟肽CBD与瑞氏木霉CBHⅡ的CBD有相似的二硫键构成。     

绿色木霉纤维二糖水解酶Ⅱ的X射线辐射损伤研究

根据半胱氨酸相关的拉曼光谱分析指标,采用X光管1.82 keV,40 mA,处理4 h的辐射条件,水溶液中绿色木霉纤维二糖水解酶Ⅱ的各种S—H伸缩振动拉曼谱带虽然偏移不多,但呈现了二极分化的演变状态。辐照后的样品中2 554 cm-1峰宽加大。辐照没有引起维系高级空间结构存在的二硫键断裂,二硫键键长有缩小变化,二硫键几何构象类型未改变,但各种异构体成分的相对含量有变化,辐射前半胱氨酸C—S键异构体特征模P_C型略多,辐射后P_N和P_H型增多。除半胱氨酸CH₂摇摆的贡献在辐射后有明显减弱外,此辐射条件没有造成拉曼技术所能证明的与巯基有关的蛋白结构的明显损伤,但可见有变化存在。