β-环糊精修饰SiO_2复合材料固相萃取-高效液相色谱法测定环境水样中芴、菲和荧蒽

采用β-环糊精修饰SiO_2复合材料(β-CD@SiO_2)固相萃取,高效液相色谱法测定,建立了环境水样中3种多环芳烃芴、菲和荧蒽的分析方法。考察了影响该复合材料固相萃取芴、菲、荧蒽的各种因素,在选定实验条件下,方法对目标物的富集倍数为30倍,芴、菲和荧蒽线性范围分别为17.0~3 300ng/mL、7.0~3 300ng/mL和3.0~3 300ng/mL,检出限分别为2.10、0.50和0.47ng/mL,回收率范围为96.3%~106.0%。所建立的方法成功用于湖水和下水道污水中芴、菲和荧蒽的检测。     

细交链格孢菌酮酸间接竞争酶联免疫检测方法及配套试剂盒的研制

建立了间接竞争酶联免疫吸附法检测食品中细交链格孢酮酸(Tenuazonic Acid,TA)残留,并研制快速检测试剂盒。采用肟化法对TA进行衍生化,活泼酯法偶联半抗原和载体蛋白得到人工抗原TAO-BSA和TAO-KLH,以TAO-KLH作为免疫原免疫雌性Balb/c小鼠制备特异性抗体。对包被浓度、包被时间、封闭液类型、抗体工作浓度、二抗稀释度、底物显色时间等参数进行研究,建立了TA残留间接竞争酶联免疫检测方法并进行了配套试剂盒的研制。该试剂盒半抑制浓度Ic_(50)为1.48ng/mL,检测线性范围为0.06~35.95ng/mL(R~2=0.9941);检测限为0.02ng/mL;加标样品平均回收率大于88.50%;试剂盒的批间和批内平均变异系数分别为2.84%和9.49%,与食品中常见真菌毒素交叉反应率均小于1%。     

用四氨基铝酞菁共振光散射技术测定纳克级核酸

痕量核酸对四氨基铝酞菁的共振散射光产生增强作用,且增强程度与核酸浓度之间有良好的线性关系.据此建立了测定核酸的高灵敏共振散射光增强分析方法.在pH=6.0、最大散射波长400nm处,测定小牛胸腺DNA(CTDNA)、鲑鱼精子DNA(SMDNA)和酵母RNA(YeastRNA)的线性范围分别是0～250ng/mL,0～200ng/mL和0～400ng/mL,检测限分别为1.4ng/mL,1.4ng/mL和2.7ng/mL.该法简单,灵敏度高,用于实际样品中核酸含量的测定,所得结果与紫外吸收法一致.     

固相膜萃取-超高效液相色谱-荧光法测定极地水体中多环芳烃

采用C<,18>固相膜萃取对样品进行富集净化,以二氯甲烷洗脱目标化合物,采用UPLC荧光可变波长进行分离分析.可在5min内实现15种多环芳烃分析,方法检出限分别为:萘为0.3ng/L,苊、芴、菲和苯并(a)蒽为0.26ng/L,蒽、荧蒽、苯并(b)荧蒽和茚并(1,2,3-cd)芘为0.28ng/L;芘、屈、苯并(k)荧蒽、苯并(a)芘和二苯并(a,h)蒽为0.24ng/L;苯并(g,h,i)苝为2.6ng/L.加标回收率在67%～87%之间,RSD均小于10%.可应用于极地环境中痕量多环芳烃样品的检测分析.     

新型氯霉素化学发光芯片免疫检测方法的建立及应用

采用氯霉素(CAP)全抗原CAP-HS-BSA免疫新西兰兔,获得抗CAP多克隆抗体,测得效价为2×10~5,此抗体与CAP结构类似物的交叉反应率均小于0.01%,特异性良好。在此基础上,分别建立了特异性检测氯霉素残留的间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)和基于iPDMS膜的化学发光芯片免疫检测法,并用于实际牛奶样品中CAP的检测。建立的ic-ELISA法的半数抑制浓度(IC_(50))为12.9 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.8~250.0 ng/mL,检出限(IC_(10))为0.1 ng/mL,回归方程B/B_0=-0.2028lg C_(CAP)+0.7281(R~2=0.9926)。牛奶样品中加标回收率为81.8%~97.9%,相对标准偏差(RSD)小于10%。建立的化学发光芯片免疫检测方法的半数抑制浓度为263.0 ng/mL,线性范围(IC_(20)~IC_(80))为1~5000 ng/mL之间,检出限(IC_(10))为1 ng/mL,回归方程B/B_0=0.1781 lg C_(CAP)+0.9318(R~2=0.9891),牛奶中CAP的加标回收率为77.0%~100.5%,RSD15%。     

吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法（ic-CLEIA）。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为：包被原质量浓度62.50 ng/mL（稀释16 000倍）,抗体质量浓度103.12 ng/mL（稀释64 000倍）,缓冲液PBS（pH 7.4）,抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7 000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限（IC10）为0.03 ng/mL,IC50为0.57 ng/mL,线性检测范围（IC20 ~ IC80）为0.083 ~ 3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0% ~ 112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好（r2 = 0.989）。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。     

鸡蛋中泰妙菌素化学发光酶免疫分析方法研究

针对鸡蛋中泰妙菌素的残留问题,通过半抗原及抗原设计合成、动物免疫及细胞融合筛选,成功得到可特异、灵敏识别泰妙菌素的单克隆抗体,并建立了泰妙菌素的化学发光酶免疫分析方法(CLEIA)。采用棋盘法结合单因素实验优化策略,确定最佳反应条件为:包被原质量浓度0.26μg/mL,抗体质量浓度0.94μg/mL,反应体系为0.02 mol/L的PBS(pH 7.4)缓冲液,酶标二抗质量浓度及其稀释液和反应时间分别为2μg/mL、PBST和40 min。在该条件下,建立了泰妙菌素的CLEIA方法,其IC₅₀为0.54 ng/mL,检出限(LOD,IC₁₀)为0.03 ng/mL,线性检测范围(IC₂₀~IC₈₀)为0.17~1.74 ng/mL,且与其它功能结构类似物无明显交叉反应,特异性良好。将建立的CLEIA方法用于鸡蛋实际样品的检测,加标回收率为100%~118%,相对标准偏差(RSD)小于10%,结果与HPLC-MS/MS(r²=0.9987)一致,表明该方法适用于鸡蛋样品中泰妙菌素残留的快速筛查。     

稻瘟灵单克隆抗体的制备及评价

该文制备了农药稻瘟灵的单克隆抗体,并建立了稻瘟灵的酶联免疫吸附（ELISA）检测方法。在完全保留稻瘟灵结构的基础上从二硫杂环戊烷结构中衍生不同长度的活性手臂制备了2个半抗原,并分别与载体蛋白偶联合成免疫原与包被原。通过小鼠免疫、细胞融合、淘筛、腹水制备等步骤获得特异性识别稻瘟灵的单克隆抗体mAb－DWL。结果显示,基于mAb－DWL构建的间接竞争ELISA法的半抑制浓度（IC50）为55.2 ng/mL,线性范围为4.6 ~ 530.2 ng/mL,其与结构类似物的交叉反应可忽略不计。所建立的ELISA方法对蔬菜及粮食等样品的加标回收率为77.2% ~ 116%,可用于实际样品的快速检测。     

加速溶剂萃取气相色谱质谱法测定污泥、底泥及土壤样品中的合成麝香

建立了污泥、底泥及土壤样品中7种合成麝香的分析方法.采用加速溶剂萃取(ASE)提取,经硅胶/中性氧化铝复合层析柱净化后,浓缩并定容洗脱液,用GC-SIM-MS进行检测.本方法对替代物标样荧蒽-d10的回收率为89.7%～110.9%.以六氯苯-c13为内标,7种合成麝香的线性范围为0.6～100.0 μg/kg.底泥和土壤中麝香的检出限为0.25～0.33 μg/kg(S/N=3); 污泥中的检出限为2.9～3.3 μg/kg(S/N=3).基质加标回收实验的平均回收率为83.6%～105.1%; RSD为3.2%～9.8%.本方法准确、快速,可用于实际样品的检测.     

基于非标记核酸适配体荧光法检测灌溉水中汞离子的研究

该文利用汞特异性核酸适配体和可以嵌入双螺旋脱氧核糖核酸中的荧光染料 PicoGreen 建立了一种 快速检测汞离子的荧光分析方法。通过荧光信号强度来测定汞离子浓度,并获得了汞离子浓度的对数和荧光 强度之间的线性关系。方法的线性范围为 0. 001～100 μg/mL,检出限达到 0. 38 ng/mL。在 As3+ 、Pb2+ 、Cd2+ 、 Cr2+ 、K+ 等干扰离子存在的情况下,具有很好的特异性。同时,在灌溉水实际样品检测中的回收率为95. 2%～ 97. 9%,相对标准偏差为2. 3%～4. 0%。该方法利用核酸适配体和荧光染料实现了对汞离子的痕量检测,是一 种简单、快速、灵敏的测定方法。     

乳品中金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫传感检测方法的研究

本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ng/mL和10～100 ng/mL,相关系数分别为0.9939和0.9926,检出限(S/N=3)为0.667 ng/mL,乳品检测回收率在84.3%～93.2%之间。该传感器特异性良好,稳定性好,可再生使用,可应用于乳品中SEB的快速检测。     

测定人体尿液中苄基丙二酸的免疫分析新方法研究

将苄基丙二酸(BA)与牛血清白蛋白通过活化酯法偶联制备人工免疫原,然后免疫新西兰大白兔制得抗苄基丙二酸多克隆抗体;使用该抗体建立了测定人体尿液中的苄基丙二酸的间接竞争酶联免疫吸附方法(ic-ELISA),方法线性范围为1.0×10-2～1.0×103ng/mL,最低检测浓度为0.01 ng/mL,板内差异为5.5%,板间差异在3.8%～7.8%的范围内;用于实际尿样中苄基丙二酸的测定,回收率为87.8%～115.1%。     

管式磁微粒化学发光免疫分析法测定玉米样品中的黄曲霉毒素B1

开发了一种管式磁微粒化学发光免疫分析法测定玉米样品中黄曲霉毒素B1的方法,该方法使待测玉米样品中的黄曲霉毒素B1、辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体在均相体系中发生竞争性免疫反应,再加入用抗FITC抗体包被的磁微粒作分离剂,抗原抗体复合物结合在磁微粒上,在磁场中经分离、洗涤后加发光底物,检测发光强度,测定玉米样品中黄曲霉毒素B1的含量.此方法标准曲线线性范围为0.05～5ng/mL,检测限为0.02ng/mL,批内相对标准偏差小于9%,批间相对标准偏差小于15%,具有良好的稳定性和重现性.     

氢化物发生-原子荧光光谱法测定麦饭石中的硒含量

采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定麦饭石中的硒.在优化的实验条件下,标准曲线的线性范围为0～20 ng/mL,相关系数r=0. 9997,检出限为0. 40 ng/mL.测定结果的相对标准偏差为0. 69%(n=11),加标回收率为92. 0%～106. 0%.该方法测定麦饭石中的硒是可行的.     

应用二极管阵列串联荧光检测-高效液相色谱技术快速测定玩具材料中蒽油的4种成分

采用二极管阵列串联荧光检测-高效液相色谱法对玩具材料中蒽油的4种主要成分蒽、菲、芘、荧蒽进行了检测。样品用正己烷-丙酮溶液超声提取,硅胶小柱净化。方法的荧光检测线性范围为0.5～1000 μg/L,二极管阵列检测线性范围为0.5～1000 mg/L。加标回收、精密度试验表明4种成分的回收率为70.0%～120%,精密度为0.7%～8.8%。蒽、菲、芘、荧蒽的检出限分别为0.1、0.1、0.2、0.3 μg/L,定量限分别为0.4、0.2、0.5、0.8 μg/L。方法具有灵敏度高、检出限低的特点,适用于玩具材料中蒽油4种成分的快速定性、定量检测。     

基于间接竞争原理的流式微球技术快速检测麦芽中赭曲霉毒素A

建立了一种快速、灵敏检测中药麦芽中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)含量的间接竞争流式微球方法.麦芽样品经60％甲醇/PBS提取,加入20％甲醇/PBS溶液稀释5倍后,离心取上清液制备样品.在编码荧光微球上偶联牛血清白蛋白-OTA(BSA-OTA)复合物,与样品中OTA竞争结合抗OTA特异性抗体,然后加入FITC-IgG孵育,离心洗涤后,用流式细胞仪检测微球表面的平均荧光强度,实现样品中OTA的准确定性定量测定.本方法检测OTA的半数抑制浓度IC50为1.20 ng/mL,相关系数R2=0.9892,检出限(IC10)为0.12 ng/mL,加样回收率为93.9％ ～ 97.4％,RSD＜3.6％.16份实际麦芽样品中检测到2个阳性样品,OTA的最高含量为3.83 μg/kg,未超出欧盟的OTA限量标准,与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测结果相一致.本方法简单、快速、灵敏、可靠,可拓展用于其它复杂基质中多种真菌毒素的定性与定量检测.     

管内填充磁性碳纳米管固相萃取-气相色谱/质谱法测定环境样品中多环芳烃

采用原位反应法在碳纳米管(CNTs)的管内合成CoFe2O4纳米颗粒,制备了管内填充磁性碳纳米管(IF-MCNTs),建立了管内填充磁性碳纳米管/磁性固相萃取-气相色谱/质谱法(IF-MCNTs/MSPEGC/M S)测定土壤和水藻样品中7种多环芳烃(PAHs)的分析方法。通过透射电镜(TEM)、X射线衍射仪(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)等研究了IF-MCNTs的结构性能。考察了萃取条件对萃取性能的影响。研究表明,在最佳实验条件下,IF-MCNTs能够有效富集萘(NAP)、苊(ANE)、芴(FLU)、菲(PHE)、荧蒽(FLA)、芘(PYR)和苯并荧蒽(B(b) FL),对应饱和萃取容量分别为197.2,247.8,293.5,387.1,488.5,504.2和43.6 ng/mg。方法线性范围为5.0～500 ng/L,检出限在1.7～3.1 ng/L之间,相对标准偏差(RSD)小于6.8%。将所建方法应用于分析实际环境样品中7种PAHs,加标回收率在73.5%～97.2%之间,RSDs为3.4%～9.5%。方法可用于环境样品中多环芳烃的检测。     

水果及环境水样中苯醚甲环唑的高灵敏免疫分析方法研究

采用辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)显色为信号输出系统,结合间接竞争反应模式建立了水果及环境水样中苯醚甲环唑的间接竞争酶联免疫分析方法(ic ELISA)。基于高特异性单克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为：包被原与抗体质量浓度组合为62.5 ng/mL和0.318μg/mL,一抗竞争反应缓冲溶液为含0.05%Tween-20的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBST,pH 7.4),一抗竞争反应时间为20 min,酶标二抗稀释液为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4),酶标二抗反应时间为30 min。在该条件下,苯醚甲环唑的线性检测范围(IC₂₀～IC₈₀)为0.49～3.90 ng/mL,半数抑制浓度(IC₅₀)为1.38 ng/mL,检出限(LOD)为0.33 ng/mL。在柑橘、葡萄、香蕉、草莓田水、湖水和河水样品中的平均加标回收率为72.3%～132%,相对标准偏差(RSD)不大于13%,对10种结构和功能类似物的交叉反应率(CR)均小于0.2%。该方法准...     

牛奶及水样中泰乐菌素酶联免疫检测方法研究

针对环境及食品中泰乐菌素残留问题,本研究将泰乐菌素分子结构侧链醛基一步直接氧化为羧基,并将其作为新的半抗原,通过免疫新西兰大白兔制备了特异性的抗泰勒菌素多克隆抗体,优化的反应条件为:包被原稀释6000倍,抗体稀释2000倍,反应缓冲液为pH 7.4、吐温含量0.1%、离子浓度0.01 mol/L的PBST,二抗稀释倍数为4000倍,二抗反应时间30 min。在此优化条件下,建立了检测泰乐菌素的间接竞争酶联免疫分析法(icELISA),半数抑制浓度(IC_(50))为1.39 ng/mL,线性范围(IC_(20)~IC_(80))为0.17~11.0 ng/mL,检出限(IC_(10))为0.07 ng/mL,与结构功能类似物交叉反应率均小于0.1%。对纯牛奶、自来水、鱼塘水中泰乐菌素的添加回收率在78.4%~105.6%之间,RSD15%,检测结果与HPLC-MS/MS方法具有良好的相关性(R~2=0.97)。本研究建立的icELISA方法适用于牛奶及水样中泰乐菌素残留的特异性快速筛查。     

双抗体夹心酶联免疫检测法测定蓖麻毒素

建立了双抗体夹心酶联免疫法检测蓖麻毒素的方法。优化了最佳蓖麻毒素多克隆抗体包被浓度和包被方法、蓖麻毒素单克隆抗体工作浓度、酶标记二抗体工作浓度和显色时间等实验条件。方法的线性范围在1.2~10.0μg/L之间,线性回归方程y=0.05x 0.42,相关系数为0.9962,检出限为0.2μg/L。将该方法用于检测实际水样蓖麻毒素加标样品,回收率为91.7%~104.0%;检测实际土壤加标样品,回收率为83.3%~98.0%;检测奶粉加标样品,回收率为83.3%~94.0%;检测实际血液加标样品,回收率为75.0%~82.0%。