适配子识别技术在真菌毒素快速分析中的应用

适配子是近几年来通过指数富集配基的系统进化技术(SELEX)体外筛选得到的一类与目标分子高特异性结合的寡聚核苷酸片段.适配子作为一个优于抗体的新型识别分子,已在食品快速检验、环境检测、新药研发、临床诊断和治疗以及毒理研究等领域展示了良好的应用前景.本文阐述了适配子识别靶物质的结构基础及其特性,归纳了目前已筛选出的真菌毒素适配子序列,总结了适配子在真菌毒素前处理,适配子光学分析技术和电化学分析技术在单种和多种真菌毒素检测中的应用突破,并展望了适配子识别技术在真菌毒素分析领域的发展趋势.     

基于微量热法的板蓝根提取方法和活性部位挑选

应用TAM Air微量热系统, 采用微量热法, 考察不同提取方法的板蓝根水煎液及其化学萃取部位在37 ℃时, 对大肠杆菌生长代谢的影响. 结合中医药理论, 分析板蓝根水煎液及其化学萃取部分的药效作用及其差异, 挑选板蓝根药材最佳的提取方法和抑菌最强的活性部位, 并采用试管稀释法求出抑菌活性最强部位的最小抑菌浓度(MIC). 结果表明微量热法可用于常用中药——板蓝根的提取方法和活性部位的挑选, 为进一步研究中药的药性基础提供了一种新的、快速灵敏的技术和方法.     

基于间接竞争原理的流式微球技术快速检测麦芽中赭曲霉毒素A

建立了一种快速、灵敏检测中药麦芽中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)含量的间接竞争流式微球方法.麦芽样品经60％甲醇/PBS提取,加入20％甲醇/PBS溶液稀释5倍后,离心取上清液制备样品.在编码荧光微球上偶联牛血清白蛋白-OTA(BSA-OTA)复合物,与样品中OTA竞争结合抗OTA特异性抗体,然后加入FITC-IgG孵育,离心洗涤后,用流式细胞仪检测微球表面的平均荧光强度,实现样品中OTA的准确定性定量测定.本方法检测OTA的半数抑制浓度IC50为1.20 ng/mL,相关系数R2=0.9892,检出限(IC10)为0.12 ng/mL,加样回收率为93.9％ ～ 97.4％,RSD＜3.6％.16份实际麦芽样品中检测到2个阳性样品,OTA的最高含量为3.83 μg/kg,未超出欧盟的OTA限量标准,与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测结果相一致.本方法简单、快速、灵敏、可靠,可拓展用于其它复杂基质中多种真菌毒素的定性与定量检测.     

基于量子点标记的适配体技术在分析检测中的研究进展

由于光学性质独特,量子点成为近年来发展起来的极具应用前景的半导体纳米材料,作为荧光标记物在生物和化学领域备受关注。随着生物技术的发展,适配体以其高特异性、强亲和力等特点被用作生物探针或生物传感元件,在分析检测中得到广泛应用。将量子点与适配体结合构建的纳米生物识别体系,互补结合适配体和量子点的特殊性质,可实现对靶标物质的超灵敏、高选择性及快速检测。本文概述了量子点的合成、修饰及其与适配体的偶联,重点介绍了近几年基于量子点标记的适配体技术在生物分子、病原微生物、细胞、真菌毒素等方面的应用,并展望了该技术在分析检测领域的发展趋势。     

左金丸及类方HPLC指纹图谱与生物热活性的“谱-效”关系研究

HPLC法建立左金丸及类方水提液的特征指纹图谱, 计算各特征峰的相对峰面积, 并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版(2004 A)计算类方间的相似度; 微量热法测定大肠杆菌在左金丸及类方水提液作用下的热谱曲线, 得到相应的热动力学参数, 如生长速率常数k, 最大产热功率Pm, 最高峰的出峰时间tm和总产热量Qt等, 并对这些热动力学参数进行主成份分析. 典型相关分析法对左金丸及类方HPLC 指纹图谱中特征峰的相对峰面积与其类方作用下大肠杆菌生长代谢的主要热动力学参数相关联, 研究“谱-效”相关性. 结果表明, HPLC 指纹图谱与生物热活性存在很好的相关性, 类方中吴茱萸次碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量差异是导致其生物热活性不同的主要原因.     

微量热法比较黄连中四种生物碱的抗菌作用

采用微量热法研究和比较中药黄连中四种生物碱(BAs)的抗菌(大肠杆菌)作用。这四种生物碱分别为小檗碱、黄连碱、巴马汀和药根碱。用LKB-2277生物活性检测系统,以停留法测定了37 ℃时大肠杆菌在BAs作用下的热流功率-时间曲线,并记录生长速率常数k, 指数生长期和稳定期的最大热功率Pm, log、Pm, stat, 生长抑制率I, 传代时间tg,指数生长期的总产热量Qt, log,半数抑菌浓度IC50等热动力学参数。结果显示这四种生物碱具有相异的抗大肠杆菌生长代谢的作用,k, Pm, log和Qt, log值随BAs浓度的增加而相应的减少。综合分析k, Pm, log, Qt, log, I 和IC50值可以看出,BAs抑制大肠杆菌生长代谢强度按小檗碱、黄连碱、巴马汀、药根碱的顺序依次减弱。构效关系研究表明,母环C-2和C-3上连接的亚甲二氧基比甲氧基更能显著增强相应化合物的抗菌作用,而C-9和C-10上连接的亚甲二氧基或甲氧基对这种抗菌作用影响不大。     

基于微量热法和主成分分析的盐酸巴马汀抗白色念珠菌作用的研究

采用LKB-2277生物活性检测系统, 测定了37 ℃时白色念珠菌在巴马汀作用下生长代谢的热谱曲线, 并获得9个相应的定量热动力学参数, 经主成分分析综合评价巴马汀的抗白色念珠菌作用. 结果表明巴马汀的抗白色念珠菌作用主要受热谱曲线第二指数生长期的生长速率常数k2和最大产热功率 的影响, 通过分析这两个主要参数的数值变化, 能更方便、快捷和准确地评价巴马汀的抗白色念珠菌作用, 为进一步评价其它药物和化合物的抗菌作用提供了有用的方法和基础.     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定牛黄中多种有效成分含量及其质量相关性研究

建立高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时快速测定牛黄中7种组分的含量的方法。色谱柱为UltimateAQ-C18柱,流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1mL/min;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度100℃,载气(N2)流速1.9L/min。在选定色谱条件下,胆固醇、各种胆汁酸及其钠盐峰形良好且能达到很好地分离。各组分色谱峰峰面积的对数与浓度的对数呈良好线形关系(r0.9972);标准加入回收率为98.8%～112.7%;7种组分的最低检出限为0.001～0.007g/L。本方法可简便、快速地同时检测不同牛黄样品中7种组分的含量并可表征不同牛黄样品的质量,从而为该名贵药材的质量控制提供更全面的依据和参考。     

基于不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用

真菌毒素毒性强,具有很强的致癌性和致畸性,对人体的危害巨大.近年来,其快速检测技术成为研究的热点,在“批量检测”的趋势下,侧流免疫层析技术以具有操作简便,经济合理,灵敏快速等优点,广泛应用于食品、饲料、农产品中真菌毒素的检测.本文对侧流免疫层析检测技术的研究概况及不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用和发展前景进行综述,以期为侧流免疫层析技术在真菌毒素检测的未来发展及应用提供参考.     

适配体在靶向特异性检测中的最新应用进展

适配体是体外采用SELEX技术筛选得到的一段寡核苷酸序列(DNA或RNA),能折叠成一定的空间结构结合靶物质,实现特异性吸附。其功能类似抗体,但具有抗体无法比拟的优势,如靶物质范围广、特异性强、亲和力高、可体外筛选、易于标记和修饰、稳定性好、没有毒性、易制备等。近年来,适配体已在分析检测、生物化学、食品安全、临床医疗等领域得到广泛应用。本文综述了适配体在金属离子、抗生素、农药残留、真菌毒素、蛋白质、微生物、细胞等成分靶向特异性快速检测方面的应用进展,并分析其存在的局限性和问题,展望其应用前景和发展趋势,以期为适配体应用的拓展和相关研究提供依据和支持。