高效液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中的莫诺苷浓度及其药代动力学

运用高效液相色谱-串联质谱联用技术,建立了简单、快速、灵敏的比格犬灌胃莫诺苷后血药浓度的检测方法。血浆样品采用蛋白质沉淀法处理,以芍药苷作为内标,色谱柱为Inertsil ODS-SP色谱柱(50 mm×2.1 mm,5μm),流动相为水(含1 mmol/L甲酸钠)-乙腈,梯度洗脱,流速0.4 mL/min。采用电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测(MRM)模式。绘制血药浓度-时间曲线,并采用DAS 2.0软件计算药代动力学参数。方法学实验结果表明内源性杂质不干扰莫诺苷和内标的测定,线性范围为2~5 000μg/L(r=0.996 6),定量限为2μg/L。方法精密度、准确度、回收率和基质效应均符合生物样品测定的要求,适合比格犬血浆中莫诺苷浓度的测定,可以应用该方法进行莫诺苷的药代动力学研究。比格犬灌胃莫诺苷3个剂量(5、15、45 mg/kg)后的血药浓度-时间曲线下面积(AUC(0-∞))分别为(1 631.20±238.50)、(3 984.05±750.38)、(10 397.64±3 156.34)μg/L·h,与给药剂量之间呈现良好的线性关系。     

人参皂苷Re在正常和中波紫外线辐射损伤模型大鼠体内药代动力学比较研究

建立了超高效液相色谱-三重四级杆质谱(UPLC-QQQ-MS)检测大鼠血浆中G-Re含量的方法,用于比较研究人参皂苷Re(Ginsenoside Re,G-Re)在正常大鼠和UVB辐射损伤模型大鼠体内的药代动力学行为。选用Ascentis~? Express C_(18)色谱柱(5.0 mm×3.0 mm,2.7μm),以0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱。电喷雾离子源(ESI)在负离子模式下,选择多反应监测模式(MRM)扫描,内标法定量,用于G-Re定量分析的离子为m/z 991.54/945.53/475.60。方法检出限为4.0 ng/m L,定量限为13.5 ng/m L,G-Re在15~20000 ng/m L范围内线性关系良好(r=0.999);日内和日间精密度、回收率、基质效应和稳定性均能满足药代动力学分析要求。结果表明,两组大鼠分别单次口服50 mg/kg G-Re后,体内代谢过程表现皆符合二室模型特征,正常组和模型组t_(1/2α)分别为(0.21±0.04)h和(0.69±0.07)h,t_(1/2β)分别为(17.08±0.53)h和(21.40±16.77)h,AUC_((0-t))分别为(321.91±2.27)"g/(L·h)和(474.99±194.96)"g/(L·h),AUC_((0-∞))分别为(332.44±1.66)"g/(L·h)和(518.64±231.39)"g/(L·h),除t_(1/2α)外,两组之间的药代动力学参数具有显著差异(p0.05)。本方法准确、灵敏、专属性强、稳定性好,可用于人参皂苷Re的体内药代动力学比较研究。     

UPLC-MS/MS结合多探针底物方法研究刺五加叶中黄酮苷类成分对CYP450活性的影响

利用超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)的多反应监测(MRM)技术结合多探针底物方法, 研究了刺五加叶中的主要黄酮苷类化合物槲皮苷、金丝桃苷及芦丁对肝细胞色素P450酶(CYP450)亚型CYP1A2, CYP2C, CYP2E1, CYP2D和CYP3A活性的影响. 结果表明, 3种化合物对各CYP亚型酶均有抑制作用, 其中金丝桃苷和槲皮苷对CYP1A2催化的非那西丁的O-脱乙基反应抑制的IC₅₀值分别为46.53和49.75 μmol/L, 金丝桃苷和芦丁对CYP2E1催化的氯唑沙宗的6-羟基化反应抑制的IC₅₀值分别为99.87和86.36 μmol/L. 机理性抑制实验结果表明, 3种化合物对2种亚型酶的抑制作用是随着预孵时间延长而增强的机理性抑制.     

罗布麻叶黄酮类成分酶解前后的液相色谱-质谱分析及活性比较

采用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESIMS)联用技术,对罗布麻叶中的黄酮类化合物及酶解产物进行了系统的研究。结果表明,罗布麻叶所含黄酮成分极性较大,包含白麻苷、芦丁、山萘酚-3-O-β-D-芸香糖苷、异槲皮素、扁蓄苷和乙酰化金丝桃苷。罗布麻叶黄酮类成分经过β-葡萄糖苷酶和α-鼠李糖苷酶混合酶液酶解后发生水解,水解产物包括金丝桃苷、异槲皮素、乙酰化金丝桃苷、三叶豆苷、紫云英苷、槲皮素和山萘酚。将酶解前后各化合物的高效液相色谱峰面积进行比对,证明白麻苷、山萘酚-3-O-芸香糖苷和扁蓄苷为酶解前罗布麻叶主要成分,金丝桃苷、异槲皮素、扁蓄苷、槲皮素和山萘酚为酶解后的主要成分。细胞实验结果表明,酶解后3个剂量组的细胞相对增殖率较酶解前分别提升了14.61%、22.48%和20.22%。因此,通过β-葡萄糖苷酶和α-鼠李糖苷酶混合酶液酶解可以有效地将罗布麻叶黄酮苷转化为对应的黄酮苷元及疏水性的黄酮苷,大大提高了罗布麻叶黄酮提取物的抗抑郁活性。     

刺五加叶中黄酮类化合物的结构鉴定

利用电喷雾质谱发现刺五加叶中存在4种黄酮类化合物,进一步分离得到其中的两种,经核磁质谱鉴定,一种为槲皮甙(槲皮素－3－O－α－L－鼠李糖),另一种为金丝桃甙(槲皮素－3－O－β-D－半乳糖).其余两种难以分离的黄酮甙经电喷雾多级串联质谱分析,初步推断为槲皮素和芦丁(槲皮素－3-O－芦丁糖).以上4种均为黄酮醇类化合物,除金丝桃甙外,其它3种为刺五加叶中尚未见报道的黄酮类成分.     

微乳液相色谱法同时测定山楂叶提取物中4种黄酮成分

建立了一种新的微乳体系,用于微乳液相色谱同时分析山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷、芦丁、牡荆素及金丝桃苷4种黄酮成分.通过对影响分离选择性的主要因素进行考察,得到最佳微乳体系的组成为: 1.0%(w/w) 聚氧乙烯月桂醇(Brij35)-1.1%(w/w)正丁醇-0.1%(w/w)正辛醇-0.3%三乙胺(V/V)(H_3PO_4调节至pH 2.5).在此微乳体系中,表面活性剂类型和浓度、油相种类、添加剂三乙胺、流动相的pH值对4种黄酮成分的分离起到了重要的作用.选择Venusil ASB C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5μm),流速为0.8 mL/min,检测波长为360 nm,柱温为35 ℃.结果显示,4种黄酮成分在27 min内达到基线分离,在0.95～140.8 mg/L范围内,4个黄酮成分的线性相关系数r≥0.9995,平均回收率98.6%～101.6%.本方法可应用于山楂叶提取物中4种主要黄酮成分的质量分析.     

罗布白麻与罗布红麻的液相色谱-质谱联用分析

建立了罗布白麻叶和罗布红麻叶的高效液相色谱-电喷雾质谱联用的分析方法,分析比较了二者的16种成分.在罗布麻叶中首次发现了槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、槲皮素-3-O-呋喃型阿拉伯糖苷、Ⅰ3-Ⅱ8-双芹菜苷元、穗花衫双黄酮、贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素.研究表明罗布红麻叶和罗布白麻叶的主要成分在种类和含量上均有较大的差别,前者中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、金丝桃苷、槲皮素-3-O-呋喃型阿拉伯糖苷、乙酰化异槲皮素、乙酰化金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚-3-O-半乳糖苷、槲皮素、山奈酚和贯叶金丝桃素的含量高于后者,而白麻苷含量低于后者.芦丁和加贯叶金丝桃素是罗布白麻的特征性成分,而Ⅰ3-Ⅱ8-双芹菜苷元和穗花衫双黄酮是罗布红麻的特征性成分,根据此特点可以区分二者.     

CYP3A4酶对土茯苓黄酮类成分代谢的影响

以土茯苓6种黄酮类成分为底物,研究了不同孵育时间、不同CYP3A4酶浓度对6种成分代谢的影响。通过土茯苓6种黄酮类成分的酶促动力学,得到米氏常数(K_m)、最大反应速度(V_(max))和代谢清除率(Cl_(int))。结果表明,以表儿茶素、新落新妇苷、落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷、白藜芦醇为底物时,K_m分别为1.39,1.38,2.37,1.59,0.79,2.01μmol/L; V_(max)分别为0.02,0.01,0.02,0.02,0.01,0.02μmol/(L·min); Clint分别为(1.14,0.96,0.90,0.99,1.42,0.97)×10~(-2)min~(-1)。     

大鼠血浆中芍药苷的UHPLC-MS/MS法测定及其药动学研究

建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UHPLC-MS/MS)测定大鼠血浆中的芍药苷含量的分析方法,并用于芍药苷药动学研究。采用UHPLC-MS/MS电喷雾电离源(ESI),负离子模式,多反应监测(MRM)法定量分析芍药苷,离子对为m/z 479.1→m/z 121.0和m/z 479.1→m/z 327。计算芍药苷血浆质量浓度,采用PK Solutions 2.0软件计算药动学参数。大鼠血浆中芍药苷在0.01~2μg/mL范围内线性良好,定量限为0.01μg/mL。日内和日间RSD均11%,准确度均在±15%之间。低、中、高3个质量浓度下绝对回收率均70%。大鼠腹腔注射20 mg/kg芍药苷后的主要药动学参数c_(max)为(14.28±1.76)μg/mL,T_(1/2)E_(phase)为(176.11±23.47)min,AUC_(0-t)为(1193.30±213.70)ng·min/mL。     

RP/HPLC测定吡虫啉血药浓度及其大鼠灌胃药代动力学评价

建立了大鼠血浆中吡虫啉的反相高效液相色谱(RP/HPLC)分析方法,并用于吡虫啉在大鼠体内的代谢动力学行为及特征研究。血浆样品经甲醇萃取,反相HPLC法测定血浆中的吡虫啉浓度。色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(30∶70),进样量20μL,检测波长245nm,流速1. 0 m L/min。在最佳条件下,吡虫啉的线性范围为0. 5～100 mg·L-1(r2=0. 999 8),检出限为10μg·L-1,平均加标回收率为74. 7%。大鼠单剂量灌胃给予68. 1 mg·kg-1吡虫啉,分别测定给药后不同时间下血浆中吡虫啉的浓度,并计算代谢动力学参数。灌胃给药后吡虫啉的Cmax为23. 557 mg/L,tmax为7. 333h,t1/2α为4. 472 h,AUC(0-t)为276. 727 mg·h/L。代谢动力学结果显示,吡虫啉在大鼠体内呈二隔室模型分布,以一级药代动力学方式消除。该方法简便可靠,能够满足血浆中吡虫啉测定及药代动力学研究的要求。     

基于漂浮有机液滴凝固液相微萃取的黄酮类化合物分配系数及含量测定

以漂浮有机液滴凝固液相微萃取（SFODLPME）对中药中黄酮类化合物进行富集,建立SFODLPME-HPLC快速测定中药材样品中低丰度黄酮类化学成分含量的方法. 并讨论了黄酮类化合物富集倍数与浓度之间的关系、富集倍数与供相体积之间的关系,定义和阐述了EF1μg?mL-1及其物理意义,计算了漂浮有机液滴凝固相体积及黄酮类化合物的表观分配系数. 在SFODLPME的优化条件下结合高效液相色谱测得8种黄酮类成分的线性范围均为0.01~10.00μg/ml;检测限在1.0~0.01ng/mL;精密度RSD<7.0%;药材中分析物的回收率在96.0% ~104.2%. 当加入萃取溶剂体积为40μl 时,形成漂浮有机液滴凝固相体积为52±14μl;8种黄酮类成分的表观分配系数在44.8~243.9之间.     

Synthesis and Activity Evaluation of Novel Prenylated Flavonoids as Antiproliferative Agents

Twenty prenylated flavonoids 1-20 were synthesized by glycoside hydrolysis, dehydrogenation, selective O-methylation, O-prenylation and Claisen rearrangement reaction, from abundant and inexpensive natural flavonoids naringin, hespiredin, quercetin and myricetin. Among them, 1-7, 10-15 and 17-20 are novel compounds, the natural product 3,3',4',7-tetramethoxy-8-prenyl-5-hydroxy flavonoid(16) was synthesized in a high yield. Their antiprolirative activities were evaluated in vitro on a panel of three human cancer cell lines(HeLa, HCC1954 and SK-OV-3). The results show that most of the target compounds displayed moderate to potent antiprolirative activities against the three cancer cells with half maximal inhibitory concentration(IC₅₀) values from 0.49 μmol/L to 95.07 μmol/L. Among them, 3',4',7-trimethoxyl-5-hydroxyl-8-prenyl flavonoid(12) exhibited the strongest antiprolirative activity against the three cancer cells mentioned above with IC₅₀ values of 0.91-7.08 μmol/L. 3',7-Dimethoxy-5-O-prenyl flavone(6) and 3',4',7-trimethoxy-5-O-prenyl flavone(10) showed selective antiproliferative activity against HCC1954 cells with IC₅₀ value of 0.49 and 5.32 μmol/L, respectively.     

Synthesis and α-glucosidase inhibitory activity of chrysin,diosmetin, apigenin,and luteolin derivatives

Several derivatives have been synthesized from chrysin, diosmetin, apigenin, and luteolin, which were isolated from diverse natural plants. The α-glucosidase inhibitory activity of these compounds was evaluated. The glucosidase inhibitory activity of all derivatives （IC50 〈 24.396 μmol]L） was higher compared with that of the reference drug, acarbose （IC50=563.601 ±40.492μmol/L）, and 1- deoxynojirimycin （IC50 = 226.912± 12.573 μmol/L）. O3＇,O7-Hexyl diosmetin （IC50 = 2.406 ± 0.101μmol/L） was the most potent inhibitor identified. These compounds showed a higher inhibitory ability compared with their precursors except the luteolin derivatives. In general, the inhibitory activity of the synthetic derivatives was enhanced with long alkyl chains at positions 3＇, 4＇ and 7 of the flavonoid.     

青钱柳叶植物药中生命元素的溶出特性及其化学形态研究

青钱柳具有降低血糖和血压、抗肿瘤及抗衰老等多种功能,但对其生理活性的物质基础尚不清楚［１］．研究表明,锌、锰、镁等生命元素与人体胰岛素分泌和葡萄糖的利用有关,可能在其降血糖方面发挥了重要作用［１,２］．但元素活性与其形态密切相关．本文结合中草药微量元素形态分析的层次模式［３］,用Ｃ－１８柱分离、流动注射－电感耦合等离子体发射光谱法［４］研究了青钱柳叶干制品中锌、锰、镁、铁等元素的含量及在不同溶剂中的溶出特性和化学形态．１实验部分１． １微波消解采用ＳＨＩＮ ＣＯ ＭＫ－Ⅱ光纤控压密闭微波快速消解系…     

Development of bis-thiobarbiturates as successful urease inhibitors and their molecular modeling studies

Bis-thiobarbiturate derivatives 1–15 have been synthesized, characterized by1 HNMR and EI-MS and screened for urease inhibition. All compounds showed various degree of urease inhibitory activity with IC_(50) values ranging 7.45 0.12 74.24 0.81 mmol/L while the standard thiourea behaved normally(IC_(50) = 21.10 0.12). Compounds 1(IC_(50) = 7.45 0.12 μmol/L), 9(IC_(50) = 18.17 1.03 μmol/L) and 13(IC_(50) = 8.61 0.45 μmol/L) showed excellent urease inhibitory activity in the series. Molecular modeling studies were performed to understand the binding site with the bimetallic nickel center of the enzyme.Structure-activity relationship has also been established for these compounds. This study identified bisthiobarbiturate as a novel class of urease inhibitors.     

煤直接液化残渣制备水渣浆成浆性的研究

以煤直接液化残渣制备了水渣浆，考察了粒径分布、搅拌时间、分散剂的用量及种类对水渣浆性质的影响。根据实验确定了制备水渣浆的最佳工艺参数：Alfred粒径分布模型（d_280~154μm、d_154~74μm、d_<74μm 质量分数分别为14%、16%、70%），搅拌时间20 min，分散剂加入量为干渣基1.0%。实验结果表明，液化残渣制备水渣浆的定黏质量分数分别为73.5%（NSF）和71.0%（SL）。分散剂萘磺酸盐甲醛缩合物（NSF）的分散降黏效果优于改性碱木质素磺酸钠（SL），而水渣浆的流变性，分散剂SL要优于分散剂NSF。     

刺五加叶中黄酮类化合物的分析

利用电喷雾多级串联质谱 (ESI MSn)技术 ,分析了刺五加叶中黄酮类化合物 ,并根据黄酮类化合物的特征显色反应 ,采用紫外 可见分光光度法 ,对刺五加叶中总黄酮的含量进行了测定。分析结果表明 :刺五加叶含有槲皮素及其相关的黄酮甙类化合物 ,其含量达 37.2 5 %。     

基于超滤离心前处理的液相色谱-串联质谱法手性拆分人血浆中的亚叶酸和5-甲基四氢叶酸非对映异构体及其药代动力学应用

建立了液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）同时测定人血浆中的亚叶酸和5-甲基四氢叶酸两对非对映异构体的方法。血浆经蛋白质沉淀-超滤离心处理后,以甲氨蝶呤为内标,乙腈-10 mmol/L pH 8.0醋酸铵为流动相,通过手性HSA色谱柱（150 mm×4 mm,5 μm）进行梯度洗脱。亚叶酸非对映异构体在25~5000 μg/L范围内、5-甲基四氢叶酸非对映异构体在12.5~2500 μg/L范围内,线性关系均良好。本方法在灵敏度、精密度、准确度、基质效应、提取回收率、稳定性等方面均得到充分验证,并成功应用于125 mg/m²亚叶酸和62.5 mg/m²左旋亚叶酸的药代动力学研究。结果显示：在125 mg/m²亚叶酸剂量组,左亚叶酸和左旋-5-甲基四氢叶酸的血浆峰浓度（C_max）为（3137.917±408.837）和（1679.633±244.132）μg/L,从时间点0到最后可定量时间点的药物代谢动力学时间曲线下面积（AUC_0-t）为（7504.883±1185.101）和（14001.214±2868.949）μg/L;在62.5 mg/m²左亚叶酸剂量组,左亚叶酸和左旋-5-甲基四氢叶酸的C_max为（3187.917±387.298）和（1739.204±224.755）μg/L,AUC_0-t为（7426.664±854.825）和（14884.331±1843.353）μg/L。两剂量组主要药物代谢动力学参数均无显著差异,特征一致,吸收的速度和程度一致,能够为后期进行左亚叶酸钠生物等效性研究提供技术支持。     

制备色谱法分离纯化高良姜黄酮中高良姜素和山柰素

建立了制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)分离高良姜黄酮中高良姜素和山柰素的方法。高良姜黄酮经HPD-600树脂吸附洗脱纯化后,采用Prep-HPLC分离高良姜黄酮中高良姜素和山柰素。制备色谱条件:流动相为甲醇-0.6%(v/v)乙酸水溶液(58:42, v/v),柱温为常温,流速为7.0 mL/min,检测波长为360 nm,进样量为700 μ L,上样质量浓度为10.0 g/L。分离的单体由质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定确证为高良姜素和山柰素,HPLC外标法定量,纯度分别为99.5%和99.7%。该方法分离效果好、高效、低毒,可用于高良姜中高良姜素和山柰素的分离制备。     

高效离子交换色谱法分析青枯雷尔氏菌无致病力epsD突变菌株的异质性

利用高效离子交换色谱（HPIEC）技术结合形态观察和胞外多糖（EPS）含量测定,比较分析青枯雷尔氏菌无致病力突变菌株FJAT-91⊿epsD与强致病力出发菌株FJAT-91及自然致弱的无致病力菌株FJAT-1458的异质性。结果表明,菌株FJAT-91⊿epsD与菌株FJAT-91在菌落和菌体形态上均有明显差异,与菌株FJAT-1458的形态相似。胞外多糖含量测定结果表明,菌株FJAT-91⊿epsD的EPS含量（（12.64±1.46）μg/mL）显著低于菌株FJAT-91（（30.49±2.97）μg/mL）,与菌株FJAT-1458的EPS含量（（11.30±1.38）μg/mL）相当。高效离子交换色谱分离结果表明,菌株FJAT-91、FJAT-91⊿epsD和FJAT-1458形成的色谱峰个数和保留时间不同,菌株FJAT-91只有单一色谱峰P₃,保留时间为6.04 min;菌株FJAT-91⊿epsD有P₁和P₂两个色谱峰,保留时间分别为0.59 min和4.62 min;菌株FJAT-1458只有单一色谱峰P₁,保留时间为0.59 min。对不同色谱峰回收培养,并对回收培养后的菌株进行致病力鉴定。结果表明,番茄植株接种菌株FJAT-91-P₃后第4 d开始发病,第10 d发病率达100%;植株接种菌株FJAT-91⊿epsD-P₂后第9 d开始发病,第20 d发病率达100%;植株接种菌株FJAT-1458-P₁和菌株FJAT-91⊿epsD-P₁后,在观察期内均未发病。研究结果可为利用菌株FJAT-91⊿epsD防治作物青枯病提供理论依据。