对甲基苯磺酰氯柱前衍生法测定水中哌嗪

建立了一种高效液相柱前衍生化测定水中哌嗪含量的方法。选取对甲基苯磺酰氯(p-TSC)为衍生试剂对哌嗪进行衍生化,衍生产物利用液质联用(LC-MS)技术定性,高效液相色谱定量分析。方法采用Ultimate XB-C18色谱柱,以甲醇-水(体积比60:40)为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为240 nm,室温下检测。实验结果表明,哌嗪的衍生化产物与过量衍生化试剂分离良好,在10～100 mg/L的范围内,哌嗪的浓度与其衍生产物峰面积呈现良好的线性关系,相关系数r>0.999。方法的检出限为0.09 mg/L,定量限为0.30 mg/L。回收率范围为88.2%～99.2%,相对标准偏差为2.5%～5.3%。通过正交反应试验确定了最佳衍生化条件:衍生温度为55℃,缓冲液pH为10.0,衍生时间10 min。     

柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测法测定桑叶中的1-脱氧野尻霉素

采用柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测法测定了桑叶中的1-脱氧野尻霉素(DNJ)。用0.05 mol/L HCl提取桑叶中的DNJ,采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)试剂在pH 8.5硼酸盐缓冲液下对DNJ进行衍生化,以0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.0)-乙腈(体积比为85∶15)为流动相,利用C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)分离,在激发波长为250 nm、发射波长为395 nm条件下进行荧光检测,DNJ的AQC衍生物与衍生化试剂的水解产物分离良好。方法的线性范围为0.5～25 mg/L,检出限为0.02 mg/L（S/N=3）。实验测得桑叶中DNJ含量为0.12%;回收率为96.1%～98.6%。     

碱蒸馏/超声波衍生化-气相色谱-质谱法测定土壤中的偏二甲肼

建立了碱蒸馏/超声波衍生化预处理的气相色谱-质谱法测定土壤中偏二甲肼的分析方法。通过碱蒸馏预处理方法,以水杨醛为衍生化试剂,采用超声波加速衍生化反应,在选择离子检测( SIM)模式下进行定量分析,衍生化产物的特征离子为m/z 164。考察了碱蒸馏、超声波衍生化条件的影响,并对衍生化条件进行优化,方法的线性范围在0.4~30 mg/L之间,方法检出限为0.0078 mg/kg。以此方法测定已知浓度的土壤样品,目标化合物的含量在10~100 mg/kg之间,回收率在76％~108％之间,相对标准偏差在12％~19％之间。与分光光度法、索氏提取/超声波衍生化-气相色谱-质谱法相比较,本方法检出限显著优于二者。     

配方奶粉中肉碱对映体的拆分及液相色谱-串联质谱法测定

采用手性试剂衍生化结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,分离了配方奶粉中的肉碱对映体,选用合适的手性试剂并优化了色谱分离条件。配方奶粉中的肉碱经乙醇提取后,采用手性试剂L-丙氨酸-β-萘胺衍生化,经C18色谱柱分离,乙腈-甲醇-四氢呋喃(A)和甲酸铵-甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱。在该分离条件下左旋肉碱与右旋肉碱的分离度Rs≥1.7,方法的检出限为0.3 mg/kg,定量限为1.0 mg/kg。在0.01~1.0 mg/L范围内线性良好,相关系数0.9991。低、中、高3个添加水平的平均回收率在90.9%~108%之间,相对标准偏差在4.5%~6.9%之间。方法可用于测定配方奶粉中左旋肉碱的含量及光学纯度,对国标方法的建立有一定参考意义。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定门冬氨酸洛美沙星中门冬氨酸

建立了柱前衍生化高效液相色谱法测定门冬氨酸对映体。利用邻苯二甲醛、N-乙酰-L-半胱氨酸对门冬氨酸进行柱前衍生化,采用CAPCELL MGⅡC18色谱柱,流动相为磷酸盐溶液(pH 8.2)-甲醇,梯度洗脱,流速为1 m L/min,柱温为室温,检测波长为231 nm。门冬氨酸对映体分离度为1.7,L-门冬氨酸质量浓度在3.5~70.8μg/m L范围内线性关系良好(r2=0.9993),回收率在97%~101%之间。门冬氨酸洛美沙星中门冬氨酸均为L型。建立的手性分离测定门冬氨酸的方法可行,可用于门冬氨酸洛美沙星中门冬氨酸的构型鉴别和含量测定。     

气相色谱法测定食品包装材料中微量甲醛

建立了食品包装材料中微量甲醛的气相色谱检测方法.样品浸泡液经2,4-二硝基苯肼(DNPH)衍生,正己烷萃取衍生反应物后,气相色谱-电子捕获检测器法测定.采用乙腈多次重结晶法提纯衍生剂(DNPH),以降低DNPH中含有的甲醛衍生产物,避免影响测定;探讨了衍生化反应的条件以及色谱条件.甲醛的残留在0.05～50 mg/L的范围内线性关系良好,检出限为0.05 mg/kg,相对标准偏差为2.7%～5.0%,回收率范围在88.6%～98.0%之间.     

衍生化-液液萃取气相色谱法测定环境水体中苦味酸

建立衍生化-液液萃取气相色谱法测定环境水体中的苦味酸。环境水体中的苦味酸经次氯酸钠氯化衍生后,用正己烷提取后进行气相色谱分析。对萃取溶剂、衍生化反应温度和时间、衍生试剂(次氯酸钠)的加入量、色谱柱的选择以及色谱分析条件进行了优化,采取正己烷作为萃取试剂,加入次氯酸钠溶液2.0 mL,选择衍生化反应温度为35℃,反应时间为50 min,DB-5细管柱(30 m×0.32 mm,0.25μm)作为分离柱,当取样体积为10 mL时,方法检出限为0.2μg/L。用该方法对实验用水做了高、中、低质量浓度水平的加标回收试验,回收率为85.5%~105.6%,相对标准偏差为2.93%~4.49%(n=6)。     

盐酸托莫西汀中S-异构体杂质含量的柱前衍生高效液相色谱法测定

以2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)为柱前手性衍生化试剂,建立了柱前衍生化反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定盐酸托莫西汀中S-异构体杂质的方法。考察了碱化与衍生化试剂的浓度及反应时间对衍生化产率的影响,以及流动相组成对柱效、分离度、保留时间的影响,并讨论了结构因素对手性衍生和分离的影响。采用Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-四氢呋喃-水(体积比为41∶14∶45)为流动相,流速1.0 mL/min;检测波长254 nm,柱温35℃。在优化实验条件下,盐酸托莫西汀与S-异构体的分离度R1.5;S-异构体的检出限为0.15 mg/L,在0.5~8 mg/L范围内线性良好;精密度RSD为1.8%;按标准加入法计算,加标回收率为92%~99%;按外标法计算,加标回收率为94%~102%。该方法简便、可靠,可作为盐酸托莫西汀原料药中S-异构体杂质限量的质控方法。     

柱前衍生高效液相色谱法测定二乙醇胺脱氢产物亚氨基二乙酸和甘氨酸

以对甲苯磺酰氯(PTSC)为衍生剂,建立了柱前衍生高效液相色谱(HPLC)测定二乙醇胺脱氢产物中亚氨基二乙酸(IDA)和甘氨酸(Gly)含量的分析方法。IDA和Gly与衍生剂在碱性(pH 11)条件下于45℃反应15 min,进行柱前衍生,并利用高效液相色谱-质谱对衍生产物进行定性分析。衍生化产物采用VP-ODS色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm)分离,以0.03 mol/L醋酸铵溶液(pH 5.5)为流动相A、乙腈为流动相B(体积比为87∶13),进行等度洗脱,流速为1 mL/min,并采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定,检测波长为235 nm。该法在IDA质量浓度为900~2 100 mg/L、Gly质量浓度为20~100 mg/L的范围内线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.999。IDA和Gly的检出限(LOD)分别为0.089 7 mg/L和0.026 2 mg/L,加标回收率分别为98.7%~99.3%和98.0%~99.5%,相对标准偏差(RSD)分别为0.89%~1.23%和0.95%~1.11%(n=3)。该法具有反应条件温和、准确性高的特点,可用于工艺生产中IDA和Gly含量的测定。     

硅烷化GC/MS法同时测定卷烟中的糖、1,2-丙二醇和甘油

建立了硅烷化衍生化法结合气相色谱/质谱(GC/MS)法同时测定卷烟中1,2-丙二醇、甘油和糖类物质含量的分析方法。样品以N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)为提取溶剂和衍生化试剂,于70℃衍生化反应30 min,采用DB-5MS色谱柱(60 m×0.25 mm×0.25μm),用GC/MS分析测定1,2-丙二醇,甘油、果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。方法线性关系良好,检出限为0.04~2.85 mg/g,定量限为0.13~9.51 mg/g,平均加标回收率为90.3%~114.4%,相对标准偏差小于9.1%。方法适合于卷烟样品中1,2-丙二醇、甘油和糖类物质的同时测定。     

胶束电动毛细管色谱检测鱼肉中的七种生物胺

建立了一种利用胶束电动毛细管色谱同时检测鱼肉中组胺、腐胺、2-苯乙基胺、尸胺、色胺、亚精胺及精胺7种生物胺的方法。样品经6%过氯酸萃取后,由苯甲酰氯衍生化,以含0.06 mol/L脱氧胆酸钠的0.02 mol/L硼酸(pH 9.2)-甲醇(体积比为95∶5)混合液为电泳介质,电泳电压25 kV,温度25 ℃,检测波长214 nm,在12 min内实现了7种生物胺的完全分离。7种生物胺的浓度与其峰面积在一定的范围呈良好的线性关系,检出限除组胺为15 μg/g外,其余均为5 μg/g。迁移时间和峰面积的日内、日间相对标准偏差均小于5%。该法用于海鱼中7种胺类物质含量的测定,结果令人满意。     

超高效合相色谱法拆分和测定克伦特罗对映体

建立了基于超高效合相色谱技术(UPC²)的克伦特罗对映体拆分方法,并对所建立的方法进行了方法学考察及应用。实验考察了两种克伦特罗对映体标准溶液的稳定性,并对手性色谱柱、助溶剂、系统背压、色谱柱温度等色谱分离条件进行了优化。采用Acquity Trefoil AMY1 (150 mm×3.0 mm, 2.5 μm)手性色谱柱进行分离,以超临界CO₂-含0.5%(v/v) 10 mol/L醋酸铵的甲醇溶液为流动相,以流速2.0 mL/min梯度洗脱,检测波长为241 nm,进样体积为10 μL,系统背压为13.8 MPa,柱温为40 ℃时,两种克伦特罗对映体分离效果最好。两种克伦特罗对映体的线性范围为1.0~20.0 mg/L,相关系数均大于0.9997,仪器检出限(S/N=3)均为0.5 mg/L。10.0 mg/L混合标准工作溶液重复进样6次,(+)、(-)克伦特罗对映体峰面积的相对标准偏差(RSD, n=6)分别为0.65%和0.76%。应用该方法对市售克伦特罗外消旋体标准品进行拆分,采用外标定量法计算克伦特罗外消旋体标准中间溶液10.0 mg/L中两种克伦特罗对映体含量,其中(+)-克伦特罗的含量为5.6 mg/L, (-)-克伦特罗的含量为5.5 mg/L。该计算结果与文献报道的工业品克伦特罗外消旋体中(+)-克伦特罗与(-)-克伦特罗的比例为1.02∶1.00基本相符。该方法具有分析速度快、分离效果好、有机溶剂消耗少等特点,适用于克伦特罗对映体的拆分,为其他手性化合物的拆分、药效精细分析和产品质量评定提供了可靠的技术支持。     

高效液相色谱法测定化妆品中α-、β-熊果苷及烟酰胺

建立了美白类化妆品中熊果苷的两种光学异构体α-熊果苷和β-熊果苷及烟酰胺的高效液相色谱检测方法。样品用氯化钠水溶液-氯仿(2:1, v/v)进行萃取。固定相为依利特ODS-BP柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为甲醇-水(10:90, v/v),柱温为25 ℃,检测波长为220 nm,流速为0.5 mL/min,进样量为20 μL。在上述条件下α-熊果苷、β-熊果苷和烟酰胺的质量浓度依次在0.07~50, 0.06~50, 0.05~50 mg/L时与色谱峰面积之间的线性关系良好,相对标准偏差(n=7)分别为1.65%、1.73%和1.33%。将该方法用于化妆品的检测,回收率为91.7%～109.6%。该法简便、快速、准确,可用于化妆品美白成分的测定。     

高效液相色谱手性流动相添加法拆分奥昔布宁对映体

采用C18固定相,以羟丙基-β-环糊精为手性流动相添加剂,建立了奥昔布宁对映体的高效液相色谱拆分方法。考察了手性添加剂、有机极性调节剂、缓冲盐的种类和浓度以及流动相的pH值和流速及柱温等因素对对映体分离的影响。在最佳分离条件下,奥昔布宁对映体的分离度为1.54,检测限为1.0 ng。该方法简便,重复性好,比手性固定相法更加经济。     

Quantitative analysis of three chiral pesticide enantiomers by high-performance column liquid chromatography

Methods for the enantiomeric quantitative determination of 3 chiral pesticides, paclobutrazol, myclobutanil, and uniconazole, and their residues in soil and water are reported. An effective chiral high-performance liquid chromatographic (HPLC)-UV method using an amylose-tris(3,5-dimethylphenylcarbamate; AD) column was developed for resolving the enantiomers and quantitative determination. The enantiomers were identified by a circular dichroism detector. Validation involved complete resolution of each of the 2 enantiomers, plus determination of linearity, precision, and limit of detection (LOD). The pesticide enantiomers were isolated by solvent extraction from soil and C18 solid-phase extraction from water. The 2 enantiomers of the 3 pesticides could be completely separated on the AD column using n-hexane isopropanol mobile phase. The linearity and precision results indicated that the method was reliable for the quantitative analysis of the enantiomers. LODs were 0.025, 0.05, and 0.05 mg/kg for each enantiomer of paclobutrazol, myclobutanil, and uniconazole, respectively. Recovery and precision data showed that the pretreatment procedures were satisfactory for enantiomer extraction and cleanup. This method can be used for optical purity determination of technical material and analysis of environmental residues.     

Validated chiral high-performance liquid chromatography method for a novel anti-methicillin-resistant Staphylococcus aureus fluoroquinolone WCK 771

A sensitive, simple, specific, precise, accurate and rugged method for the assay and determination of enantiomeric purity of S-(-)-9-fluoro-6,7-dihydro-8-(4-hydroxypiperidin-1-yl)-5-methyl-1-oxo-1H,5H-benzo[i,j]quinolizine-2-carboxylic acid L-arginine salt tetrahydrate (WCK 771) in bulk drug has been developed. The method is RP-HPLC using endcapped C-18 stationary phase and chiral mobile phase. Chirality to the mobile phase was imparted with addition of beta-cyclodextrin. The UV-vis detector was operated at 290 nm. The flow rate of mobile phase was 2 ml/min. The method offers excellent separation of two enantiomers with resolution more than 2 and tailing factor less than 1.5. The method was validated for the assay of WCK 771 and quantification of R-(+)-enantiomer impurity in bulk drug. The calibration curves showed excellent linearity over the concentration range of 0.05-0.15 mg/ml for WCK 771 and 0.5-7.5 microg/ml for R-(+)-enantiomer. The precision (RSD) of the assay was 0.23%. The limit of detection and limit of quantitation of the method for WCK 771 were 0.015 and 0.06 microg/ml, respectively. The limit of detection and limit of quantitation for R-(+)-enantiomer were 0.025 and 0.09 microg/ml, respectively. The average recovery of the R-(+)-enantiomer was 100.5%. Same method was applied for the assay and determination of enantiomeric purity of WCK 771 in the intravenous formulation.     

柱切换技术-高效液相色谱法快速检测大鼠血浆中的普萘洛尔对映体

建立了快速检测大鼠血浆中普萘洛尔对映体浓度的柱切换-高效液相色谱法。将自制限进填料柱作为预处理柱,通过直接进样方式,使普萘洛尔对映体在预处理柱上保留,同时除去血浆中的蛋白质等大分子;再通过柱切换技术,使普萘洛尔对映体在键合型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiralcel OD-RH)分析柱上得到手性拆分。通过条件优化,确定切换前预处理流动相为硼酸盐缓冲液(pH 8.5)-甲醇(95:5, v/v),流速为1.0 mL/min;切换后分析流动相为异丙醇-乙醇-0.2 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 8.5)(30:30:40, v/v/v),流速为0.8 mL/min;切换时间为3 min;柱温为25 ℃;检测波长为293 nm。普萘洛尔两对映体在25～500 mg/L的质量浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.9995), 3个加标水平(50、100、250 mg/L)的平均回收率为97.89%～101.56%,日内和日间精密度均小于5%。该方法简便、快速、灵敏、准确,适于血浆样本中手性药物的药代动力学研究。     

Enantioselective separation and determination of the dinotefuran enantiomers in rice,tomato and apple by HPLC

An effective chiral analytical method was developed for the resolution and determination of dinotefuran enantiomers in rice, tomato and apple samples. Dinotefuran enantiomers were baseline‐separated and determined on a novel chiral column, ChromegaChiral CCA, with n‐hexane–ethanol–methanol (85:5:10, v/v/v) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min with UV detection at 270 nm. The resolution of dinotefuran enantiomers was about 1.8. The first eluted enantiomer was (+)‐dinotefuran and the second eluted one was (?)‐dinotefuran. The effects of mobile‐phase composition and column temperature on the enantioseparation were evaluated. The method was validated for linearity, repeatability, accuracy, LOD and LOQ. LOD was 0.15 mg/kg in rice and tomato, 0.05 mg/kg in apple, with an LOQ of 0.5 mg/kg in rice and tomato, 0.2 mg/kg in apple. The average recoveries of the pesticide from all matrices ranged from 75.8 to 92.9% for all fortification levels The precision values associated with the analytical method, expressed as RSD values, were <16.5% for the pesticide in all matrices. The methodology was successfully applied for the enantioselective analysis of dinotefuran enantiomers in real samples, indicating its efficiency in investigating the environmental stereochemistry of dinotefuran in food matrix.     

柱前衍生-超高效液相色谱法测定鱼卵中的17种氨基酸

建立了一种快速、灵敏的柱前衍生-超高效液相色谱-光电二极管阵列检测器(UPLC-PDA)测定史氏鲟(Acipenser schrenckii)、达氏鳇(Huso dauricus)和小体鲟(Acipenser ruthenus)鱼卵中17种氨基酸含量的方法。采用6.0 mol/L的盐酸水解鱼卵,提取液经低压浓缩、碱性中和,然后以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)为衍生试剂在pH 8.8硼酸盐缓冲溶液中衍生化。采用的色谱分离柱为Waters BEH C18柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm),流动相为30 mmol/L乙酸铵水溶液(pH 3.5)和乙腈(含0.15%(v/v)甲酸及30 mmol/L乙酸铵),梯度洗脱,流速为0.7 mL/min,在260 nm波长下检测。17种氨基酸在5.0～1000 μmol/L浓度范围内,峰面积与浓度之间的线性关系良好(r2≥0.9950)。以标准加入法测定回收率和相对标准偏差(RSD),在100、500、750 μmol/L的添加水平下,17种氨基酸的平均回收率为75.4%～107.3%, RSD为2.19%～12.3%。以3倍信噪比(S/N＞3)计方法的检出限,17种氨基酸的检出限为0.94～4.04 μmol/L。应用该方法检测了3种鲟鳇鱼鱼卵中的17种氨基酸含量。结果表明,该方法简便、准确、快速、可靠。     

高效液相色谱法拆分苯霜灵对映体

以高效液相色谱手性固定相法在对映体水平上建立了苯霜灵的分析方法。采用OD手性色谱柱,正己烷/异丙醇流动相,流速为1.0 mL/m in,检测波长206 nm,以圆二色检测器对两对映体进行出峰顺序确证并考察了其圆二色特性。结果显示,苯霜灵单一对映体在0.52~259.2 mg/L浓度范围内具有较好的线性,线性相关系数均大于0.9994,最低检出限为0.26 mg/L,在240 nm处的出峰顺序为( )/(-)。同时建立了苯霜灵对映体在土壤、水、葡萄中的残留分析方法。土壤和葡萄样品分别用丙酮和乙腈提取,水样用固相萃取法(SPE)富集净化。土壤中两对映体在0.025~2.5 mg/kg范围内的回收率为93.67%~108.95%之间;水样品在0.005~0.5 mg/L浓度范围的回收率在85.13%~100.79%之间,葡萄样品在0.04~1 mg/kg浓度范围的回收率在83.22%~106.62%之间;相对标准偏差RSD均小于6%。