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壳聚糖固定化胰蛋白酶的研究 总被引:14,自引:0,他引:14
以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用两种方法制备了固定化胰蛋白酶。考察了固定化反应中pH值,戊二醛的浓度,以及给酶量对固定化胰蛋白酶活力的影响,并研究了这两种固定化胰蛋白酶的性质。实验结果表明,以戊二醛预交联的网状壳聚糖为载体制备的固定化胰蛋白酶具有更加优良的性能,在最佳固定化反应条件下,酶的活性加收率可达56%。此固定化胰蛋白酶的最适pH为7.0-8.5,最适温度为60℃,Km值为2.52mol/L,固定化胰蛋白酶表现出较好的热稳定性,pH贮存稳定性,以及在乙醇水溶液中的稳定性。 相似文献
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在胰蛋白酶三维(3D)结构的基础上, 首先利用分子对接从ZINC 数据库中筛选获得了与胰蛋白酶具有较高亲和性的小分子配基2-硝基苯基-β-D-葡糖苷, 并分析了该配基与蛋白质之间的相互作用力主要为范德华和氢键相互作用. 并利用分子动力学模拟进一步验证了2-硝基苯基-β-D-葡糖苷与胰蛋白酶之间具有较强的亲和作用. 分子动力学(MD)模拟结果表明, 配基-目标蛋白质之间形成稳定的复合物且它们之间的距离基本没有变化. 此外, 一个水分子通过氢键在配基和目标蛋白质的结合腔之间架桥. 最后制备了偶联有该配基的亲和载体, 进行了胰蛋白酶的定向固定化, 并考察了该固定化酶的活性. 研究结果表明, 利用修饰2-硝基苯基-β-D-葡糖苷配基的亲和载体固定化胰蛋白酶的酶活达到340.8 U·g-1, 比活达到300.3 U·mg-1, 分别是未修饰亲和配基载体的10倍和5倍, 具有明显的优势. 上述结论证明了结合分子对接和分子动力学模拟理性设计定向固定化亲和配基的方法是可行的, 具有一定的理论和实用价值. 相似文献
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绿豆胰蛋白酶抑制剂片段及其类似物的合成 总被引:4,自引:0,他引:4
绿豆胰蛋白酶抑制剂的Lys活性碎片由两条分别含有26及9个氯基酸残基的多肽链通过两对分子间二硫键连接而成。用DTT还原能拆分两链,其中长链含6个半胱氨酸,在空气中氧化后能恢复25%原Lys碎片活力。本文报道了此长链的化学合成和二硫键重组。合成产物的氯基酸组成与文献报道的一致。但活性明显低于天然产物。为此对绿豆抑制剂的部分序列重新进行测定,结果表明原P_2′位的Lys应为Ile按新测定序列,从长链26肽的N端和C端各去掉两个残基合成一个22肽,此22肽的活性与天然的26肽相当。此外还合成了此22肽的类似物,其活性中心的Lys残基由Ala取代,产物对胰蛋白酶和弹性蛋白酶都无抑制活力。 相似文献
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从绿豆中提取的胰蛋白酶抑制剂,分子量为7984,具有两个活性中心,7对二硫键,属于Bowman-Birk抑制剂类型。用透析法和静置法生长出四方双锥和斜方柱两种晶体。用X1线旋进照相法测定它们的晶胞参数。四方双锥晶体属四方晶系,空间群P4_122(或P4_322),a=b=49.21(?),c=158.07(?)。每个晶体学不对称单位包含三个分子。斜方柱晶体属正交晶系,空间群P2_12_12,a=39.65(?),b=57.18(?),c=52.02(?)。每个晶体学不对称单位包含两个分子。 相似文献
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大豆制品中胰蛋白酶抑制剂的抑制活性测定 总被引:4,自引:0,他引:4
胰蛋白酶对苯甲酰-dl-精氨酸-p-硝基酰替苯胺盐酸盐(BAPA)水解的催化作用受到胰蛋白酶抑制剂的抑制效应而使水解反应产物在410 nm波长处的吸收减弱,其减弱程度反映了有关胰蛋白酶抑制剂的活性。基础于此原理建立了测定胰蛋白酶抑制剂活性的紫外分光光度法。用大豆标准品验证了所提出方法的可行性和准确度,10次测定结果的标准偏差值为3.0%。分析了一件大豆样品,10次测定结果的平均值为2 527 TIU/g,RSD值为1.2%。 相似文献
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交联酶聚体(CLEA)是一种新型的无载体固定化技术. 以胰蛋白酶为模型体系, 系统地研究了CLEA技术的制备工艺、应用条件、稳定性及结构形貌. (1)在制备工艺中考察了各步骤对CLEA酶活保留的影响, 重点分析了沉淀剂浓度、类型的影响, 结果表明100%乙醇是较为理想的沉淀剂; (2)在应用条件确定中测定CLEA的最适催化温度为70 ℃, 最适催化pH为9.0, 并解释了温度-活性、pH-活性曲线的漂移现象; (3)稳定性研究结果表明CLEA技术大幅提高了胰蛋白酶的热稳定性、溶剂稳定性, 且无酶泄漏; (4)在形貌表征中分别利用扫描电子显微镜、光学显微镜和激光粒度分析对CLEA的微观结构进行了多尺度研究, 着重讨论了其独特结构与优良特性间的关系. 本文所得结论为胰蛋白酶CLEA的应用提供基础数据, 并为CLEA技术应用于其它酶种提供参考. 相似文献
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用分子置换法成功地解得了MBILF-BTRY的晶体结构,并得到了它的立体结构模型。绿豆胰蛋白酶抑制剂属于絲氨酸蛋白酶抑制剂中结构最复杂的Bowman-Birk型抑制剂。这一类型抑制剂的立体结构以前尚未见报道。MBILF-BTRY复合物晶体的晶胞参数为a=62.99,b=63.54,c=69.70,α=β=γ=90°,空间群为P2_12_12_1,复合物分子量约为27500daltons。用理学电机的Ru-300型转靶X光机及AFC-5型四园衍射仪收集了分辨率为3范围内的独立衍射点5142个。以蛋白质数据库所取得的牛胰蛋白酶分子的座标为 相似文献
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磁性胰蛋白酶分子印迹聚合物的制备及性能评价 总被引:1,自引:0,他引:1
以壳聚糖修饰的四氧化三铁为载体,利用壳聚糖表面的氨基与戊二醛结合,丙烯酰胺为功能单体和交联剂,胰蛋白酶为模板蛋白,制备了磁性胰蛋白酶分子印迹聚合物。通过静态平衡结合法研究了磁性分子印迹聚合物的吸附能力、选择性。结果表明,与磁性分子非印迹聚合物相比,磁性分子印迹聚合物对模板蛋白具有高选择性和高特异性吸附,最大吸附量为162.2mg·g-1;Scatchard分析表明,存在两类不同的吸附结合位点,其离解常数分别为96.5μg·mL-1(高结合位点)和2.41mg.mL-1(低结合位点)。 相似文献
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本文测定了胰蛋白酶对正常的和经Tris洗过的菠菜叶绿体光诱导可变荧光的影响,发现:(1)酶消化对这两种叶绿体的可变荧光产率有明显的抑制作用;加入PS—Ⅱ电子供体SMCB可使抑制作用显著减轻,其荧光的恢复效率在两种叶绿体中接近相等.(2)在有DCMU存在下,酶诱导的上述抑制作用仍很显著,且不受外加受体的影响. 由上述结果得出结论:胰蛋白酶对PS—Ⅱ氧化侧有明显的钝化作用,钝化的部位在水裂解酶系统与SMCB插入的位置之间,而水裂解酶系统本身对酶消化不敏感;光合膜上可能有某种控制激发能转移和分配的蛋白质存在. 相似文献
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国内外的传统碱法制备明胶,无论是工艺还是最终产品质量,都已经达到了很高的水平,但仍存在很大的缺点,如浸灰周期长(一般1~2个月),生产效率低等。酶是一种有催化活性的蛋白质,能以非常低的浓度来增加正反应或逆反应的速度而不消耗自身。 相似文献