聚γ-谷氨酸对气相色谱-质谱检测地衣芽孢杆菌胞内代谢物的影响

通过添加外源聚γ-谷氨酸(γ-PGA),利用气相色谱-质谱法(GC-MS)评估了γ-PGA对地衣芽孢杆菌胞内代谢物检测的影响。结果表明:终浓度为10g/L的γ-PGA会使除谷氨酸外的氨基酸、有机酸和糖类标准品的检测峰面积明显降低;另外,终浓度为10g/L的γ-PGA对分析地衣芽孢杆菌胞内代谢物中的谷氨酸、葡萄糖和6-磷酸葡萄糖(G6P)的影响较为显著。因此,在利用GC-MS定量分析地衣芽孢杆菌的胞内代谢物前,应将γ-PGA和细胞分离。     

原子力显微镜对中性粒细胞与K562细胞超微结构及机械性能的探测

采用原子力显微镜在纳米尺度下对正常中性粒细胞与白血病细胞株K562细胞的表面形貌及细胞的硬度、粘附力进行定性定量分析.结果表明,相比正常中性粒细胞的平均粗糙度(Ra=5.31±1.52 nm),K562细胞的超微结构更为复杂,细胞表面平均粗糙度显著升高(Ra=26.54±8.01 nm).此外,细胞的生物机械特性也有显著差别:中性粒细胞的硬度为9.5±1.3 kPa,AFM针尖与中性粒细胞的非特异性粘附力为135±23.4 pN;K562细胞的硬度为3.0±0.8 kPa,AFM针尖与K562细胞的非特异性粘附力为95±15.6 pN.AFM在单细胞水平上的探测表明,中性粒细胞和K562细胞的超微结构和机械特性均有明显差异.通过对细胞表面超微结构和力学特性的探测可以诊断慢性粒细胞白血病,原子力显微镜有望成为临床肿瘤诊断的工具.     

MTT法测定稀土离子对BEL-7402及K562细胞的毒性及增殖毒性

用MTT法测定稀土离子在不同浓度、不同培养液中,与BEL 7402和K562细胞作用不同时间,对细胞的毒性和增殖毒性。结果表明,在含10%小牛血清培养液中,仅个别稀土离子在较高浓度时对BEL 7402细胞增殖有较弱的抑制作用;对于K562细胞,稀土离子在低浓度时对细胞增殖即表现出较强的抑制作用(P<0.05)。当培养液不含小牛血清时,较低浓度的稀土离子即可抑制BEL 7402细胞的增殖(P<0 05)。     

N''-叔丁氨基羰基-N-(5-取代苯基-2-呋喃甲酰基)硫脲的合成及对白血病K562细胞增殖的影响

将活性基团5-取代苯基呋喃环和叔丁氨基引入酰基硫脲的分子骨架中,设计合成了8个未见文献报道的N'-叔丁氨基羰基-N-(5-取代苯基-2-呋喃甲酰基)硫脲类化合物(5a～5h),结构经元素分析、IR和 1H NMR等测试技术得到确证. 经MTT(溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑)法观察,首次发现目标化合物对白血病K562细胞的增殖有明显的抑制作用. 在药物浓度为100×10-6 g/mL时,大部分目标化合物对白血病K562细胞生长的抑制率超过了70%,化合物5a对白血病K562细胞生长的抑制率达到77.14%. 其中,目标化合物5f和5h对白血病K562细胞有诱导作用,进一步的测试正在进行中.     

基于超高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用的白血病细胞及耐药细胞非靶标代谢组学研究

建立了一种基于超高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(UPLC-IT-TOF MS)联用的非靶标代谢组学方法,研究了人慢性髓系白血病细胞及其阿霉素耐药细胞(K562和K562-ADM)之间的代谢物差异。考察了细胞破碎方法、提取溶剂体系和溶剂体积对细胞代谢物提取效果的影响,实验发现采用超声破碎法,以800μL的80%甲醇提取时可得到较多的代谢特征峰,方法重复性和稳定性较高。将建立的方法应用于K562及K562-ADM细胞的代谢组差异研究,对所得数据进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)。结果显示2种细胞的代谢特征存在显著差异,并发现40个对分类有显著贡献的代谢物,差异代谢物主要参与氨基酸代谢、鞘脂代谢、嘌呤代谢和嘧啶代谢等通路。该方法可用于K562和K562-ADM细胞的代谢组差异研究,可望为白血病细胞耐药性的代谢组学研究提供帮助。     

骨巨细胞瘤组织块的冻存与复温培养观察

本文以10％二甲亚砜或15％甘油为保护剂,在液氮温度(-196℃)下将6例骨巨细胞瘤的组织块保存了3—180天.在复温培养中冻存组织块的各种细胞成分均能存活,其细胞形态、生长行为及乳酸脱氢酶同功酶谱等特点均与用新鲜组织块培养的细胞相同.电子显微镜观察显示二甲亚砜对细胞超微结构的冷冻保护作用优于甘油.本实验证明骨巨细胞瘤组织块的冻存以缓慢降温、快速复温为宜,因为在上述条件下冰晶主要形成于细胞间隙,对细胞损伤较小.     

仿生控冰材料用于细胞及组织的冷冻保存

冷冻保存是将细胞、组织或器官等生物样品置于超低温环境中, 使其代谢速率大大降低甚至停止, 以达到长期存储的目的, 并能在解冻后恢复其生理功能的科学与技术. 冷冻保存是当前实现生物样品长期存储的唯一有效手段, 是细胞治疗、再生医学以及器官移植等先进医疗技术充分发展的关键瓶颈之一. 然而, 由于细胞、组织中的含水量可高达70%~90%, 在不添加冷冻保护剂的情况下, 降温及复苏过程中伴随的冰晶损伤、渗透压失衡及溶质过度积累等必然会导致冻存失败. 传统冷冻保存策略通过大量使用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)等能与水形成氢键的有机小分子置换出部分胞内水分, 有效避免了胞内形成大冰晶及溶质过度积累等不利因素, 使细胞得以成功冻存. 然而, 该类小分子已被证实破坏蛋白质结构、胞间连接, 并且具有表观遗传毒性; 同时, 传统的冻存策略很难用于组织器官冻存. 因此冷冻保存科学与技术急需冷冻保护材料(剂)的创新, 以摒弃有毒小分子的大量使用, 实现细胞、组织及器官的安全高效冻存. 控冰蛋白是在极寒地区生物体内发现的一类高效冰晶成核与生长控制剂, 可以保护生物不受冰冻损伤. 揭示控冰蛋白作用机制将为仿生构筑高效控冰材料, 开发新型控冰冷冻保存剂提供全新的思路. 本综述将简单回顾冷冻保存的发展历史, 评述传统冷冻保存策略的优缺点; 从新型仿生控冰冷冻保护剂的研究出发, 重点阐述近几十年来控冰蛋白控冰机制的研究进展、仿生控冰材料的创制及其在冷冻保存中的应用; 最后将进一步展望仿生控冰冻存材料未来的发展方向.     

利用60Coγ-射线制备微生物聚谷氨酸类吸水剂及其吸水性能研究

对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)NK-03发酵合成的聚γ-谷氨酸(γ-PGA)进行了60Coγ-射线辐射交联,制备了γ-PGA水凝肢.确立了最适辐射总剂量为10kGy;最适γ-PGA溶液浓度为6%;且在辐射剂量率为1.0kGy/h～4.0kGy/h的范围内,剂量率对凝胶中特定水含量影响不大.在最适条件下形成的水凝胶中特定水含量为2052倍.干凝胶可以吸收1450倍去离子水,378倍人工血、131倍人工尿和198倍0.9%NaCl溶液.在pH值9.0时具有较强的溶胀能力.具有一定的耐温保水性能和较强的耐压保水性能.     

AFM研究蝙蝠葛碱对daudi细胞毒性的影响

利用原子力显微镜、CCK-8实验和流式细胞术研究了蝙蝠葛碱(dauricine)对B细胞淋巴瘤daudi细胞的细胞毒性。蝙蝠葛碱能显著抑制daudi细胞的增殖。CCK-8实验表明,细胞存活率与蝙蝠葛碱浓度存在时间依赖和剂量依赖关系。经10～50μmol/L的蝙蝠葛碱作用24 h后,daudi细胞存活率从(89.8±4.3)%降至(11.2±3.2)%;48 h后,存活率从(68.9±2.6)%降至(2.5±0.5)%。流式细胞术表明蝙蝠葛碱处理dau-di细胞24 h后,凋亡率从5.2%增至28.2%(60μmol/L)。AFM数据显示对照组细胞呈圆形,表面较光滑。经蝙蝠葛碱处理后,daudi细胞坍塌,超微结构显示细胞表面粗糙、凹凸不平。此外,经不同浓度蝙蝠葛碱作用的daudi细胞,其线粒体膜电位随着药物浓度的加大而降低。蝙蝠葛碱能显著抑制daudi细胞生长增殖。     

高效液相色谱法同时测定离体角膜灌流液中8个普萘洛尔衍生物

为了解促渗透剂对不同物质的促渗透能力,建立了采用高效液相色谱分离测定8个普萘洛尔衍生物的分析方法。采用盒式给药技术在离体角膜上皮侧给予普萘洛尔衍生物,内皮侧接收灌流液,用甲醇沉淀蛋白、高速离心后进样,采用Agilent Zorbax Extend色谱柱,以乙腈(A)-0.03%(v/v)磷酸水溶液(B)为流动相,在3%A～20%A间梯度洗脱,柱温30 ℃,检测波长205 nm。结果表明,该方法可在31 min内实现离体角膜灌流液中8个衍生物的完全分离和定量,线性范围为0.2(0.1)～40.0 μmol/L,线性关系良好,相关系数均不小于0.9970。其加样回收率为91.12%～105.73%,日内精密度(相对标准偏差(RSD))为1.00%～11.63%,日间精密度为1.18%～18.58%,样本冻存、冻融稳定性良好。该法适用于离体角膜灌流、细胞小室培养等跨膜吸收研究中普萘洛尔衍生物的检测。     

玻璃微流控芯片十二烷基硫酸钠无胶筛分电泳测定免疫球蛋白片段分子量

通过实验优化了葡聚糖筛分介质和运行缓冲溶液的浓度,采用十二烷基硫酸钠(SDS)无胶筛分电泳分离体系(10%(w/v)葡聚糖,0.1%SDS,10%甘油,0.2mol/LTris-硼砂,pH8.3的缓冲液)在自制的玻璃微流控芯片上高效分离了BODIPY衍生的蛋白质分子量标准样品,连续6次电泳所得迁移时间的相对标准偏差均小于0.50%。以6种蛋白质分子量的对数对其迁移时间作图,线性回归良好(r=0.994)。采用该芯片电泳分析体系对免疫球蛋白G不同片段的分子量进行了测定,所得结果与实际基本相符。     

长江三角洲平原河网水体溶存CH_4和N_2O浓度及其排放通量

以上海市黄浦江上游和崇明岛河网为代表,对长江三角洲平原河网夏季表层水体溶存甲烷(CH4)和氧化亚氮(N2O)浓度、饱和度及其水-气界面排放通量进行了研究.结果表明,河网水体溶存CH4浓度在(0.30±0.03)～(6.66±0.14)μmol·L-1之间,N2O浓度在(13.8±2.33)～(435±116)nmol·L-1之间,CH4和N2O溶存浓度处于高度过饱和状态(饱和度分别为(468±49.0)%～(11560±235)%和(175±29.5)%～(4914±1304)%).水体中溶解氧(DO)含量是控制溶存CH4浓度的主要因素,而水体溶存N2O的浓度同硝酸根(NO3-)、亚硝酸根(NO2-)、化学需氧量(CODcr)浓度呈显著正相关,同盐度和pH呈显著负相关关系.河道水体中溶存CH4和N2O主要产生于河底沉积物中的甲烷化过程和反硝化过程,并扩散到水体中,进而排放到大气.夏季7月上海市河网水体-大气界面CH4和N2O排放通量达到(778±59.8)和(236±63.6)μmol·m-2·h-1,平原地区河网的富营养化使其成为大气CH4和N2O的一个重要潜在排放源.     

一种液相色谱分离与质谱鉴定白血病K562细胞蛋白的方法

分别通过3种色谱模式:反相高效液相色谱(RPLC)、弱阴离子交换-反相高效液相色谱(WAX-RPLC)和排阻-反相高效液相色谱(SEC-RPLC)对K562细胞的蛋白质进行分离,收集的色谱馏分采用基质辅助电离解析时间飞行质谱(MALDI-TOF MS)进行鉴定后,比较所获得的蛋白质数据.结果显示:当选择SEC-RPLC模式构建K562细胞蛋白质图谱时,检测到的蛋白质数目最多,信息最为全面.此法的建立为白血病的临床研究提供了一种有效的手段.     

氨基酸消耗谱在区分不同作用机制抗癌药物中的应用

以邻苯二甲醛为衍生试剂,正缬氨酸为内标,采用柱前在线衍生高效液相色谱(HPLC)分离,荧光检测(FLD)的方法,建立了培养基中游离氨基酸(FAA)代谢消耗谱的定量分析方法。流动相A液为10 mmol/L Na2HPO4-Na2B4O7缓冲液(pH 7.95), B液为乙腈-甲醇-水(45:45:10, v/v/v);二元线性梯度洗脱,流动相B在35 min内由5%升至52%,33 min内17种FAA全部得到良好分离。应用该方法分别测定了HeLa细胞在紫杉醇和丝裂霉素干预24 h后的培养基氨基酸代谢消耗谱(以正常培养组为对照)。以相对峰面积作为原始数据,通过Matlab7.1软件平台,用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)得分图进行关联研究,结果表明: 与对照组相比,培养基游离氨基酸代谢消耗谱能够区分两种不同机制的抗癌药物,为抗癌药物筛选过程中的药物作用机制预归类提供了一种新的技术方法。同时,这种以外观内的方法具有方便、经济的特点。     

用计时电位法测定镧在铝液中的扩散系数

采用新的阳极溶解的计时电位法,测定了稀土金属镧在铝液中的扩散系数。在973K时,测得(Al)=(1.21±0.02)×15~(5)cm~2·s~(-1)。在953～1053K温度范围内,扩散系数与温度的关系为lgD_(La)(Al)=1.04×10~(-4)—4770/T,计算出扩散激活能Q=91.34KJ/mol。     

水溶性的半胱氨酸-β-环糊精铂配合物的合成及生物活性研究

利用半胱氨酸修饰的β-环糊精与K2PtCl4反应得到了水溶性的铂配合物(Pt(L-Cys-β-CD)Cl_2).通过质谱、元素分析和核磁等手段对合成的铂配合物进行表征.利用MTT法对该铂配合物的抗肿瘤活性进行研究.主要选择K562,HepG2和7701三种细胞对这种铂配合物的细胞毒性进行研究,结果表明该铂配合物具有较高的细胞抑制率.其在K562细胞中的IC50值为(89.5±2.6)μmol/L.更有意义的是,这种铂配合物对正常细胞7701的细胞毒性要明显低于另外两种癌细胞.因此,该类铂配合物有望作为潜在的抗肿瘤药物.     

深海链霉菌Streptomyces malaysiensis OUCMDZ-2167来源的细胞毒性产物

研究深海沉积物来源的链霉菌Streptomyces malaysiensis OUCMDZ-2167的活性天然产物.采用硅胶和凝胶柱色谱及高效液相色谱等手段,从链霉菌S.malaysiensis OUCMDZ-2167的发酵产物中分离纯化了1个新的呋喃衍生物1以及10个已知物2~11;采用质谱、紫外、红外、核磁共振和比旋光等方法将其结构分别鉴定为:4-羟甲基呋喃-2-甲酸甲酯(1)、呋喃-2,4-二甲酸二甲酯(2)、格尔德霉素(3)、17-O-去甲基格尔德霉素(4)、尼日利亚菌素(5)、尼日利亚菌素钠(6)、30-O-乙酰基尼日利亚菌素(7)、奥布菌素(8)、洋橄榄叶素(9)、surugapyrone A(10)和杀菌素A(11).采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和噻唑蓝(MTT)法分别评价了化合物对K562和MCF-7及A549肿瘤细胞株的细胞毒活性,结果表明:化合物3、5~9对A549的半数抑制浓度(IC_(50))分别为2.56±0.30、0.96±0.03、0.96±0.04、0.81±0.05、7.11±0.90和4.09±0.70μmol·L-1,化合物5~9对K562的IC_(50)值分别1.46±0.11、1.08±0.03、0.48±0.10、4.68±0.19和9.60±0.50μmol·L-1,化合物5、8和9对MCF-7的IC_(50)值分别为0.29±0.15、4.05±0.50和4.81±0.70μmol·L-1;其中化合物5~8对K562和A549以及化合物5和8对MCF-7的细胞毒活性为首次报道.     

硒化螺旋藻对实验诱发大鼠肝癌过程的作用

目的:观察硒化螺旋藻(Se-spirulina)对黄曲霉毒素B1(AFB1)致肝癌作用的影响。方法:实验动物按随机区域分组法分为A、B、C组,每组15只,A、B、C组分别为高剂量组、低剂量组、对照组,各组动物腹腔注射AFB1两周,A、B组大鼠在接受AFB1期间分别喂食含量分别为9.3×10-3和2.3×10-3的硒化螺旋藻混合饲料,8周后处死动物,观察各组动物肝组织内γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞增生灶(-γGT灶)的数量(个/cm2)和大小(mm2/个)。结果:高、低剂量硒化螺旋藻均能抑制AFB1诱发的-γGT灶的数量和大小,高剂量组、低剂量组-γGT灶的数量分别为(0.90±1.07)个/cm2和(3.72±4.72)个/cm2,均低于对照组(6.10±6.30)个/cm2,高剂量组与对照组相比有显著意义(P<0.05),抑制率分别为85%和39%;高剂量组、低剂量组-γGT灶大小分别为(0.24±0.28)mm2/个和(1.94±2.32)mm2/个,均低于对照组(2.36±3.76)mm2/个,但无显著意义(P>0.05),抑制率分别为90%和17%。结论:硒化螺旋藻有抑制AFB1诱发大鼠肝癌前病变的作用,而高剂量硒化螺旋藻的抑制作用更优。     

农产品中6种有机溶剂残留的气相色谱-质谱检测方法

建立了蔬菜、粮食等农产品中6种有机溶剂残留(甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSO)的液液萃取/气相色谱-质谱分析方法。不同类型的样品经乙腈-水溶液或乙腈溶剂提取后,用Agilent DB-624(30.0 m×250μm×1.4μm)毛细管色谱柱分离,在GC-MS选择离子监测(SIM)模式下检测,以保留时间和特征离子丰度比定性,外标法定量。结果表明,该方法对不同样品中4种苯系物在0.005~0.500 mg/L,DMF在0.025~0.125 mg/L,DMSO在0.050~0.500 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.992 0~0.997 1。6种有机溶剂的平均加标回收率为60.1%~115.2%,相对标准偏差不大于11.0%。苯系物、DMF和DMSO的方法检出限(S/N=3)分别为0.002~0.050,0.010~0.025,0.060~0.150 mg/kg。该方法准确、快速、灵敏,可用于各种农产品中有机溶剂残留的监控。     

漩涡辅助-分散液液微萃取-高效液相色谱法测定沉积物中的多环芳烃

建立了漩涡辅助萃取(VAE)分散液液微萃取(DLLME)高效液相色普法(HPLC)测定水系沉积物中多环芳烃(PAHs)的方法。对萃取剂和分散剂的种类及体积、萃取时间、盐效应及pH值等参数进行了优化。在优化条件下,方法检出限为2.3～6.8 ng/g,线性范围为10～2100 ng/g,相关系数0.9986～0.9994,低、中、高3个浓度水平的平均加标回收率分别为85.2%±4.7%,85.0%±5.0%和85.0%±5.1%,平均相对标准偏差(RSD)分别为5.7%,6.1%和5.7%。采用本方法对实际沉积物样品中PAHs进行分析,所有沉积物样品中均检出PAHs,3组不同采样深度沉积物样品中PAHs平均含量分别为73.3,49 8和28.3 ng/g,平均加标回收率分别为84.8%±4.8%,83.1%±4.7%和84.6%±4.6%。