基于共振瑞利散射血清蛋白浓度检测的研究

血清中蛋白质浓度在临床诊断中有重要意义,而目前广泛使用的紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计等仪器结构复杂、昂贵、体积庞大、耗电量高等因素,都无法满足现场高精度检测的要求。设计了基于四羧基酞菁锌-蛋白质体系的共振瑞利散射光谱检测系统,系统以405 nm宽禁带半导体激光器为激励光源,以475 nm窄带带通滤光片为单色器,以蓝光增强光敏二极管的低噪声高增益光电放大器为探测器。通过实验可知,该溶液强吸收波长为420 nm附近,在该激励光作用下,其共振波长处会产生共振瑞利散射,散射强度与蛋白质的含量成比例,可以利用四羧基酞菁锌为光谱探针的共振散射法来测定血清蛋白,其线性检出范围为10～50 mg·mL-1,检出限为0.001 mg·mL-1。新开发的血清蛋白质测试装置具有体积小、成本低、功耗小、使用方便等优点。     

液相纳米硒微粒的性质及其共振瑞利散射光谱研究

常温常压下,在0.24 mol·L-1的盐酸介质中,二氧化硒与过量的抗坏血酸(Vc)作用,生成单质硒Se(0),获得含有纳米硒微粒的均匀溶液;采用透射电镜和激光散射技术,测出Se(0)以26～243 nm的球形聚集状态存在,并在470 nm处有最强的共振瑞利散射(RRS),在入射波长2倍和1/2处分别有二级散射(SOS)和倍频散射(MFS),其共振瑞利散射强度ΔI₄₇₀与Se(Ⅳ)的浓度在2.82×10-9～5.64×10-6 g·mL-1范围内呈线性关系,相关系数为0.997。     

吖啶橙共振光散射法测定脱氧核糖核酸

研究了吖啶橙与DNA作用的共振散射光谱,发现在pH 11的碱性溶液中痕量核酸对吖啶橙的共振散射光产生增强作用,且增强程度与核酸浓度之间有良好的线性关系。据此建立了测定核酸的高灵敏共振光增强分析方法。其最大散射波长均位于324 nm处,测定鱼精DNA(fs DNA)的线性范围是3.1×10-8～7.3×10-6 g·mL-1,检测限20.5 ng·mL-1,测定小牛胸腺DNA(ct DNA)的线性范围是7.5×10-8～9.8×10-6 g·mL-1,检测限20.8 ng·mL-1。该方法简单,操作方便,选择性好,灵敏度高,用于合成样品的测定结果满意。     

新的光散射体系测定蛋白质的研究

以1,6-己二胺二吖啶为荧光探针,建立了一种新的蛋白质共振散射检测体系。实验考察了该吖啶荧光探针的共振散射特征光谱、散射反应稳定性,研究了缓冲介质pH、探针浓度等参数对测定蛋白质的影响。结果表明,当pH 8.9时,1,6-己二胺二吖啶染料的散射波长为470 nm;加入BSA,反应约9 min后,体系光散射强度达到最大并维持稳定,2 h内无明显变化。当1,6-己二胺二吖啶探针(浓度1.00×10-4mol·L-1)用量为3.00 mL时,蛋白质与1,6-己二胺二吖啶的光散射增强作用显著,共振散射强度随着BSA的增加而明显增强,光散射强度与蛋白质浓度成良好线性关系,线性浓度范围为1.00～5.00 μg·mL-1,检测限(3σ/K)为0.085 μg·mL-1。测定了血清样品,浓度为2.00～4.00 μg·mL-1,回收率为98.0%～101.7%,测定偏差小于1.7％。     

光谱法研究盐酸多塞平与固绿的相互作用及其分析应用

研究了盐酸多塞平与固绿相互作用的共振光散射光谱及紫外-可见吸收光谱的光谱特征。在pH 4.0的缓冲溶液中,盐酸多塞平与固绿由于静电引力而相互结合,使体系在344和468 nm处的两个共振光散射峰显著增强,其中344 nm处共振光散射的灵敏度最高。研究了试剂加入顺序,介质种类和酸度以及固绿用量对体系的影响。在最佳实验条件下,共振光散射增强的强度与浓度在8.75×10-3～4.88×10-2 mg·mL-1的盐酸多塞平具有良好的线性关系。方法的检出限为1.72×10-5 mg·mL-1。对浓度为0.025 mg·mL-1的盐酸多塞平溶液进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.4%。该方法用于测定药物中的盐酸多塞平,并与药典中的测定方法进行了对照,经t-检验证明两种方法无显著性差异。     

十六烷基三甲基溴化铵敏化孔雀石绿-脱氧核糖核酸的共振光散射增强法测定脱氧核糖核酸

在碱性条件下 ,脱氧核糖核酸 (DNA)对孔雀石绿的共振光散射有增强作用 ,加入十六烷基三甲基溴化铵 (CTMAB)进一步敏化该体系。共振光散射增强的程度与DNA浓度呈良好的线性关系 ,据此建立了测定DNA的共振光散射增强分析方法。在实验条件下 ,最大散射波长 36 4nm处 ,测定小牛胸腺DNA(ctDNA)和鱼精子DNA(fsDNA)的线性范围皆为 0～ 1 5 μg·mL-1,检出限分别为 0 0 5和 0 0 3μg·mL-1。该方法简单、快速、灵敏度高 ,已成功应用于合成样品中DNA含量的测定。     

金纳米棒表面等离子体共振瑞利散射能量转移光谱测定痕量硼

硼是一种生命体必需的微量元素,但过量的硼对人体以及动植物有害。建立一种高灵敏度,高选择性以及简便的硼检测方法,对于环境和人类健康都具有很重要的意义。本研究的目的是建立一种简便,灵敏,选择性测定硼的金纳米棒等离子体共振瑞利散射能量转移光谱新方法。直径为12 nm, 长度为37 nm的金纳米棒采用种子生长法制备。在pH 5.6的NH₄Ac-HAc的缓冲溶液中和甲亚胺-H存在下,金纳米棒在404 nm处产生较强的共振瑞利散射峰。当体系中存在硼酸时,硼酸与甲亚胺-H形成硼酸-甲亚胺-H配合物。作为散射受体的配合物与散射共振能量转移的给体纳金米棒靠近时,发生瑞利散射共振能量转移,导致瑞利散射信号猝灭。随着硼酸浓度的增加,形成的配合物增加,金纳米棒转移给黄色配合物的散射光能量增大,导致体系404 nm处的瑞利散射强度线性降低。其降低值ΔI_{404 nm}与硼的浓度在10～750 ng·mL-1范围内呈良好的线性关系。考察了共存物质对该法测定2.3×10-7 mol·L-1 B的干扰情况。结果表明该法具有较高的选择性,即4×10-4 mol·L-1的Mn2+,Cd2+,Zn2+,Bi3+,Na+,Al3+,葡萄糖,Hg2+,IO-₃,F-,SO2-₄,SiO2-₃,NO-₃,ClO-₄,过氧化氢等对硼的测定无干扰。据此建立了一个灵敏度高,选择性好,简便快速检测硼的瑞利散射共振能量转移新方法。     

曲利本蓝与硫酸奈替米星和硫酸依替米星相互作用的共振瑞利散射光谱及分析应用

在酸性条件下,曲利本蓝(TB)、硫酸奈替米星(NETS)或硫酸依替米星(ETS)各自的共振瑞利散射(RRS)强度十分微弱,但TB与NETS或ETS相互作用形成离子缔合物时能使RRS强度显著提高并产生新的RRS光谱.TB-NETS和TB-ETS体系均有两个强的散射带,最大散射峰位于717nm处.分别在0.2-8.0μg·mL-1和0.4-7.0μg·mL-1范围内RRS强度与NETS和ETS浓度呈线性关系,据此建立了NETS和ETS的测定方法.方法有较好的选择性,可用于市售NETS和TES注射液中药物含量的快速测定.     

抗凝血酶Ⅲ的免疫共振散射光谱分析

在pH 7.2的Tris-HCl缓冲溶液中和聚乙二醇6000（PEG-6000）存在下,羊抗人抗凝血酶Ⅲ与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）发生免疫反应形成疏水性的免疫复合物微粒,导致体系的共振散射强度增强,在波长为368,491和538 nm处出现3个共振散射峰,其中491 nm处的峰最强。分别考察了pH、AT-Ⅲ和PEG-6000浓度、温育时间和温度、共存物质的影响。在选定条件下,AT-Ⅲ浓度在62.5～875 ng·mL-1范围内与491 nm处体系的散射强度呈良好的线性关系,其回归方程为ΔI_RS=62.5c+1.36,相关系数为0.996,检出限为29.4 ng·mL-1。该方法简便、灵敏和选择性好,用于人血中AT-Ⅲ含量的测定,结果满意,回收率在90.2%～108.9%之间。     

镉(Ⅱ)的共振散射光谱研究及应用

由于镉在环境中具有高毒性和生物蓄积性,对人体和环境会产生巨大的危害,因而测定其在环境中的浓度是十分必要的。本研究基于镉（Ⅱ）-蛋白质-刚果红体系的共振瑞利散射和共振非线性散射光谱建立了测定环境水样中微量镉（Ⅱ）的新方法。在pH=4的BR缓冲溶液中,镉（Ⅱ）与牛血清白蛋白溶液及刚果红溶液反应生成三元离子缔合络合物,使该体系中的共振瑞利散射（RRS）、二级散射（SOS）和倍频散射（FDS）信号明显增强,其最大散射波长分别位于波长560 nm（RRS）、690 nm（SOS）和352 nm（FDS）处。在优化的实验条件下,ΔI与镉（Ⅱ）浓度在一定范围内呈现良好的线性关系,检出限分别为0.31 μg/L（RRS）、0.29 μg/L（SOS）、0.34 μg/L（FDS）。将该方法用于实验室废水、涪江河水和农夫山泉中镉（Ⅱ）的测定,水样中镉（Ⅱ）的回收率在93.2%~107.7%之间,相对标准偏差在0.8%~3.1%之间,取得了较理想的结果。     

铽-茜素红作为光散射探针测定洛美沙星的共振瑞利散射光谱及其应用

提出了共振瑞利散射光谱法测定洛美沙星的新方法。在pH 5.0—6.0的HAc-NaAc缓冲溶液中,铽()与洛美沙星(Lomefloxacin,LOM)抗生素能形成阳离子配合物,它可进一步通过静电引力和疏水作用与茜素红(Alizarin Red,AR)阴离子反应形成1:2:1(Tb3+:LOM:AR)三元离子缔合物,此时将出现新的共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering,RRS)光谱,其两个散射峰分别位于370nm和590nm处。在370nm处,一定浓度的洛美沙星与散射增强(ΔI)成正比,其线性范围和检出限(3σ)分别是0.004—3.52μg.mL-1和14.3 ng.mL-1。该方法简单、快速、具有良好的选择性和重复性,可用于不同体液中洛美沙星药物的测定。文中还对反应机理作了讨论。     

共振瑞利散射光谱法测定人体血浆和尿液中的加替沙星

提出了共振瑞利散射光谱法测定加替沙星的新方法。在pH5.2—5.6的Britton-Robinson缓冲溶液中,加替沙星(Gatifloxacin,GTFX)与钴(Ⅱ)能形成阳离子配合物,它可进一步与酸性染料刚果红(CR)阴离子反应形成2:1:1(GTFX:Co~(2+):CR)的三元离子缔合物,使共振瑞利散射(RRS)急剧增强,其2个散射峰分别位于382nm和560nm处。在382nm处,加替沙星的浓度在0—5.26μg·mL~(-1)范围内,与RRS强度有良好的线性关系,检出限(3σ)为7.5ng·mL~(-1)。此方法简便、快速,且具有良好的选择性,用于片剂、尿液和血浆中加替沙星的测定,其回收率在96.1%—103.6%。     

用适配体修饰纳米金做共振瑞利散射光谱探针检测妥布霉素

用硼氢化钠还原氯金酸制备了金纳米粒子(GN),用妥布霉素适配体(Apt)修饰GN可获得较稳定的Apt-GN探针。在pH 6.8 Na₂HPO₄-NaH₂PO₄(PBS)缓冲液及NaCl存在下,Apt-GN探针稳定而不聚集;当有妥布霉素(Tbc)存在时,它与Apt-GN探针中的Apt特异性结合并释放出纳米金,纳米金在NaCl作用下聚集,导致体系在368 nm处的共振瑞利散射光增强。在选定实验条件下,368 nm处的共振散射峰强度的增大值ΔI与抗生素妥布霉素(Tbc)浓度在1.9～58.3 ng·mL-1范围内呈良好线性关系,其线性回归方程为ΔI=35.3c-23,检出限为0.8 ng·mL-1 妥布霉素。分别对10.0,20.0和30.0 ng·mL-1 Tbc平行测定5次,求得其相对标准偏差分别为6.8%,5.0%和4.4%。考察了共存离子对测定38.9 ng·mL-1 妥布霉素的干扰情况。结果表明,当相对误差在±10%以内,80倍Zn2+;40倍L-谷氨酸,Cu2+,Mg2+,Ca2+;20倍葡萄糖、盐酸土霉素;10倍L-苯丙氨酸、甘氨酸;2倍L-天冬氨酸;6倍HSA和BSA不干扰测定。这说明本方法具有较好的选择性。该法用于分析测定妥布霉素滴眼液中的妥布霉素含量,结果令人满意,相对标准偏差在6.5%～7.6%之间,回收率在95.0%～107%之间。     

Study on the Interaction Between Verapamil Hydrochloride and Eosin Y by Absorption,Fluorescence and Resonance Rayleigh Scattering Spectra and Their Analytical Applications

In pH 2.8~3.6 HCl-NaAc buffer solution, eosin Y (EY) can react with verapamil hydrochloride(VP) to form a 1:1 ion-association complex, which not only causes the change of absorption spectra and the quenching of fluorescence, but also results in the great enhancement of resonance Rayleigh scattering (RRS). Furthermore, a new RRS spectrum with the maximum wavelength at 324 nm will appear. In this work, the spectral characteristics of absorption, fluorescence and resonance Rayleigh scattering spectra, the optimum conditions for the reaction, the influencing factors and the analytical properties have been investigated. Thereby, a sensitive, simple, rapid and new method for the determination of VP by using eosin Y as a probe has been developed. The detection limit is 0.95 ng/mL for RRS method, 6.4 ng/mL for fluorophotometry and 0.18 μg/mL for spectrophotometric method. The absorbance, RRS and fluorescence intensity is proportional to the concentration of VP in the range of 0.6036~4.0 μg/mL, 0.0032~4.5 μg/mL and 0.0213~4.0 μg/mL, respectively. The effects of the reaction of verapamil hydrochloride and eosin Y on the absorption, fluorescence and resonance Rayleigh scattering spectra have been investigated. Meanwhile, the influences of coexisting substances are tested by RRS method and the results show that this method can be satisfactorily applied to the determination of VP in tablet and human serum samples. The composition and structure of the ion-association complex and the reaction mechanism are discussed. Moreover, the energy transfer among absorption, fluorescence and RRS was investigated briefly in this work.     

玫苯胺共振光散射法测定DNA

本文研究了三苯甲烷类碱性染料玫苯胺与DNA作用的共振光散射光谱 ,在 pH =10 5～ 11的范围内 ,DNA的加入导致玫苯胺共振光散射的增强 ,在 4 85nm处 ,存在一共振光散射增强峰 ,其强度与DNA的浓度呈线性关系 ,据此建立了一种测定DNA的共振光散射法。方法的线性范围为 0～ 1 0 0mg·L-1,检测限为14 2ng·mL-1。将该方法用于混合样品中DNA的测定 ,结果令人满意。     

DNA酶裂解-纳米金共振瑞利散射光谱法测定痕量Cu2+

在pH 7.0HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲溶液中和0.19mol.L-1 NaCl存在下,单链底物DNA(SS)和酶链DNA(ES)在80℃杂交形成双链DNA(dsDNA)。Cu2+可切割dsDNA中的底物链释放出单链DNA(ssDNA),此ssDNA与金纳米粒子(NG)作用形成NGssDNA结合物不被NaCl聚集,而未保护的NG聚集形成较大粒径的聚集体(NGA),在627nm处有一个较强的共振瑞利散射峰。随着Cu2+浓度的增大,该共振瑞利散射峰降低,其降低值ΔI与Cu2+浓度在15～1 250nmol.L-1范围呈线性关系,其回归方程为ΔI=0.17c-2.3,线性相关系数为0.989 5,检出限为8nmol.L-1。据此建立了一个高灵敏、高选择性、简便测定Cu2+的共振瑞利散射光谱分析法。该法用于水样中Cu2+的检测,结果满意。     

滂胺天蓝共振瑞利散射法测定穿琥宁

在pH4.5的酸性溶液中,取适量穿琥宁溶液和滂胺天蓝溶液混合,以二次蒸馏水稀释,放置一段时间后在荧光光度计上以λem=λex方式进行同步扫描;滂胺天蓝和穿琥宁能够迅速反应生成离子缔合物,导致共振瑞利散射（RRS）光谱的改变,产生较特征的、新的RRS光谱,最大峰值在717.5nm处,并且在35—95mg/L范围内,RRS强度和穿琥宁的浓度成正比;由此建立了测定穿琥宁的共振瑞利散射法。