漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅵ．漆酶的催化氧化反应机理研究

在静止条件下，用分光光度法研究了底物２，３－二氰基－５，６－二卤氢醌（ＤＤＸＱＨ２，Ｘ＝Ｃｌ，Ｂｒ．Ｉ）的漆酶催化氧化反应，考察了底物离解与反应的关系，考察了半醌自由基的形成和衰减动力学，测定了不同ｐＨ条件下的表现反应速度常数（ｋｏｂｓｄ）、米氏常数（ｋｍ）、半醌自由基的形成速度常数（ｋｆ）和半醌自由基的衰减速度常数（ｋ２ｄ），探讨了环境对半醌自由基形成与衰减的影响，鉴定了反应最终产物的结构．结果证明：１）、底物的一级离解种是底物参与反应的必要形式；２）、半醌自由基阴离子是酶反应的直接产物；３）、半醌自由基的衰减是非酶的歧化反应，４）、由酶反应和非酶反应两部分构成的反应全过程是通过半醌自由基的形成和衰减作纽带联系着的，两个反应部分既独立又偶联，表现为一种特殊的连串反应属性．在此基础上，提出了邻、对苯二酚的漆酶催化氧化反应机理．     

漆树漆酶催化氧化对苯二胺反应的微量热法研究

在厌氧条件下，０．１ｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝７．４）中，用微量热法测定了２９８．１５Ｋ时漆树漆酶与对苯二胺反应的摩尔反应焓ΔｒＨｍ＝－１６３．３６±０．３６ｋＪ／ｍｏｌ，米氏常数Ｋｍ＝５．５８×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和表观一级反应速率常数ｋ１＝８．６３×１０－３ｓ－１，及此条件下用对苯二胺作底物时的漆酶活性值ＥＡ＝０．０４５ＩＵ．还利用阿伦尼乌斯经验公式计算了该反应的表观活化能，并讨论了酶－底复合过程的结合能ΔＧ０的计算．     

漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅸ．含叔丁基的儿茶酚类底物的漆酶催化氧化

用分光光度法对６个含叔丁基的儿茶酚类底物在不同ＰＨ条件下的离解和漆酶催化氧化行为进行了考察，测定了它们在ＰＨ８．０时的反应速度常数．结果表明，叔丁基的疏水性较好地适应了漆酶对底物疏水程度的要求，使这类底物更容易为漆酶所包结；漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子所提供的ｐＨ环境和质子转移作用，促进了这类底物的离解，使这类底物能在远低于其一级离解所需ｐＨ的环境中进行反应．速度常数数据显示，取代基的疏水作用和取代基参与双齿配位的能力是影响这类底物反应速度的主要因素；在叔丁基的存在下，取代基的电子效应对这类底物的反应速度的影响变得不明显．     

分子内相互作用的认知: 二茂铁共轭联多吡啶配体及其配合物的结构及性质

报道了６－二茂铁基－２，２－联吡啶（ｆｃｂｐｙ）配体和４－二茂铁基－２，２，６，２″－联三吡啶（ｆｃｔｐｙ））的Ｍｎ（Ｉ）配合物１（［Ｍｎ（ＩＩ）（ｆｃｔｐｙ）２］（ＣｌＯ４）２·２Ｈ２Ｏ）的晶体结构．电化学研究结果显示：联多吡啶取代基的吸电子诱导效应使二茂铁部分的氧化电位发生了明显的正移．而配体ｆｃｔｐｙ与其配合物１的结构比较表明：Ｍｎ（Ｉ）离子的引入对配体部分的键长却没有明显影响     

漆树漆酶的催化氧化作用 Ⅶ．稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用

以５，６－溴－２，３－二氰基氢醌为底物，在ｐＨ４．０～６．０条件下，用分光光度法考察了稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用，探讨了抑制特征、抑制位点和作用方式．结果证明，稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制属竞争性抑制过程．稀土金属离子的抑制作用是通过它与漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子的配位相互作用实现的；在这种作用下，ω－羧基阴离子对废物酚羟基的氢键或碱催化作用被削弱，使田羟基中的氢以Ｈ＋方式离去的速度受到阻碍．在ｐＨ４．５条件下，Ｌａ３＋离子与ω－羧基阴离子配合反应的解离常数（Ｋｉ）经测定为２．４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１．研究表明，漆酶分子中的酸性氨基酸残基对于酶－底物复合物的形成及进一步反应，尤其是酚羟基中氢的离去起着十分重要的作用．     

两种二茂铁甲基二氧大环多胺的电化学性质

利用循环伏安法对我们新设计合成的两种二茂铁甲基二氧大环多胺化合物——１－二茂铁甲基－１,４,８,１１－四氮杂环十三烷－５,７－二酮（简称ＦｃＣＨ２Ｌ１）和１－二茂铁甲基－１,４,７,１１,１４－五氮杂环十六烷－３,１５－二酮（简称ＦｃＣＨ２Ｌ２）——的电化学性质进行了研究,包括酸碱度的影响以及它们对Ｚｎ２＋,Ｃａ２＋,Ｃｄ２＋,Ｃｕ２＋,Ｎｉ２＋,Ｃｏ２＋等金属离子的电化学响应情况．在乙醇和水的混合溶剂体系中化合物ＦｃＣＨ２Ｌ１对Ｎｉ２＋具有选择性络合,而化合物ＦｃＣＨ２Ｌ２对高氧化态的Ｎｉ３＋有稳定作用     

不可微方程组的拟Newton法

本文讨论非线性方程组：Ｆ（ｘ）＝０求解的拟出Ｗｅｗｔｏｎ法．其中Ｆ（ｘ）：Ｒｎ→Ｒｎ局部Ｌｉｐｓｃｈｉｔｚ连续．在Ｆ（ｘ）半光滑的条件下，ＱｉＬ．与ＳｕｎＪ．（１９９３，Ｍａｔｈ．Ｐｒｏｇ．）提出了广义Ｎｅｗｔｏｎ迭代格式：其中为Ｆ在ｘｋ点的广义Ｊａｃｏｂｉａｎ矩阵．由于计算Ｖｋ比较复杂，即使可微情况也应尽可能避免．因此，本文提出了如下拟Ｎｅｗｔｏｎ迭代格式：ｘｋ＋１＝ｘｋ－Ｊ（ｘｋ，ｓ）－１Ｆ（ｘｋ）其中Ｊ（ｘｋ，ｓ）为的一致相容逼近，并证明此迭代函数为收缩映射，从保证了局部收敛性．为构造Ｊ（ｘ，ｓ），本文提出了两种方法：差分逼近与ε－ｓｕｂ—Ｊａｃｏｂｉａｎ逼近方法．前者具有一定的局限性．后者适用于广泛一类的问题．它是ε－次梯度概念在非线性方程组领域的延伸．本文的两个命题保证其具有重要的应用价值．另外，本文还提出了模减技巧以保证Ｎｅｗｔｏｎ法与拟Ｎｅｗｔｏｎ法平稳收敛。     

萝卜叶绿体rbc L基因定位及ctDNA基因文库的构建

用改进的高离子强度法分离的萝卜叶绿体（ｃｔ）经ＳＤＳ６０℃裂解，抽提的ｃｔＤＮＡ只需简单纯化即可用于酶切分析．萝卜ｃｔＤＮＡ用４种限制性内切酶ＢａｍＨⅠ，ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ分别进行单酶完全酶解，推算其分子量和长度分别为８２．５×１０６和１２５ｋｂ．以Ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ标记的异源探针ｒｂｃＬ基因与ｃｔＤＮＡＥｃｏＲⅠ片段进行杂交，初步定位在Ｅ１１片段（１．７ｋｂ）上．以ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＭ１３为载体构建了萝卜ｃｔＤＮＡＥｃｏＲⅠ基因文库     

氮化碳薄膜的红外吸收光谱(FTIR)研究

测量了采用ＲＦ－ＣＶＤ方法制备的氮化碳薄膜的ＦＴＩＲ曲线，膜层中的Ｃ—Ｎ键、石墨相、ＣＮ键和ＣＮ键的红外吸收峰波数分别为１２５０ｃｍ－１，１５７６ｃｍ－１，１６８７ｃｍ－１和２０５４ｃｍ－１．采用技术措施避免石墨相析出的氮化碳薄膜，其红外吸收谱只出现了Ｃ—Ｎ键的伸缩振动吸收峰（９４８ｃｍ－１）．薄膜中的其它功能基团的存在对Ｃ—Ｎ键的振动频率有一定的影响．     

饲用纤维素酶活力测定方法的改进

探讨和分析了影响3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定饲用纤维索酶活力的几个因素．研究表明，测定条件对测定结果影响较大，因此进行纤维索酶活力测定时．必需规定测试条件．通过对饲用纤维索酶的实验表明：在40℃，pH4．8．反应时间30min，底物为0．8％羧甲基纤维索钠（CMC—Na）以DNS法测定酶活较为合适，同时待测酶液的浸提时间为室温下1h，空白对照样的酶液灭活时间应大于15min．     

外显子拼接法合成真菌灵芝漆酶基因cDNA

为真菌漆酶基因cDNA的克隆提供了一种简便快速的新方法．从含有内含子的灵芝漆酶基因出发，采用外显子拼接PCR方法，合成了灵芝漆酶的cDNA．设计了10对引物分别经PCR扩增该基因的10个外显子，引物设计使前一个外显子的下游引物与下一个外显子的上游引物都有一段同源匹配序列，然后通过两两片段混合作为模板PCR扩增得到两两拼接的外显子片段，再将得到的5个片段前两个混合，后3个混合分别作为模板扩增获得拼接好的外显子1～4大片段和外显子5～10大片段，最后将这两个大片段混合作为模板扩增得到拼接好的全长cDNA序列．与常规方法相比，该方法既避免了RNA的操作，又不用摸索酶表达的条件，可以和基因组步行技术结合快速获得真菌漆酶基因的cDNA．     

多壁碳纳米管/纳米金/二茂铁纳米复合材料的制备及应用

合成了多壁碳纳米管/纳米金/羧基二茂铁(MWNTs/Au NPs/FMC)纳米复合材料,以壳聚糖(CS)为固定基质,制备了新型葡萄糖生物传感器。采用电化学方法对其性能进行了研究。结果表明,该传感器具有灵敏度高、响应快、性能稳定等特点,对葡萄糖响应的线性范围为0.01~2.5 mmol.L-1,检出限     

单分子层修饰生物芯片基片的电化学研究

构建了一种亲和素单分子层修饰的电化学分析生物芯片基片，并且以二茂铁和亚铁氰化钾为指示剂对该基片的电化学性能进行了研究．循环伏安实验结果表明，单分子层的存在增强了二茂铁在基片上的响应电流，二茂铁可以作为该基片的高效电子媒介体，实验结果具有良好的重现性和一致性，基片产生的背景噪声可以忽略不计．文中对这些结果产生的原因进行了讨论．     

微孔电极支撑的液/液界面上电子转移反应的研究

应用传统的三电极体系在微孔电极尖端支撑的液／液界面上，采用循环伏安法、计时电流法、方波伏安法研究了互不相溶电解质界面(1TIES)上铁氰化钾／亚铁氰化钾(水相)和二茂铁(有机相)的电子转移反应，计算得到反应中二茂铁在有机相中的扩散系数．实验证明该方法操作简便易行，是研究液／液界面上电子转移反应的有效工具．     

广义基本解方法求解一维非齐次热传导方程的反边界值问题

给出一种求解一维非齐次热传导方程反边界值问题的无网格方法,即广义基本解方法．该方法将问题的解分成特解和相应齐次问题的解两个部分：齐次解用基本解方法求解,而特解则是利用相应的特征方程的基本解近似得到．鉴于所考虑问题的不适定性,应用截断奇异值分解和L曲线准则求解离散后得到的高度病态的线性方程组．最后给出数值例子说明该方法的稳定性和有效性,并分析了数值解精度与各参数之间的关系．     

关于特征奇异积分方程的相联方程的一个注记

对特征奇异积分方程的相联方程给出了一个简洁解法,通过引进辅助函数利用多项式分析的理论得到了相联方程有解的充要条件及解的表达式.得到的结果和经典文献是一致的.通过这个方法也得到了特征方程与其相联方程的解的理论的等价性,这一点并没有见诸文献.     

分光光度法测定铬的改进

用过硫酸钾代替高锰酸钾作氧化剂，用于铬的二苯碳酰二肼比色分析法，测定的回收率为94．9％，相对标准偏差为0．65％，具有操作简便，快捷，精密度高，重现性好等特点，对水样进行分析能得到满意的结果。     

基础设施BOT(build-operate-transter)项目特许权期决策的Bargaining博弈模型

特许权期是基础设施BOT项目融资建设中的一个重要决策变量,但目前缺乏计算特许权期的理论方法.SHEN等建立了特许权期的决策模型(BOTCc M),得出了特许权期的可行区间,但BOTCc M模型未能提供在该区间内选择具体的特许权期时间点的方法.这是该模型在应用中的一个重要缺陷,需要进一步改进和完善.应用博弈论原理,建立了特许权期决策的Bargaining博弈模型,克服了BOTCc M模型的缺陷,求出了特许权期决策的具体时间.最后,通过算例演示了特许权期决策的Bargaining博弈模型.研究结果表明,Bargaining博弈模型能为政府和企业进行特许权期决策提供有效的计算方法.     

基于空间离散的最短路径求解法及其局部优化方法

提出了一种基于空间离散的最短路径求解法，该法利用复杂表面的空间离散信息，从已知的两点中估算与其相连的一点的距离，递推式求取一点与其他点之间的最短距离。计算获得了各点与起点和终点的距离后，再把它们相加，依据与起点的距离的大小，顺序把距离和最小的结点连接起来，这样获得了最短路径的邻域路径，然后对最短路径的邻域路径的各点进行迭代式更新，从而获得局部优化，最终获得最短路径。经过对例子的计算及分析，表明该方法普适性强、可靠及有效。     

非线性无网格伽辽金法的实现

提出了应用无网格伽辽金法计算非线性混凝土问题的基本方法.无网格伽辽金法(EFGM)是近些年发展起来的一种数值算法,它采用移动的最小二乘法构造形函数,从能量泛函的弱变分形式中得到控制方程,该法只需节点信息,不需将节点连成单元.在积分网格中,取高斯点的本构关系随应力变化来反映混凝土的非线性性质.文中混凝土的本构模型选用OTTOSEN本构,屈服准则选用修正的莫尔库仑强度准则,通过算例分析,验证了程序的可靠性及应用无网格伽辽金法解决非线性混凝土问题的可行性,表明该方法在混凝土材料领域有着广阔的应用前景.