Ag~+型配位树脂的制备及对FK506分离纯化的研究

将HZM-3大孔树脂磺化,动态法载银依次获得Ag+-1#、Ag+-2#、Ag+-3#、Ag+-4#、Ag+-5#共5种Ag+型配位树脂,通过它们对FK506的静态吸附与解吸实验优选出了Ag+-3#树脂,其吸附率为77%,解吸率为92%;Ag+-3#树脂与FK506形成络合物的稳定性受溶液极性的影响,在室温下的静态吸附曲线表明,其对FK506的配位吸附符合Langmuir单分子层吸附模型;Ag+-3#树脂配位层析分离FK506,当甲醇:乙酸乙酯(V/V)=50:50,上样量为8mg/m L,流速为1BV/h时,可在4.5倍柱体积内完成整个分离过程,合并不含类似物的收集液,浓缩后在HPLC上检测纯度为98.83%,收率为87.35%,无类似物FK520与2H-FK506检出;乙醇结晶最终产品的纯度达到99.6%以上,样品经过ICP-AES检测,在其检测限内未检测出Ag+。     

正交试验法优化制备用于小分子物质分离的聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯-二乙烯基苯)型整体柱

以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,二乙烯基苯(DVB)为交联剂,以环己醇和正十二醇为致孔剂,过氧化苯甲酰(BPO)为引发剂,直接以50 mm×4.6 mm色谱柱为模具,通过原位聚合制备聚(GMA-DVB)型整体柱。以GMA和DVB的体积比、环己醇和十二醇的体积比以及BPO占聚合物的质量分数为三因素,以分离苯和乙苯等小分子物质时的半峰宽分离度(R1/2)为考察指标,进行三因素三水平的正交试验,通过测定整体柱的比表面积、孔径和孔容分布对其进行表征。结果表明,制备整体柱的最优配方为V(GMA): V(DVB): V(环己醇): V(正十二醇)=0.825:0.825:1.32:2.03, BPO的质量分数为0.7%。应用所制备的整体柱分离苯和乙苯等小分子物质,理论塔板数达到37000塔板/m, R1/2值达到7.14,完全达到基线分离,分离时间小于10 min。该方法制备整体柱的重复性好,柱效较高,基本满足商品化要求。     

部分析因设计法优化分散聚合制备单分散种子微球

采用分散聚合法,以正丁醇为分散介质、苯乙烯为单体、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为分散剂、偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,制备单分散聚苯乙烯微球作为色谱填料的种子。实验以微球的平均粒径为主要考察指标,以GSD为次要考察指标,通过部分析因设计,获得了粒径为10μm的单分散(GSD=1.06)微球。     

聚(St-DVB)型整体柱的制备及其对蛋白质的色谱分离性能

苯乙烯(St)为单体,二乙烯基苯(DVB)为交联剂,在致孔剂甲苯和十二醇存在下,直接以Ф4.6×50mm色谱柱管为模具,同时在整个反应过程中通过氩气对反应混合物施加一个恒定的压力,通过原位聚合制备了聚(苯乙烯-二乙烯基苯)(PSD)型整体柱。在聚合过程中对反应混合物施加一定的压力,使制备的整体柱表面光滑无凹痕现象,并且使柱子的两头平整不凹陷,有利于提高柱效。本文对整体柱的孔结构及其对蛋白质的分离性能进行了研究。实验结果表明,整体柱内部含有大量类似渠道的大孔,孔径为2μm~3μm,在流速为5ml/min时,背压为7MPa。而且流速对色谱分离效率的影响小,流速从1ml/min增大到3ml/min时,牛血清白蛋白和溶菌酶这两种蛋白质的总分离效能指标K1的值基本保持不变,保持在3.35左右,说明可以通过提高流速实现蛋白质的快速分离。     

后交联法制备大孔吸附树脂及其对灯盏乙素的分离研究

通过种球溶胀法合成的粒径为15μm,交联度为80%的聚(苯乙烯-二乙烯苯)微球(PS-DVB),以三氯化铁为催化剂,通过悬挂双键后交联反应,制备出具有较高比表面积的大孔吸附树脂色谱填料;利用上述色谱填料装填成规格为4.6mm×250mm的色谱柱,对灯盏乙素进行高效液相色谱分离,以分离度、选择因子、柱效和保留时间为考察指标,研究了流动相比例、流动相流速、柱温和进样浓度等对分离过程的影响。在流动相为乙腈:0.4%冰乙酸(27:73,v:v),流速为1.0mL/min,柱温为30℃,进样浓度为300μg/mL的条件下,灯盏乙素和灯盏甲素的分离度为2.20,两组分可完全分离,保留时间为7.1min,为灯盏乙素的大规模制备提供了可能。     

固定化金属亲和层析分离纯化妥布霉素

通过研究4种不同金属配基的金属螯合亲和层析介质对妥布霉素的吸附和解吸性能,筛选出D401-Cu(Ⅱ)的分离纯化效果最好。通过静态吸附实验确定了最佳pH值为9.8,吸附动力学采用准二级动力学方程拟合较好,吸附等温线符合Langmuir吸附等温方程。通过动态吸附实验,确定最佳吸附条件:D401-Cu(Ⅱ)与D401的最佳配比为1:1,上样浓度为5.76mg/mL,上样流速为4BV/h;最佳洗脱条件为:分别使用浓度为0.3%和0.7%的氨水溶液进行梯度洗脱,洗脱剂用量均为6BV。采用优化后的工艺,妥布霉素纯度从32.85%提高到92.18%,回收率为97.46%,结果表明,D401-Cu(Ⅱ)能够用于妥布霉素的分离纯化。     

吸附树脂分离纯化柚核中的柠檬苦素

比较了大孔吸附树脂AB-8、HZ-816、HZ-818、HZ-803、HZ-806、D101对柠檬苦素的吸附性能,筛选出最佳树脂HZ-816进行柠檬苦素的分离纯化实验。实验表明,HZ-816能有效的吸附和解析柚核中的柠檬苦素,并确定了最佳工艺参数。柠檬苦素样品溶液经HZ-816树脂吸附与脱附后回收率为60%,含量由2.1%提高到47.1%,提高了22倍。     

乳酸链球菌素Z纯化脱色小试工艺研究

Nisin Z的工业生产中利用细胞菌体吸附Nisin Z,离心后的发酵上清液(Nisin Z效价1000IU/m L左右)则通常被当成废液处理。本文建立大孔吸附树脂富集浓缩,丙酮-盐双水相脱色及中压制备型高效液相色谱精制三步法,从低浓度的发酵液上清液中回收较高纯度Nisin Z的方法。经过HZM-3树脂吸附和解吸,乳链菌肽Z的纯度由0.28%提高了95倍至26.65%,双水相脱色后Nisin Z纯度进一步提高至55.43%,经过制备分离后Nisin Z纯度达到94.12%。总回收率为71.39%,脱色率为95.7%。     

析因设计法优化制备聚(DVB)型整体柱及分离小分子物质的应用

以二乙烯基苯(DVB)为单体,十二烷醇和甲苯为制孔剂,在引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)的作用下,直接以φ4.6×50mm色谱柱为模具,通过原位聚合制备了聚(二乙烯基苯)型整体柱.通过析因设计,以十二烷醇占反应混合物体积比,二乙烯基苯占反应混合物体积比,偶氮二异丁腈所占聚合物质量比3因素,以整体柱对小分子的分离度为响应指标进行了3因素2水平全析因实验.结果表明,引发剂的量对分离度的影响最大,其次为十二烷醇占反应混合物体积比与引发剂占聚合物质量比的交互作用和3因素交互作用,而其他效应,如十二烷醇占反应混合物体积比,DVB占反应混合物体积比,十二烷醇与DVB的交互作用,DVB与引发剂的交互作用的影响较小,可以忽略;从而得到了分离小分子物质的最优配方;通过测定整体柱的比表面积,孔径和孔容分布对其进行表征.所制备的整体柱,能够通过高效液相色谱系统对苯,乙苯和萘这3种小分子物质进行分离.分离条件为:100×4.6mm I.D.色谱柱,流动相为乙腈:水=80:20(v/v),流速1mL/min,检测峰值254nm.色谱柱背压5MPa,分离时间10min.