一种新的烟草钙调素结合蛋白的分离鉴定

用^35S标记的钙调素(^35S-CaM)作探针，从烟草cDNA文库中筛选到一个cDNA克隆pTCB40．DNA测序表明，分离的cDNA片段具有的开放阅读框编码233个氨基酸的多肽链．所编码钙调素结合蛋白TCB40(CaM—binding protein，CaMBP)与离子通道蛋白的同源性高达81％．凝胶覆盖实验结果证明其表达的蛋白具有依赖Ca^2 的钙调素结合活性。缺失分析表明钙调素结合位点于其蛋白的C端。Northern blot分析发现，TCB40在烟草茎，叶和花中均表达，但在叶中的表达量明显高于其他器官。     

稀土离子Tb3+与拟南芥钙调素相互作用的荧光光谱及分析应用

钙调素 (CaM)是一种普遍存在的钙受体蛋白 ,它调节了许多细胞生物学功能。钙调素分子有 4个金属结合位点 ,而植物钙调素Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ位点不含酪氨酸残基 ,只有第 4位点含一个酪氨酸残基。与动物体不同的是 ,植物能表达多种功能不同的钙调素亚型。文章利用Tb3 荧光探针 ,采用直接激发 ( 2 2 1nm)或敏化激发 ( 2 80nm)并测量 5 4 5nm处的荧光发射强度 ,研究拟南芥CaM与Tb3 的结合作用及分析应用。直接激发 ( 2 2 1nm)Tb3 CaM络合物时 ,Tb3 的发光显著增强 ,这归因于CaM中配位基取代了Tb3 的配位水分子 ,从而导致荧光速率常数增加。直接激发滴定曲线中 ,当cTb3 /cCaM <4时 ,荧光强度呈不断上升的直线 ,之后出现平台区 ,这与CaM只结合 4个钙离子的结论一致。而间接激发滴定曲线近似为S型 ,且荧光强度较弱 ;其中当cTb3 /cCaM≤ 2时 ,荧光强度增加较弱 ;当 2 钙调素浓度的方法。此方法估测CaM浓度具有灵敏度 ,准确度较高 ,稳定性较好等优点     

钙调素膜在不同pH值溶液中的循环伏安行为

自组装膜;钙调素膜在不同pH值溶液中的循环伏安行为     

重金属离子刺激主动脉平滑肌细胞的增殖

用重金属离子Cd~(2+),Pb~(2+)和Hg~(2+)替代培养液中的Ca~(2+),观察了家兔主动脉平滑肌细胞(ASMC)的增殖与钙调素(CaM)的关系。发现Cd~(2+),Pb~(2+)和Hg~(2+)均不同程度地刺激ASMC的增殖、增加G_1晚期CaM的含量和降低环核苷酸磷酸二酯酶的活性。实验提示重金属毒害可能与动脉粥样硬化和高血压的病因有关。     

光谱法研究钙调素与蜂毒肽片断及其类似物的相互作用

设计合成了蜂毒肽片断及其类似物:Mel15,Mel15(8F)和Mel15(7P),这些多肽与钙调素有很强的结合力,而且链段很短,因此它们可作为钙调素可结合蛋白质的结合部位的模型.本文采用光谱法研究了它们与钙调素的相互作用.荧光发射光谱法结果表明,多肽Mel15在与钙调素相互作用时,肽链中的Trp基团的微环境变得更加疏水,说明Mel15中的Trp残基可能与钙调素的疏水性表面靠近.紫外差谱测试表明,只有当钙调素分子结合2个Ca~(2+)后,才可以与多肽Mel15(8F)结合.圆二色谱法研究表明,多肽与钙调素结合后多肽分子和钙调素分子的α-螺旋结构的含量都被诱导而增加,结合力越大,则越多的残基被诱导形成α-螺旋结构.     

离子选择电极法研究钙调素与重金属铅的结合平衡

用Pb2 选择电极法首次测定了CaM与Pb2 的结合常数,结果说明:Pb2 在CaM中约有10个结合位点,与文献报道的一致。其中包括4个强结合位点,结合常数在107量级,对应于Pb2 在CaM中的4个主结合位点;而其余的位点则结合常数较低,对应于Pb2 在CaM中的约6个辅助结合位点。逐级结合常数分别为:K1=2.62×107,K2=3.75×107,K3=1.03×107,K4=1.85×107,K5=2.53×106,K6=8.07×105,K7=3.36×105,K8=2.76×105,K9=2.22×105,K10=3.96×104。由于Pb2 与CaM的4个主结合位点的稳定常数比相应Ca2 的强几十到几百倍,因此Pb2 对Ca2 与CaM的竞争结合作用能够调节CaM的功能。     

利用铽离子与钙调素的荧光熄灭作用测定精锡矿中铅

铅对铽离子与钙调素 (Ca M)所形成的配合物 (Tb4· Ca M)的荧光具有熄灭作用。在 p H=5 .5的 HAc-Na Ac缓冲溶液中 ,不断通入 N2 防止 O2 干扰 ,建立了测定 Pb2 的新方法。 Pb2 浓度在 0 .0 92 5—16 .5 6 μg/ m L范围内与 ΔIF 具有良好的线性关系 ,检出限为 0 .0 6 3μg/ m L,相对标准偏差为 2 .6 %。实验考察了共存常见离子的干扰。该法用于精锡矿中铅含量的测定 ,平均回收率为 97.2 %。结果满意。     

不同细胞质雄性不育小麦中依赖钙/钙调素 的蛋白激酶的SDS-PAGE电泳图谱分析

以几种新型细胞质雄性不育型小麦为材料,对分蘖期小麦叶片中的依赖钙/钙调素的蛋白激酶(Ca2+/CaM-PK)的SDS-PAGE电泳图谱进行了分析,实验结果表明,不育系与保持系的蛋白激酶酶带之间存在差别,并且不育系之间也有差别,说明不育细胞质对核基因的表达也有影响,这可能与雄性不育有关,而且不育材料中存在潜在优势,可用来选育具有更强优势组合的核质杂种.     

硝酸铈对钙调素及调节蛋白Ca^2＋—ATP酶基因表达的影响

运用逆转录聚合酶链式反应研究了硝酸铈对大白鼠肝脏CaMⅠ,PMCA1b基因表达的影响,腹腔注射高、低浓度硝酸铈均不会引起CaMⅠ,PMCA1b基因表达的变化,提示硝酸铈对钙调素,Ca^2 -ATP酶的影响可能仅处于转录后水平。     

希土离子Eu3+、Tb3+对钙调素二级结构的影响

０引言作为一类非生物必需元素,希土元素对生物体的作用机制及其对人体的长期毒性问题正日益受到人们的关注。为深入探讨这一问题,我们选择钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,简称ＣａＭ）为研究对象。钙调素亦称钙调蛋白,是广泛存在于真核细胞中的重要钙结合蛋白。它不仅...