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1.
W 7-agarose是常用的细胞外CaM功能的拮抗剂,本实验采用荧光光谱法研究了水溶液中钙调素拮抗剂W 7-agarose与植物胞外钙调素的相互结合反应。W 7-agarose是一种将W 7-共价连接到颗粒型agarose(琼脂糖)的粒子。W 7-agarose颗粒较大且容易沉淀,静置5m in后,溶液中的荧光强度完全由游离的CaM产生。在溶液中加入W 7-agarose后,溶液中一部分CaM与其结合后沉降至荧光比色皿底部,导致溶液中CaM的荧光强度下降。由此可以确定溶液中游离CaM的浓度。根据公式lg{[Q]t(F0-F)/F0}=nlg{[Q]tF/F0} lgnK[B]t,从而计算出配位体系的结合常数和配比。研究表明:二者以摩尔比1∶1结合,其平衡常数为4.9×105。由此进一步计算了W 7-agarose对胞外钙调素的拮抗率,在拮抗剂W 7-agarose浓度达到15~20μmol/L时,拮抗率可达到90%以上,与文献报道的生物学体内实验结果一致,从分子水平上解释了W 7-agarose与CaM的结合作用。  相似文献   
2.
探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率.首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白.进一步以Ni-NTA-agarose为FRET模型,在Confocal上对MiCy进行光漂白时间常数的测量,并计算了FRET效率.结果表明MiCy-mKo传能对适合用供体光漂白法测量FRET效率,此传能对将在蛋白质相互作用研究中有广泛应用.  相似文献   
3.
利用Tb3 离子的发光, 研究了Tb3 与拟南芥钙调素 (CaM)结合的荧光光谱及荧光滴定曲线特点, 然后利用Tb3 4*CaM系统在221 nm直接激发和280 nm敏化激发的光谱变化研究了Ca2 , La3 和Al3 与拟南芥钙调素 (CaM) 的竞争结合作用. 结果表明: Tb3 , La3 与钙调素的竞争结合能力强于Ca2 , 而Tb3 的竞争结合力又大于La3 , Ca2 与钙调素的结合力远大于Al3 . 竞争实验的结果从分子水平上揭示了Tb3 , La3 和Al3 等金属离子生物效应可能的分子机制.  相似文献   
4.
植物细胞外钙调素的稀土发光探针研究   总被引:10,自引:1,他引:9  
从植物中提纯了细胞外钙调素(CaM),并利用NAD激酶激活作用及拮抗剂的抑制作用进行了CaM特性试验。利用稀土(Tb^3+)发光探针测得胞外CaM具有4个金属离子结合位点。敏化Tb^3+激发光谱结果证明其含有1个Tyr残基。胞外CaM(Yyr?能够向Tb3+传能并使Tb3+特征发光增强。根据Forster能量传递理论测得胞外CaM中Tyr→Ⅲ,Ⅳ位之间距离分别为1.104和1.056nm,它们均小  相似文献   
5.
探索了2种新型荧光蛋白MiCy、Citrine作为荧光共振能量转移技术(FRET)传能对的可能性.首先通过基因工程方法表达纯化了这2种蛋白,并对其进行了光谱学研究,由于MiCy具有高的量子产率,且MiCy与Citrine的光谱重叠积分J较大,计算表明MiCy与Citrine的Forster距离为R0=5.81 nm,比CFP-YFP的大(R0=5 nm).进一步以Ni2+-NTA-agarose为FRET模型,结果表明:无论在荧光分光光度计还是在激光共聚焦显微镜上,都可以明显地检测到MiCy与Citrine的能量转移.由于二者较文献报道的其它FRET对具有更大的Forster距离,而且更适合以激光作为激发光进行测量,因此该FRET对应有更加广泛的应用前景.  相似文献   
6.
采用方波极谱法研究了重金属Pb2+与钙调素(CaM)的结合反应, 直接检测到Pb2+-CaM配合物的存在, 并进一步利用循环伏安法研究了Pb2+-CaM的电极反应. 在pH=6.5时, 用方波极谱法在Pb2+-CaM体系中检测出2个还原峰, 峰电位分别为-0.44~-0.47 V和-0.73~-0.77 V, 说明在Pb2+-CaM体系中铅有2种存在形式, -0.44~-0.47 V的还原峰对应于游离态Pb2+, 电位更负的还原峰对应于配合物[Pb2+-CaM]. 2个还原峰的峰电流均随着cPb2+/cCaM比值增大而增大; 至cPb2+/cCaM≥10后, 配合物[Pb2+-CaM]的峰电流基本不再变化, 而游离态Pb2+的峰电流则继续增大. 利用极谱滴定曲线的拐点可判断出Pb2+在CaM中有10个结合位点. 进一步的测量结果表明, 循环伏安曲线出现游离态Pb2+的氧化峰和还原峰, 而络合态的[Pb2+-CaM]只有其还原峰, 反向电压扫描时不出现阳极波, 即没有相对应的氧化峰出现.  相似文献   
7.
水合Ce^3+离子发射强荧光,而用Ce^3+滴定植物钙调素(CaM)时,Ce^3+离子荧光被完全淬灭,据此建立了测定Ce^3+离子与植物钙调素结合位点数及逐级结合常数的方法。实验表明,Ce^3+离子与植物钙调素的荧光激发光谱及发射光谱形状与光谱强度都有显著差别,前者的荧光强度远大于后者,故CaM存在时可以测定游离Ce^3+的浓度。Ce^3+离子荧光淬灭法测定结果说明,在0.5 mol·L^-1KCl溶液中,CaM有4个Ce^3+离子结合位点。进一步通过Ce^3+滴定植物钙调素的实验,并结合Excel规划求解法,计算出Ce^3+与CaM的结合常数,K1=4.17×10^7,K2=1.26×10^7,K3=1.89×10^6,K4=2.04×10^6。  相似文献   
8.
钙调素 (CaM)是一种普遍存在的钙受体蛋白 ,它调节了许多细胞生物学功能。钙调素分子有 4个金属结合位点 ,而植物钙调素Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ位点不含酪氨酸残基 ,只有第 4位点含一个酪氨酸残基。与动物体不同的是 ,植物能表达多种功能不同的钙调素亚型。文章利用Tb3 荧光探针 ,采用直接激发 ( 2 2 1nm)或敏化激发 ( 2 80nm)并测量 5 4 5nm处的荧光发射强度 ,研究拟南芥CaM与Tb3 的结合作用及分析应用。直接激发 ( 2 2 1nm)Tb3 CaM络合物时 ,Tb3 的发光显著增强 ,这归因于CaM中配位基取代了Tb3 的配位水分子 ,从而导致荧光速率常数增加。直接激发滴定曲线中 ,当cTb3 /cCaM <4时 ,荧光强度呈不断上升的直线 ,之后出现平台区 ,这与CaM只结合 4个钙离子的结论一致。而间接激发滴定曲线近似为S型 ,且荧光强度较弱 ;其中当cTb3 /cCaM≤ 2时 ,荧光强度增加较弱 ;当 2 相似文献   
9.
以植物花粉细胞为试验体系 ,研究La3 及其配合物对花粉质膜透性及花粉萌发的影响。La3 浓度为 1× 10 - 7~ 1× 10 - 4 mol·L- 1 ,可显著减小细胞的质膜透性 ;稀土稳定配合物La3 EDTA对细胞质膜透性基本无影响 ,而La3 柠檬酸、La3 酒石酸的配合物对质膜透性的影响与其配比有关 ,当配比不大于 1∶3时 ,明显降低质膜透性 ,达到 1∶10时 ,无任何作用。La3 浓度在合适的范围内 ( 2 5~ 2 0 μmol·L- 1 )对花粉萌发有明显的促进作用。因此 ,La3 及其某些配合物浓度在 1× 10 - 6 ~ 1× 10 - 5 mol·L- 1 范围内不仅可以减小花粉细胞的质膜透性 ,而且还能促进花粉萌发。  相似文献   
10.
用Pb2 选择电极法首次测定了CaM与Pb2 的结合常数,结果说明:Pb2 在CaM中约有10个结合位点,与文献报道的一致。其中包括4个强结合位点,结合常数在107量级,对应于Pb2 在CaM中的4个主结合位点;而其余的位点则结合常数较低,对应于Pb2 在CaM中的约6个辅助结合位点。逐级结合常数分别为:K1=2.62×107,K2=3.75×107,K3=1.03×107,K4=1.85×107,K5=2.53×106,K6=8.07×105,K7=3.36×105,K8=2.76×105,K9=2.22×105,K10=3.96×104。由于Pb2 与CaM的4个主结合位点的稳定常数比相应Ca2 的强几十到几百倍,因此Pb2 对Ca2 与CaM的竞争结合作用能够调节CaM的功能。  相似文献   
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