人工选育F5代萍乡肉红鲫RAPD遗传分析

萍乡肉红鲫是分布于江西萍乡的具有地方特色的品种,经过人工选育获得了较为稳定的遗传特征。用经过筛选的23个随机引物对25个人工选育F5代萍乡肉红鲫基因组DNA进行RAPD分子标记。结果显示扩增片段大小在250 bp至2 100 bp,共扩增的条带数为229,差异标记条带大多数为弱带,多态位     

利用SRAP和ISSR标记分析五节芒(Miscanthus floridulus)的遗传多样性

对41个来自于梁子岛上4个居群的五节芒(Miscanthus floridulus)进行相关序列扩增多态性(se-quence-related amplified polymorphism,SRAP)和简单重复序列区间标记(inter simple sequence repeat,ISSR)分析.利用POPGENE32version1.32软件计算多样性指数,采用NTSYS.2.10e计算软件,得到相似性系数,并用UPG-MA法进行聚类分析.结果显示6条ISSR多态性引物,共扩增出103条DNA条带,其中98条为多态性条带,占95.15%,样品之间的相似系数为0.67～0.95.6对SRAP引物,共扩增出173条DNA条带,其中147条为多态性条带,占84.97%,样品之间的相似系数为0.75～1.00.两种标记均表明五节芒具有较高的遗传多样性.分别以个体为单位及以群体为单位进行聚类分析,2种标记分别得到了相似但并不完全相同的个体聚类图及群体聚类图.研究结果表明五节芒的遗传多样性水平较高.SRAP与ISSR标记均适用于五节芒的遗传多样性分析.     

西藏近缘野生大麦RAPD和ISSR分子标记的遗传多样性

采用随机扩增多态性分析（RAPD）和简单序列重复区间分析（ISSR）分子标记对110份青藏高原近缘野生大麦材料进行了遗传多样性分析．分别选取30条RAPD引物和10条ISSR引物进行PCR分析．结果表明30条RAPD引物共扩增出195条带，其中多态性位点比率为93．33％；10条ISSR引物共扩增出93条带，其中多态性位点比率为98．92％；研究证明ISSR标记能检测出比RAPD标记更多的遗传多态性．利用POPGNEN32软件对RAPD和ISSR结果进行遗传一致性系数分析，表明各居群的遗传相似性较高．利用算术平均的非加权成对分组法（UPGMA法）对RAPD标记和ISSR标记结果构建西藏近缘野生大麦聚类树状图，可将7个供试大麦居群聚为2组：一组包含所有来自西藏的居群，在ISSR树状图中阿里地区除外；而青海地区的聚为另外一组．结果表明，西藏地区近缘野生大麦具有较高的遗传多样性，为进一步证明西藏是大麦的起源中心之一的理论积累了有益的资料．     

湖北大麦品种资源的RAPD分析

在对105份湖北栽培大麦酯酶同工酶研究的基础上,采用RAPD技术对分属于8种酶谱类型的10份湖北栽培大麦品种进行了研究.63个随机引物中有12个引物产生稳定多态性的带,共扩增出73条带,其中46条表现出多态性.将每一条带视为一个独立的性状,按其有无列出二元数据矩阵,计算Nei氏相似性系数(S)和遗传距离(D),列出遗传距离矩阵,采用PHYLIP3.5c软件包进行聚类.讨论了RAPD的稳定性以及RAPD标记与同工酶标记的异同.     

三种倒刺鲃的RAPD种质鉴定

利用33个随机引物研究了光倒刺鲃（Spinibarbus hollandi Oshima）、中华倒刺鲃（S．sinensis Bleeker）和倒刺鲃（S．denticulatus donticulatus Oshima）基因组DNA（RAPD）多态性和种质分子标记。33个随机引物总共扩增得到473条带，多态性片段为365条，占总带的77．2％。其中16个引物共扩增出95个特异性片段，长度主要在200-1500bp，光倒刺鲃特有的为23个、中华倒刺鲃特有的为20个、倒刺鲃特有的为28个，这些特异性片段可作为三种倒刺鲃的分子遗传标记。多态性研究表明，种内相似系数分别为：光倒刺鲃0．6507，倒刺鲃0．6975，中华倒刺鲃0．8180。种间遗传距离分别为，中华倒刺鲃和倒刺鲃0．4915：中华倒刺鲃与光倒刺鲃0．6217；倒刺鲃与光倒刺鲃0．6455。     

构象差异凝胶电泳检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因A1298C多态性

建立构象差异凝胶电泳(conformation difference gel electrophoresis,CDGE)检测亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因A1298C多态性的方法。分别用PCR-CDGE和PCR-RFLP对10例样本的MTHFR基因A1298C多态性进行分型。CDGE结果显示有8例样本表现为迁移率慢的1条带,1例样本表现为迁移率快的1条带,1例样本表现为2条带。酶切结果显示AA基因型有8例,AC基因型和CC基因型各1例。CDGE和酶切结果的对比显示二者的结果是一致的。CDGE是一种可以对MTHFR基因A1298C多态性分型的方法。     

基于ISSR-PCR技术的菘蓝种质资源遗传多样性

菘蓝的干燥根板蓝根是重要的中药资源。本研究首次从板蓝根干样中成功提取到DNA,利用正交试验建立并优化了ISSR-PCR体系,对其遗传多样性进行分析。从16条引物中筛选出6条多态性丰富、谱带清晰且重复性好的引物进行ISSR-PCR扩增。6条引物共扩增获得71条带,其中多态性谱带68条,多态位点百分率为95.77%,遗传相似系数变化范围为0.861～1.000。实验结果表明我国菘蓝资源丰富,这为其遗传育种、种质资源评估及品种鉴定提供理论基础。     

RAPD分析江西贡江水系鲤鱼种群遗传多样性

用RAPD技术分析了江西贡江水系(瑞金,兴国,赣县,于都,会昌5个县域水域)鲤鱼遗传多样性.在25个随机引物中,筛选了11个多态引物,PCR扩增共得到条带177 2条,其中特异性条带占总条带数百分比达到85.04%.结果表明贡江水系的鲤鱼有较强的遗传多样性.其中,瑞金鲤鱼的遗传多样性最高,Nei's基因多样性指数(He)达到0.291 9.会昌鲤鱼的遗传多样性最低,Nei's基因多样性指数(He)只有0.236 1.5个县域水域的遗传多样性指数(He)排序依次为瑞金(0.291 9),兴国(0.267 6),赣县(0.280 7),于都(0.278 1),会昌(0.236 1).     

黄颡鱼属SSR分子鉴定及其遗传多样性

利用13对SSR引物对黄颡鱼属进行遗传多样性和分类研究。结果显示,13对SSR引物中有10对为有效引物,获得93条多态性条带,每对引物扩增条带的数目范围为8~11,扩增片段大小在90~400bp之间,SSR获得的多态性条带所构成各物种的特异性谱系能够用于黄颡鱼属的区分。聚类结果显示,5种黄颡鱼之间的遗传相似系数范围为0.670~1.000,瓦氏黄颡鱼、长须黄颡鱼和中间黄颡鱼亲缘关系较近,之后与光泽黄颡鱼聚为一支,普通黄颡鱼与其它物种差异最大。黄颡鱼属遗传多样性分析结果显示5种黄颡鱼遗传多样性处于水平较高,这将有助于后续深入对黄颡鱼属各物种亲缘关系和系统演化进行分析和理论研究。     

江西3种红鲤血清转铁蛋白遗传多态性

采用不连续聚丙烯酰胺垂直电泳(PAGE)和不连续十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺垂直电泳(SDS-PAGE)对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤的血清转铁蛋白(Tf)进行研究。PAGE电泳结果表明3种红鲤的Tf图谱具有3条带,荷包红鲤与玻璃红鲤Tf表型由Tfb、Tfc组成,兴国红鲤Tf表型由Tfa、Tfb、Tfc组     

菊花EST-SSR标记的开发与应用

从NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库下载7 259条菊花相关表达序列标签(EST)序列,经去除冗余序列拼接后得到3 784条Uni-ESTs,总长度为2 088.6kb.用MISA软件查找其简单重复序列(SSR)位点,共获得407个SSR位点,分布于355条EST上,出现的频率为10.76%.在搜索到的EST-SSR中,三核苷酸重复类型占主导地位,所占比例为47.42%.共观察到76种重复基元,出现最多的重复基元是A/T和ACC/GGT,其次为ATC/ATG,AAC/GTT,AC/GT,AAT/ATT.根据搜索结果随机设计了24对菊花EST-SSR引物,对14个菊花品种进行PCR扩增,发现有12对引物有较清晰且稳定的扩增产物(其中10对引物的产物存在多态性),共检出37个位点(其中多态性位点32个),平均每对引物可扩增出3.2条多态性片段.遗传相似性分析显示,14个品种的遗传相似系数在0.61～0.84之间,平均相似系数为0.67.     

红条毛肤石鳖生殖周期的研究

研究了红条毛肤石鳖（Acantlwchiton rubrolineat）的雌雄生殖细胞的发生和性腺的发育周期．红条毛肤石鳖的雌性生殖细胞的发生分为卵原细胞期、无卵黄期、卵黄形成前期、卵黄形成后期和成熟期．雄性生殖细胞的发生分为精原细胞期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精细胞期和精子期．根据性腺的解剖和组织切片观察以及各期生殖细胞在滤泡所占的比例，红条毛肤石鳖的生殖周期分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期五个阶段．红条毛肤石鳖的性腺发育在浙江台州每一年为一个生殖周期．     

寒兰转录组SSR信息分析及其分子标记开发

寒兰(Cymbidium kanran)是中国传统名花,其观赏与经济价值极高。简单重复序列(simple sequence repeats,SSR),又名微卫星标记,有多态性高,非共显性等优势。基于转录组数据对SSR标记的开发具有经济效能高等优点,通过高通量测序平台对寒兰EST-SSR标记进行开发,了解其在转录组序列中的分布类型及特性,为寒兰的SSR多样性的分析及遗传图谱构建奠定基础。通过MISA程序筛选寒兰转录组测序得到的68699条unigene(序列总长60.06 Mb),并分析了其SSR位点分布情况,获得了9837个SSR位点,在总unigene的比例为14.32%,平均每6.25kb出现1个SSR。SSR位点中二核苷酸重复频率达到最高,占55.22%,其中AG/CT高达38.83%;接下来为三、单核苷酸重复,频率依次为25.37%和14.49%。利用Primer3共设计出6017对SSR引物。随机选取141对引物进行PCR扩增,有79对引物扩增得到的条带清晰可重复,15对在15个不同地区寒兰中表现出多态性。结果表明,本研究中设计的SSR引物在寒兰遗传多样性分析中具有较高的适用性,可用于寒兰的遗传研究。     

翘嘴红鲌群体遗传多样性分析

基于RAPD方法对江西(鄱阳湖)、湖北(梁子湖)和江苏(太湖)3个群体的翘嘴红鲌遗传多样性进行分析,以评价它们的群体遗传结构和良种选育的可行性。结果显示从30个随机引物中筛选出了20个多态性较高的引物,既可扩增出3个群体共同的DNA条带,也可扩增出单个群体特有的特征条带。从3个群体实验鱼中共检测到119个扩增片段,长度在0.2~1.7kb之间。鄱阳湖群体多态位点数61个,多态位点比为51.26%,梁子湖群体多态位点数50个,多态位点比为42.02%,太湖群体多态位点数67个,多态位点比为56.30%。3个群体的Shannon多样性指数分别为0.429 2,0.382 8和0.443 1。群体间遗传相似系数依次为:最高是鄱阳湖与梁子湖,为0.8055,其次是鄱阳湖与太湖,为0.801 6,最低是梁子湖与太湖,为0.785 2。结果提示,鄱阳湖与梁子湖亲源关系较近,与太湖稍远;所筛选出的引物应用RAPD技术可以方便地分析不同群体翘嘴红鲌的遗传多样性,并可为良种选育的亲本选择提供依据。     

泽苔草居群内遗传多样性

采用RAPD分子标记对泽片学湖甲膈群10个家系共60个子代样品进行了家系间及家系内的遗传多样性分析，12个有效引物共广：生91条带，其中83条带表现出多态性，占91．21％．各个家系的基因多样性在0.1l～0.23之间（家系水平为0．27），Shannon指数在0．17～0.34之间（家系水半为0．41）．分子变异分析（AMOVA）结果显示家系间的基因分化系数（Gst）为0．277，说明家系问的遗传变异占27．7％，家系内的遗传变异占72．31％，家系间和家系内的变异均极显著（P〈0.001）．基于家系间的遗传分化系数（Gst）估测家系间的基因流（Nm）为0.65．采用UPGMA法埘所有子代聚类结果表明：同一家系的子代个体并不能完全聚在一起．     

麦醇溶蛋白A-PAGE方法的优化和改进

以大麦、小麦品种等为材料,在ISTA的标准电泳程序基础上分别进行浓度为10％,12％,14％,16％,18％和20％的酸性聚丙烯酰胺(A．PAGE)均一胶电泳来分离种子的麦醇溶蛋白,并与10％～20％的线性梯度A．PAGE分离效果进行比较．经优化和改进,结果表明：18％的A-PAGE方法效果最佳,既具有ISTA推荐的A．PAGE方法制胶简便、电泳快速、重复性好的优点,又具有线性梯度A-PAGE方法分辨率高的特点,尤其是在小分子量的快带区,电泳成带明显,达到梯度胶的分离效果．在供试的大麦、小麦品种中,电泳图谱总条带数比ISTA推荐的10％均一胶所得电泳图谱条带数分别增加1～8条和2～7条．该方法既适用于大麦、也适用于小麦醇溶蛋白的分离．并对18％的A-PAGE方法的适用范围等进行了讨论．     

RAPD标记在唇(鱼骨)与花(鱼骨)种质鉴定中的应用

利用RAPD分子标记技术对浙江瓯江溪水性鱼类唇[鱼骨]和花[鱼骨]进行了种质鉴定和遗传分析,从40个10碱基随机引物中筛选出14个多态性高的引物,分别扩增出130条和127条DNA带,多态位点比率达84．62％和66．93％,平均每个引物扩增多态性带9．3条和9．1条．Shannon多样性指数为0．4515和0．3548,Nei＇S指数为0．3037和0．2392．唇[鱼骨]和花蜡群体间的平均遗传距离为0．2880和0．2096．引物S383、S399、S463和S471扩增的6个特异性标记,可用来区分唇[鱼骨]和花[鱼骨]．最后应用UPMGA法对它们进行了聚类分析．结果表明唇[鱼骨]和花[鱼骨]的群体遗传多样性较高,存在较大的遗传变异．RAPD分子标记技术可以方便地应用于[鱼骨]属鱼类的种质鉴定．     

水藓科植物遗传多样性研究

利用ISSR分子标记方法对不同地区的13份水藓科植物进行遗传多样性分析,结果表明,稳定且重复性高的7条引物共扩增出526条清晰的条带,其中518条具有多态性,平均多态性位点比率为98.47%.运用PopGen-32软件分析发现,等位基因数Na=1.736 3,有效等位基因数Ne=1.306 2,Nei基因的多样性与Shannon信息的指数分别为0.201 5和0.321 1,说明水藓科植物的遗传多样性比较丰富.13份水藓科植物的遗传分化系数Gst、遗传距离D与遗传一致度I分别为0.025 3、0.007 1和0.054 7,对其进行计算得知,不同属种间存有基因交流,但与种间变异相比,种群内部的遗传变异较大.通过NTSYS2.1软件对13份样本的亲缘关系进行聚类,可将其分为3类,且样本的遗传距离与地理位置有一定的相关性.     

云南南部5种魔芋属植物居群遗传结构的ISSR分析

采用9个ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记对云南南部魔芋属植物5个物种(花魔芋,疣柄魔芋,攸乐魔芋,勐海魔芋和屏边魔芋)105份材料进行了居群遗传多样性分析.通过PCR扩增,9个ISSR引物从5个物种105份样品中共获得95条条带,其中多态性条带占条带总数的100%.每个位点平均等位基因数2.00,有效等位基因数1.40,平均Nei’s基因多样性指数0.255 2,Shannon’s信息多样性指数为0.401 2.在这5个魔芋属植物物种中,花魔芋居群内遗传多样性水平相对较低.居群水平上的UPGMA聚类表明这5个物种可被分为明显的两大组,花魔芋为一组,其余4种构成一组,其中屏边魔芋与疣柄魔芋遗传距离最近.个体水平上的聚类则显示,花魔芋和疣柄魔芋的个体各自聚在一起,其余3种的个体较为分散.本研究结果还认为人工栽培利用的方式对魔芋属植物遗传多样性可能存在一定影响.     

浙贝母4品种及5种贝母遗传多样性的RAPD分析

通过RAPD技术对浙贝母的多子、宽叶、狭叶（浙贝1号）和岭下4个品种和贝母属的浙贝母、川贝母、皖贝母、东贝母、伊贝母5个种的遗传多样性进行了分析,并对预筛选得到的9种多态性丰富的引物进行了RAPD扩增,得到了57条清晰可辨的扩增片段,其中48条多态性谱带,占总谱带数的84．21％．研究结果表明：4个品种之间,多子贝母与其他3个品种间遗传分化较大;5个贝母种之间的相似性系数为0．2105～0．8492,其中东贝母与浙贝母亲缘关系最近,伊贝母与其他贝母亲缘关系最远;筛选到的分子标记对于浙贝母不同品种和贝母不同种的鉴别具有重要的意义．