板式磁颗粒化学发光免疫分析测定人血清中糖类抗原125

在传统的板式化学发光免疫分析法和管式磁颗粒化学发光免疫分析法基础上,建立了人血清中糖类抗原125(CA125)的板式磁颗粒化学发光免疫分析方法.该方法以磁性微粒子作为分离固相,96孔板为反应容器,辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2-luminol化学发光体系作为检测体系.本法测定CA125的检测灵敏度可达2.0U/mL,线性范围为0～400U/mL.与常用的包被板化学发光免疫分析方法对比,该方法检测范围宽.与管式磁颗粒化化学发光法比较,其分析灵敏度与精密度高、线性范围、分析通量以及分析成本方面均显示了很好的优越性.采用该方法对人血清中CA125进行测定并与罗氏全自动电化学发光系统的测值结果进行了比对,两者显示了良好的相关性.     

管式磁微粒化学发光免疫分析法测定玉米样品中的黄曲霉毒素B1

开发了一种管式磁微粒化学发光免疫分析法测定玉米样品中黄曲霉毒素B1的方法,该方法使待测玉米样品中的黄曲霉毒素B1、辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体在均相体系中发生竞争性免疫反应,再加入用抗FITC抗体包被的磁微粒作分离剂,抗原抗体复合物结合在磁微粒上,在磁场中经分离、洗涤后加发光底物,检测发光强度,测定玉米样品中黄曲霉毒素B1的含量.此方法标准曲线线性范围为0.05～5ng/mL,检测限为0.02ng/mL,批内相对标准偏差小于9%,批间相对标准偏差小于15%,具有良好的稳定性和重现性.     

单颗粒计数策略定量检测癌胚抗原

该文提出了一种基于单颗粒电感耦合等离子体质谱(spICP-MS)的计数策略,用于癌胚抗原(CEA)的灵敏检测.该策略采用50 nm的金纳米颗粒(AuNPs)作为免疫识别和单颗粒计数的探针,以磁性纳米颗粒(MBs)作为免疫识别的捕获中心,基于夹心免疫反应,应用抗体标记的MBs捕获CEA和AuNPs探针.通过磁铁分离后,捕...     

基于胶体金标记的阳极溶出伏安免疫分析用于免疫球蛋白G的测定

提出了一种基于胶体金标记的阳极溶出伏安免疫分析方法。免疫反应在聚苯乙烯微孔板中以夹心分析模式进行,通过物理吸附将兔抗人免疫球蛋白G(IgG)抗体固定于微孔板上,与相应抗原IgG发生免疫反应后,再通过夹心模式捕获相应的纳米金标记的羊抗人IgG抗体,然后再与金标羊抗人IgG抗体和金标兔抗羊二抗形成的免疫复合物反应,在微孔板上进一步引入大量的纳米金,将金溶解后,在碳糊电极上用阳极溶出伏安法(ASV)对金离子进行检测,溶出峰电流的大小间接与待分析物IgG的浓度成正比。对免疫分析的一些实验条件进行了优化。阳极溶出峰电流与IgG的对数浓度在1.1~1 143 ng/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为1 ng/mL。将该方法应用于人血清中IgG浓度的测定,取得了满意结果。     

癌胚抗原快速无分离电化学免疫检测

通过同时固定硫堇和HRP标记癌胚抗原(CEA)抗体于电化学预处理的玻碳电极表面,制备了新型无需分离的CEA快速电化学检测免疫传感器.CEA测定的两段线性范围为0.5～3.0和3.0～167 ng/mL,检测下限为0.1 ng/mL.该传感器具有良好的准确性、精密度、制备重复性和稳定性.该方法缩短了分析时间,降低了测定成本,适用于临床CEA的快速测定.     

基于免疫磁分离和酶催化放大的化学发光免疫传感器测定人血清中癌胚抗原的含量北大核心CSCD

基于免疫磁分离和酶催化放大策略,构建了一种用于测定人血清中癌胚肮原(CEA)含量的化学发光免疫传感器。利用抗原-抗体的特异性结合,将磁球作为免疫反应的固相载体去捕获癌胚抗原(CEA),并通过在免疫磁球表面负载辣根过氧化酶(HRP)作为检测标记物,形成磁性免疫夹心复合物。通过HRP对过氧化氢的催化作用,氧化鲁米诺产生较强的化学发光信号,根据化学发光强度来定量CEA。结果显示:CEA的质量浓度在0.05~80.00μg·L^(-1)内与其对应的化学发光强度呈线性关系,检出限为4.5 ng·L^(-1);对样品进行回收试验,回收率为97.0%~100%。与其他固相载体和化学发光免疫传感器相比,该方法检测CEA的化学发光强度更强,并且具有更宽的线性范围和更低的检出限。     

基于铜增强纳米金标记物结合磁分离的溶出伏安免疫分析法用于蛋白质的高灵敏测定

应用铜原位化学放大纳米金颗粒的信号增强特性, 并结合磁分离技术, 提出了一种高灵敏的溶出伏安免疫分析方法. 实验中以人IgG为模式蛋白质, 将抗体修饰的SiO₂@Fe₃O₄核壳型磁性纳米颗粒和纳米金标抗体悬浊液混合, 用以均相免疫识别人IgG, 借助外加磁场分离纯化, 在免疫复合物悬浊液中加入铜增强试剂进行沉积放大反应, 再将铜用稀硝酸溶解并进行溶出伏安分析检测. 结果表明, 与基于固相反应的金属免疫分析法相比, 所提出的基于均相反应和磁分离原理的方法具有操作简单、分析时间短等优点. 该方法显示出明显增强的人IgG检测性能, 其线性检测范围为01~1000 ng/mL, 检出限为73 pg/mL. 此外, 将其用于实际样品的回收率测定, 结果令人满意.     

微孔板蛋白芯片可视化检测方法的研究

将微孔板生物芯片制备技术与银增强显色方法相结合,建立了一种高通量蛋白免疫分析新方法。研究采用夹心法反应原理,将人IgG捕获抗体以微阵列形式点样于96孔板底部制备成蛋白微阵列,并依次与人IgG、生物素标记二抗及链亲和素胶体金反应,最后用银增强法显色。采用平板式扫描仪对微孔板显色结果进行快速扫描成像,图像采用luxscan 3.0软件处理。结果表明:微孔板蛋白芯片的最低检测量可达0.6 ng/mL,线性范围10 ng/mL~100μg/mL,相关系数为0.98,重复性较好(CV10%)。     

管式磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中的雌三醇

待测尿液中的雌三醇、辣根过氧化物酶标记的雌三醇与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗雌三醇抗体在均相体系中发生竞争性免疫反应,再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒,反应生成物结合在磁微粒上,在磁场中经分离、洗涤后加发光底物,检测发光强度(RLU),测定尿液中雌三醇的含量。通过对检测条件的优化,建立了磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中雌三醇的方法,并对正常男性、女性和孕妇的尿液中雌三醇含量进行了测定。结果表明,本方法的线性范围为1～100μg/L,检出限为0.25μg/L,具有很高的灵敏度;批内相对标准偏差<14%;批间相对标准偏差<7%,具有良好的稳定性和重现性。     

磁性纳米金共价固定癌胚抗原单克隆抗体的电流型免疫传感器

合成了Fe3O4/Au磁性复合纳米粒子, 在粒子表面通过自组装硫脲分子使表面氨基化, 再用戊二醛共价交联固定癌胚抗原抗体(anti-CEA). 在外加磁场的作用下, 将anti-CEA复合磁性粒子吸附在固体石蜡碳糊电极表面, 制成了新型电流型免疫传感器. 免疫电极在含有癌胚抗原CEA和辣根过氧化物酶标记的癌胚抗原(HRP-CEA)的混合溶液中温育, CEA和HRP-CEA与固定在电极表面的anti-CEA发生竞争反应, 导致HRP对H2O2的催化降解作用的改变, 从而可间接测定CEA. 由于标记的HRP可催化降解H2O2, 导致媒介体间苯二酚浓度改变, 使测定的灵敏度大大提高. 响应电流与CEA质量浓度的对数在2~160 ng/mL的范围内呈线性关系, 检出限为0.57 ng/mL(3σ法). 该免疫传感器具有制作简单、价廉及表面易于更新等特点.     

亚微米级免疫磁球及其在细菌分离中的应用

以亚微米级的单分散磁性微球为基础,制备出了表面包被有沙门氏菌抗体的免疫磁球. 利用表面电位、荧光和ELISA等方法研究了抗体在磁性微球表面的吸附行为. 在沙门氏菌磁分离实验中,通过调节投料抗体的浓度,研究了免疫磁球表面抗体浓度和磁分离效率的相关性,与微米级商品化免疫磁球的对比中,亚微米级的免疫磁球表现出了更高的磁分离效率.     

喷射式流动注射电化学发光免疫检测禽流感H9亚型

利用磁分离和生物素亲和素技术,形成亲和素化磁微球-生物素化抗体-抗原-钌标抗体的免疫夹心复合物,初步建立了体外免疫诊断试剂的制备方法,并利用喷射式流动注射电化学发光体系对制备出的禽流感病毒H9免疫复合物进行检测。实验选择最适的包被抗体,检测抗体和封闭剂,优化Ru标抗体的最佳稀释度。在生物素化的兔抗H9多抗作为亲和素化的磁微球的结合抗体,鼠抗H9单抗作为Ru(bpy)32+标记抗体,2%BSA作为封闭剂,1:50倍稀释的Ru-鼠抗H9单抗条件下,非特异性吸附最低。测定不同浓度的H9抗原,发现抗原浓度在3.125～100μg/mL范围内与电化学发光强度呈较好的线性关系。实验还测定了不同亚型的禽流感病毒、不同来源的毒株和鸡的棉拭子样品。     

心衰标志物可视化联合检测方法研究

基于夹心免疫原理和表面免疫吸附模型,采用Image Pro Plus软件对硅片表面磁颗粒分布图像进行定量化处理,建立了硅片表面心衰标志物可视化联合检测方法。研究表明,该方法从抗体包被到获得检测结果不超过1 ｈ,操作简单,在单张硅片上可实现心衰标志物NT-proBNP和cTnI的联合检测。NT-proBNP和cTnI的最低检出限分别为21.8 pg/mL和0.034 ng/mL,检测范围分别为21.8~40000 pg/mL和0.034~50 ng/mL。83例不同程度心血管疾病患者的血清样本的检测结果与商品化免疫分析仪检测结果一致,相关系数r>0.98。因此,该快速免疫检测方法可以满足临床检测心衰标志物的需要。     

基于磁性共轭微孔聚合物的超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬中7种有机磷杀虫剂

建立了基于磁性共轭微孔聚合物的磁固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定果蔬中7种有机磷杀虫剂的方法。将亚苯基亚乙炔基修饰的Fe₃O₄与1,3,5-三溴苯、1,3,5-三乙炔苯反应,制备磁性共轭微孔聚合物,材料能有效吸附共轭结构的有机磷杀虫剂,并在外磁场中实现便捷磁分离。方法的检出限（LOD）为0.12~5.0 ng/kg,加标回收率为80.8%~125%,相对标准偏差（RSD）小于6%（n=5）。方法应用于分析市场上果蔬样品中7种有机磷杀虫剂,检出含量为1.1~500.0 ng/kg。该方法灵敏度高,准确可靠,对果蔬中有机磷杀虫剂的检测具有良好的应用潜力。     

一种基于纳米金介导生物沉积铂催化氢还原的电化学免疫分析新方法

本文发展了一种基于纳米金介导生物沉积铂并以铂催化氢还原伏安法进行检测的高灵敏电化学免疫分析新方法。该方法采用夹心免疫分析模式,实现了人免疫球蛋白（HIgG）的测定。首先在聚苯乙烯微孔板中固定羊抗HIgG捕获抗体,HIgG捕获后,碱性磷酸酶标记的HIgG抗体修饰的纳米金探针通过与HIgG的形成的夹心复合物而结合在微孔板上。结合的碱性磷酸酶催化抗坏血酸磷酸酯底物水解产生抗坏血酸,后者在纳米金上介导下还原铂离子沉积于纳米金表面。沉积的金属铂用王水溶解并电富集于玻碳电极上。通过测定铂催化氢还原产生的阴极电流,可实现HIgG的高灵敏分析。催化氢还原电流与HIgG浓度对数在0.1~100ng/ml之间呈线性相关性,检测限达22pg/ml。由于铂催化氢还原的高灵敏度及纳米金介导的生物沉积放大反应,该法具有较高的分析灵敏度,且免疫分析微孔板模式使得该法可同时用于大量样品的分析。     

时间分辨荧光免疫法检测日本鳗鲡的产酸克雷伯氏菌

从皮肤点状出血的日本鳗鲡中分离出产酸克雷伯氏菌菌株B12,经福尔马林灭活后,注射新西兰兔,制备免疫抗血清,G蛋白亲和层析纯化得到抗体（IgG）,以固定于微孔板的IgG作为捕获抗体,Eu³⁺螯合物标记的IgG作为检测抗体,建立了产酸克雷伯氏菌的夹心型时间分辨荧光免疫检测法（TRFIA）,并研究了抗体浓度、免疫时间及离解时间对检测的影响。本方法检出限为5.0×10³ cfu/mL;线性范围5.0×10³～1.0×10⁷ cfu/mL,相关系数达0.99以上。交叉反应表明其具有较高的特异性,板内和板间相对标准偏差分别为5.64%和2.27%。将本方法标准化后,检测了29份人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,结果满意。     

基于抗原包被的微孔板式化学发光酶免疫分析法测定人尿中的雌三醇

将雌三醇-6-(O-羧甲基)肟(E3-6-CMO)与牛血清白蛋白(BSA)形成的偶联物E3-6-CMO-BSA物理吸附于聚苯乙烯微孔板孔内作为固相抗原,与雌三醇(E3)标准溶液或者水解尿样中待测E3通过竞争法进行免疫反应.以对碘苯酚增强的辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系作为信号检测系统,建立了一种高通量、简便快速、灵敏稳定的化学发光酶免疫分析方法用于测定人尿中E3的含量.考察和优化了包被液的酸碱性、抗原包被浓度、酶标抗体稀释比例及用量、温育时间、化学发光底物用量及化学发光反应时间的影响.在最优实验条件下,方法的灵敏度为0.20ng/mL,批内和批间变异系数均在15%之内,低、中、高浓度加标水解尿样的平均回收率分别为107.9%、100.9%和91.2%.使用抗原包被法和抗体包被法同时对10份水解尿样进行测定,结果显示相关性良好,相关系数为0.9984,表明本方法可以满足临床检测的要求.     

热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原的新方法

以N-异丙基丙烯酰胺为单体,将水溶性热敏高分子聚异丙基丙烯酰胺(PNIP)和抗体偶联,用异硫氰酸荧光素标记羊抗人乙肝表面抗原抗体,建立了夹心型热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原(HBsAg)的新方法.评价了抗体在PNIP上的固定效率和非特异性吸附情况.HBsAg在0.5～100μg/mL范围内与体系荧光强度呈良好的线性关系,检出限为10ng/mLHBsAg.该方法既具有均相免疫分析的快速性,又有固相免疫分析的高灵敏度.用于乙肝病人血清中HBsAg水平的测定,结果令人满意.     

顺序注射可更新表面固相荧光免疫法测定人血清中免疫球蛋白G

建立了采用芯片式微型流通池的测定人血清中免疫球蛋白G(IgG)的顺序注射可更新表面非均相荧光免疫分析法。将羊抗人IgG抗体固定于包被有蛋白A的Sephamse CL4B凝胶微珠,然后制备成固相抗体。用标记FITC的抗人IgG抗体作为第二抗体。固相抗体、血清试样和荧光标记第二抗体由顺序注射系统注入芯片式微型流通池,并在其中进行免疫反应生成夹心式抗体．抗原荧光复合物。荧光分光光度计通过光纤与流通池耦合测定截留于流通池中的抗体一抗原复合物荧光强度。一次测定完成后,微珠即被排出流通池。流通池经缓冲液清洗后即可进行下一次测定。体系经优化后,检出限为0．1mg／L IgG,分析速率达到11次／h。3．9mg／L IgG的日内和日间精密度(RSD)分别为1．7％和5．2％;校正曲线的线性范围为0．3—7．0mg／L IgG。所建立的方法已成功地应用于人血清中IgG的测定。     

基于可控相转变温度热敏高分子的人IgG酶联荧光免疫分析

以温度敏感高分子聚N－异丙基丙烯酰胺－丙烯酰胺[P(NIP-AA)]作为载体,建立了酶联荧光免疫分析人IgG的新方法。AA摩尔含量为8％的高分子P(NIP-AA)其临界溶解温度为37 °C。竞争型免疫测定中,被固定的IgG和标准溶液（或样品）在33 °C均相条件下竞争性地与辣根过氧化物酶标记抗体反应,升高温度分离出高分子免疫复合物,沉淀重新溶解后通过偶联过氧化氢与对羟基苯乙酸的荧光反应进行定量,线性范围为100-1000 ng/mL,检测限为2.0 ng/mL。方法灵敏、快速操作简便,且提高了免疫反应效率。此外,灵敏度与用传统微孔板做载体相似,但测定时间更快（从100-120分钟减少到30分钟）。该法用于测定人血清中IgG的含量,结果满意。