液相色谱-串联质谱法测定尿液中的内源性类固醇激素

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定尿液中的内源性类固醇激素的方法。尿样经葡萄糖醛酸甙酶酶解后进行液-液提取,以甲醇-0.1%甲酸缓冲液(含0.02 mol/L乙酸铵)(体积比为68:32)为流动相,采用Cosmosil C18色谱柱分离,并以三重四极杆串联质谱多反应监测扫描方式对尿样中的脱氢表雄酮(DHEA)、睾酮、表睾酮、雄酮和苯胆烷醇酮等5种激素进行检测。方法的最低检出限为0.01～10 ng/mL,平均回收率为96.7%～106.5%,日内和日间相对标准偏差(RSD)分别小于7%和11%。应用所建立的方法测定了健康志愿者口服DHEA后尿液中内源性类固醇激素的变化情况,结果表明该方法样品处理简便,色谱分离完全,结果准确可靠,可替代气相色谱-质谱法用于体液中内源性类固醇激素兴奋剂的常规分析。     

多重机制杂质吸附萃取净化-快速液相色谱-串联质谱法测定鱼组织中11种同化激素

建立了准确、灵敏的鱼组织中11种同化激素(勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、甲睾酮、睾酮、醋酸睾酮、群勃龙、丙酸睾酮、康力龙、氟甲睾酮)的多重机制杂质吸附萃取净化-快速液相色谱-串联质谱的分析方法。鱼组织均质样品经甲醇提取后,在上清液中加入一定量的C18固体吸附剂、中性氧化铝吸附剂和氨基功能化纳米吸附剂实现快速净化。采用Shim-Pack XR-ODSII色谱柱(100 mm×2.0 mm, 2.2 μm)分离,以乙腈(含0.1%甲酸)和水(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子多反应监测(MRM)模式下检测,外标法定量。结果表明,11种目标化合物在线性范围内具有良好的线性关系,相关系数大于0.999,其在鱼组织中的检出限(S/N＞3)为0.03～0.4 μg/kg,定量限(S/N＞10)为0.1～1.5 μg/kg,平均回收率为80.9%～98.1%,相对标准偏差(RSD)为5.2%～11.5%。该方法简便、快速、准确,可用于鱼组织中同化激素的定性、定量监测。     

脂质组学血清样品处理方法及其快速高分辨液相色谱-质谱分析

通过系统考察血清样本前处理方法、优化液相色谱条件及质谱检测参数,建立了脂质组学血清样本前处理及其快速高分辨液相色谱-质谱(RRLC-MS)分析方法。血清样本中加入二氯甲烷-甲醇(CH2Cl2-CH3OH,2∶1,V/V)混合溶剂进行脂质提取,采用ACQUITY UPLC CSH C18色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7μm),以10 mmol/L甲酸铵溶液(含0.1%甲酸)为流动相A,乙腈-异丙醇(1∶1,V/V)为流动相B,梯度洗脱,采用正负离子检测模式电喷雾电离(±)ESI、正离子检测模式大气压化学电离(+)APCI方式进行质谱检测。对血清中脂肪酸、甘油脂、鞘磷脂、甘油磷脂和胆固醇(酯)5类14种代表性脂质类成分进行了方法学考察。结果表明,方法灵敏度高、精密度及稳定性良好。对穿插在检测序列中的质控样本检测结果进行主成分分析(PCA),证明了本方法获得数据的可靠性良好,适用于脂质组学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定化妆品中22种激素

提出了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中22种激素残留量的方法。样品经乙腈超声提取,分别采用Oasis HLB固相萃取柱(方法一)和凝胶渗透色谱(方法二)两种方法净化。经净化的试液用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm)分离,15种激素用不同比例配成的含0.1%(体积分数)甲酸的水溶液和乙腈组成的流动相梯度洗脱。质谱测定中采用正离子电离方式多反应监测模式;另7种激素用不同比例配成的水和乙腈组成的流动相梯度洗脱,质谱测定中采用负离子电离方式多反应监测模式。方法一的检出限为0.01～0.40mg.kg-1;回收率在61.5%～111%之间;方法二的检出限在0.1～4.0mg.kg-1之间,回收率在60.8%～113%之间。     

血液中吲唑酰胺类合成大麻素的检验研究

建立了血液中6种吲唑酰胺类合成大麻素超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检验方法.前处理分别采用沉淀蛋白和固相萃取2种方法,UPLC-MS/MS检测,选用ACQUITY UPLC BEH C18(1.7 μm,2.1 mm ×100 mm)色谱柱,含1 mmol/L甲酸铵的甲酸-水(1∶1000,V∶V)溶液为水相(A相),甲醇为有机相(B相)进行梯度洗脱,采用正离子扫描模式,多反应监测(MRM)模式进行检测.结果 表明,6种合成大麻素的线性范围宽,相关系数均大于0.99,检出限0.01 ～0.05 ng/mL,定量限0.05 ～0.1 ng/mL,回收率77.1％ ～95.7％,基质效应在75.2％ ～ 104.4％,日内日间精密度均小于11％.建立的方法可用于真实血液样本的检验.     

液相色谱-串联质谱法测定SD大鼠全血中新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001浓度北大核心CSCD

建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,含0.1%甲酸的甲醇溶液作为流动相B,在0.8 mL/min流速下梯度洗脱。待测物RN-0001和内标环孢菌素A的检测采用正离子电喷雾多反应监测模式,其检测离子对分别为m/z 645.4/156.2和m/z 601.8/156.1。RN-0001在30.0 ng/mL~30.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(r 2>0.9961),定量下限为30.0 ng/mL,批内和批间的精密度小于5.2%,批内和批间准确度在-3.6%~6.7%之间。RN-0001基质样品在室温放置18 h,-80℃冰箱放置40天以及经过5次冻融循环后均稳定。SD大鼠尾静脉注射3 mg/kg的RN-0001注射液进行药代动力学研究,RN-0001的半衰期t 1/2为3.53 h,峰浓度C 0为9370 ng/mL,血药浓度-时间曲线下面积AUC 0-24 h为5300 h·ng/mL。结果表明,所建方法适用于RN-0001在SD大鼠体内的药代动力学研究。     

液相色谱-三级质谱法分析尿液中β2-受体激动剂及β-受体阻断剂多组分残留

建立了SPE柱净化结合液相色谱-三级质谱测定尿液中12种β-受体激动剂和4种β-受体阻断剂的方法.尿液样品经冷冻离心,加人β-葡萄糖苷酸酶酶解后,以高氯酸沉淀蛋白,经HLB和MCX固相萃取柱净化.在Waters Atlantis(R)T3色谱柱上以甲醇和含0.1%甲酸流动相进行梯度洗脱分离,采用ESI源正离子模式进行三...     

以睾酮为探针采用高效液相色谱法测定细胞色素CYP450 3A4的酶活性

建立了一种快速、高效的以睾酮作为探针药物评价细胞色素P450 3A4(CYP3A4)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。采用的色谱柱为Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),梯度洗脱,流速1.0 mL/min,紫外检测波长245 nm,柱温30 ℃。睾酮与大鼠肝微粒体温孵后,过已活化好的C18固相萃取小柱,收集甲醇洗脱液,于37 ℃水浴中通N2吹干,用50%甲醇复溶后进样分析测定。研究结果表明,6β-羟基睾酮的 保留时间为11.60 min,线性范围为0.5～32 μg/mL,最低检出质量浓度为0.02 μg/mL,提取率为88.41%～92.73%,方法的回收率为99.07%～101.30%;睾酮的保留时间为19.27 min,线性范围为0.5～40 μg/mL,最低检出质量浓度为0.01 μg/mL,提取率为89.59%～92.66%,方法的回收率为96.50%～98.03%。两者的日内、日间相对标准偏差均小于10%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外睾酮及其代谢物6β-羟基睾酮的测定,可应用于体外CYP3A4酶活性的评价及酶动力学的研究。     

液相色谱-串联质谱结合谱库检索法同时测定猪组织中12种类固醇激素

建立了猪组织中12种类固醇类激素(炔诺酮、雄诺龙、醛固酮、去氢睾酮、达那唑、去氢甲睾酮、甲基睾丸酮、诺龙、孕酮、康力龙、睾酮和丙酸睾酮)多残留的液相色谱-四极杆/线性离子阱串联质谱(QTrap LC-MS/MS)的检测方法。组织样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解提取,混合型强阳离子交换固相萃取小柱(MCX柱)净化后,以含0.1%(体积分数)甲酸的乙腈和水为流动相,经Venusil MP C18色谱柱(100 mm×2.1 mm, 3 μm)分离,按照多级反应监测(MRM)、信息相关采集(IDA)、增强子离子扫描(EPI),结合建立的12种类固醇类激素的标准谱图库检索的多步模式进行分析。结果表明,12种类固醇激素的线性范围为0.5～100.0 μg/L,线性相关性良好(r＞0.99);样品在5.0 μg/kg添加水平下的平均回收率为72.0%～98.1%,相对标准偏差为3.1%～12.5%;方法检出限(S/N=3)为0.2～0.5 μg/kg。实际样品检测结果表明,应用本方法可以实现对猪组织样本中类固醇类激素残留的定性定量分析,且具有灵敏、准确的特点。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定浓缩果汁中的18种多酚物质

建立了浓缩果汁中18种多酚物质的超高效液相色谱(UPLC)-串联质谱(MS/MS)检测方法.样品经水稀释,HLB固相萃取净化,浓缩蒸干后用甲醇和0.1%甲酸定容.采用Acquity UPLC BEH C18 (1.7μm ×2.1 mm ×50 mm)色谱柱分离,以甲醇和0.1%甲酸为流动相,在0.3 ml,·min-...     

中药粉体物理指纹图谱研究进展

中药(TCM)粉体是中药口服固体制剂的重要中间体或产品,粉体的物理性质不仅影响制剂成型,而且直接或间接影响产品质量。中药粉体种类众多、尺度各异,采用物理指纹图谱可从物理状态层面整体评价中药粉体质量,并可将其作为对中药粉体含量测定或HPLC指纹图谱评价的补充,这为中药粉体全面质量控制提供了新的工具和思路。该文系统梳理了中药粉体物理指纹图谱的规范化建立方法,包括指标体系的设计、二级指标的测试或计算,以及二级指标标准化处理和图谱展示。总结了物理指纹图谱在中药破壁粉、中药浸膏粉、中药颗粒、药用辅料、制剂成型工艺全过程质量评价和制剂处方设计中的应用。指出了开展物理指纹图谱和物性分析方法验证,确保物理指纹图谱数据可靠,同时结合模式识别和人工智能方法拓展物理指纹图的应用场景,支持中药质量一致性评价、产品和工艺的设计与持续改进,将是中药粉体物理指纹图谱未来的研究方向。     

用高效液相色谱组方指纹图谱智能预测中药质量的新模式

建立大黄、黄芩、黄连的高效液相色谱(HPLC)组方指纹图谱,确定其融合模型,观察组方融合指纹图谱(CSF)与一清片复方样品指纹图谱的一致性,从而以CSF代替复方整体来智能预测复方制剂质量。用二极管阵列检测器(DAD)同时测定黄芩、大黄、黄连和一清片在268 nm波长下的HPLC指纹图谱,并使用系统指纹定量法进行定性、定量评价。结果 CSF涵盖各单味药主要色谱峰信息,即CSF共有峰(55个)涵盖一清片样品共有峰(50个)的主要指纹图谱信息。15批样品的质量除YQT-S01为5级外,其他质量均为3级及以上。各组合模式CSF质量除CSF-2为6级外,其余均为2级或1级。该文探讨了标准指纹图谱和中药组方融合指纹图谱的相关性,可以与相应的计算机评价软件相结合,通过组方融合指纹图谱所代表复方制剂的整体指纹图谱来实现智能预测中药成方制剂质量的新模式。     

Assessment of quality consistency in traditional Chinese medicine using multi‐wavelength fusion profiling by integrated quantitative fingerprint method: Niuhuang Jiedu pill as an example

Under the wave of the revival of traditional Chinese medicine, there is a quite imperative duty to study an integrated and comprehensive method of fingerprint data processing and analysis on the quality consistency of traditional Chinese medicine. So, we proposed six parameters from two aspects (qualitative and quantitative), three levels (biased to strong peaks, biased to weak peaks, no obvious bias), to comprehensively evaluate the similarity of the two fingerprints. On this basis, another five parameters were proposed to evaluate the integrated effects (consistency, volatility, and similarity). This method was applied to 22 batches of Niuhuang Jiedu pill samples. Next, a practical and convenient multi‐wavelength fusion method was designed to provide more information, and the generated fusion profilings were used for subsequent evaluation. The characteristics of the parameters were confirmed by correlation analysis. The results of both hierarchical clustering analysis and principal component analysis for raw data and standardized data were consistent with integrated quantitative fingerprint method results. At the same time, this method gave a reasonable explanation for abnormal and dissimilar samples. This work illustrated that the proposed method was particularly suitable for similarity analysis of fingerprints and capable of ensuring the quality consistency in traditional Chinese medicine.     

发酵虫草菌粉及产品指纹图谱建立及多指标成分分析

《中国药典》收载的发酵虫草菌粉产品的质量标准中,规定以鸟苷、腺苷、尿苷的含量作为评价相关产品质量的标准。但除此之外,还有许多其他的核苷类成分对发酵虫草菌粉质量控制的影响尚未被探讨。为探究发酵虫草菌粉及产品质控指标选择的合理性,采用超高效液相色谱-紫外检测法对19批发酵虫草菌粉及产品中9种核苷成分(尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷)进行了定量分析,建立了发酵虫草菌粉样品的指纹图谱,并结合统计学提供了一种分析指标性成分的方法。通过优化样品的提取方法,选择超声提取法制备19批发酵虫草菌粉及产品的供试液;采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 3.5 μm)进行色谱分析,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,对方法的校正曲线、准确度、精密度、重复性和回收率进行了验证。结合对照品指认了指纹图谱中的9个核苷峰,并采用外标一点法测得了各核苷成分的含量。使用化学模式识别对指纹图谱中的共有峰进行分析,聚类分析和主成分分析得到了同样的分类结果:19批样品共分为5类,其中同一发酵虫草菌粉因工艺差异可分为2类,而心肝宝胶囊、百令胶囊、宁心宝胶囊则各单独分为1类。同时,使用主成分分析获得了各样品中的指标性成分,分别为尿苷、鸟苷、腺苷、腺嘌呤、尿嘧啶,并使用聚类分析再次进行确证,验证了指标性成分的合理性。     

Quantitative fingerprinting based on the limited‐ratio quantified fingerprint method for an overall quality consistency assessment and antioxidant activity determination of Lianqiao Baidu pills using HPLC with a diode array detector combined with chemometric methods

Lianqiao Baidu pills are widely used herbal medicinal preparation that were analyzed to develop a quality consistency technique. The characteristic fingerprints of 28 batches of Lianqiao Baidu pill samples were established at five wavelengths and simultaneously assessed by using a limited‐ratio quantified fingerprint method using 15 marker compounds. The principal component analysis and fingerprinting results were compared, and the qualitative classification of the samples by principal component analysis agreed with their quantitative evaluation by the limited‐ratio quantified fingerprint method. Furthermore, the antioxidant activities of the samples were surveyed and determined using a 2,2‐diphenyl‐1‐picrylhydrazyl radical‐scavenging approach. A relationship between the common peaks in the fingerprints and the antioxidant activities was established using a partial least squares model. The relationship can be used both to determine the antioxidant activities of the Lianqiao Baidu pill preparations in vitro and as a reference for the selection of active constituents for sample quality classification. The classification results for the samples based on principal component analysis agreed with the quantitative evaluation by the limited‐ratio quantified fingerprint method, which demonstrated that the method can be applied to the holistic quality control of traditional Chinese medicine and herbal preparations.     

基于标准制剂控制模式和定量指纹图谱评价复方甘草片的质量一致性

通过建立复方甘草片标准制剂（SP）控制模式和定量高效液相色谱指纹图谱,结合5个质量标志物的精准定量评价了9个厂家共145批复方甘草片质量一致性。首先建立了复方甘草片标准制剂的标准指纹图谱（SP-RFP）,然后以SP-RFP作为评价标准,采用系统指纹定量法对145批复方甘草片进行整体定性和整体定量评价。用双标校正法校正定量指纹图谱的系统误差,结果表明所检样品质量均合格。此外,在统一化色谱条件下测定各原料药和模拟样品,对制剂指纹进行归属相关度和准确度评判,得到原料指纹与制剂指纹的相关性,从而实现智能预测制剂或原料药质量和阻止低劣原料入药。同时用紫外全指纹溶出度法测定5个厂家的复方甘草片的溶出度曲线,用以评价制剂工艺的合理性。以上方法可行且准确度高,实现了对复方甘草片质量和工艺的一致性评价。该文为中药质量一致性评价提供了基础评价模式和基本操作思路以及具体实例。     

相似系统理论定量评价中药材色谱指纹图谱的相似度

研究相似系统理论定量评价中药材提取物液相色谱指纹图谱的相似度。以相似系统理论对栀子药材提取物高效液相色谱指纹图谱的相似度评价,发现相似系统理论对数据的差异比较敏感,而且相似度的计算结果能够反映样品的相对差异。相似系统理论可以作为一种评价中药色谱指纹图谱相似度的新方法。     

灰色系统理论在中药色谱指纹图谱模式识别中的应用研究

建立了基于灰色系统理论的中药色谱指纹图谱模式识别模型。运用基于范数与信息熵赋权法的灰色关联分析,求出各待比较图谱特征变量数据序列与理想图谱特征变量数据序列之间的灰色关联度,并依据模糊匹配中的“最大匹配度”原则进行判断,从而达到品种识别和质量评价的目的。该模型在56批次不同品种化橘红药材样品的高效液相色谱分析中取得较满意的结果: 熵权与范数的灰色关联分析均能准确识别出毛橘红与光橘红两个品种,克服了传统相似度或灰色关联在化橘红色谱指纹图谱分析中的误判问题;对药材中化学成分的种类与含量十分接近的毛橘红不同栽培品种的识别率超过92.85%。此外,该模型计算量较少,整个模式识别过程通过计算机编程实现,操作简单。实验结果显示,灰色系统理论在中药色谱指纹图谱模式识别中有良好的适应性。     

关于中药质量控制与体内代谢研究的思考

质量控制是保证中药安全、有效的重要基础。体内代谢研究可以为阐明中药的治病机制提供依据。本文以蟾酥为例,讨论了当前中药质量控制及体内代谢研究存在的主要问题和解决办法:认为把中药指纹图谱的全面指认与多指标成分定量相结合是有效控制中药质量的可行途径;液相色谱-质谱联用技术(LC/MS)将在中药化学研究、体内代谢研究等方面发挥重要作用;中药的化学指纹图谱应与药理活性相关联,从而建立合理的中药质量评价体系;结构修饰对基于天然产物的新药发现具有重要意义。