基于虚拟筛选方法从天然产物中发现TNF-α抑制剂

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是治疗类风湿性疾病、克罗恩肠炎、银屑病等自身免疫性疾病的重要靶点.TNF-α与TNF-1受体(TNFR1)相互作用参与了这些疾病的病理过程.本次实验基于TNF-α活性位点结构特征构建药效团,利用该药效团对天然产物数据库进行筛选,通过Lipinski's规则和Veber规则判断化合物类药性,应...     

230例广东汉族人肿瘤坏死因子A-308基因多态性的检测

为建立一种简便、准确、实用的人肿瘤坏死因子A-308基因突变频率的检测方法,了解广东汉族人肿瘤坏死因子A-308基因的分布特点,应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增正常人肿瘤坏死因子A-308基因序列,扩增产物用限制性内切酶NcoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱,并结合文献进行了不同种族间的分析比较。结果表明,230例广东籍汉族人中,TNF-α1/1、TNF-α1/2、TNF-α2/2表型频率分别为:0.886 9、0.108 7、0.004 4,TNF-α1、TNF-α2基因频率分别为:0.941 3、0.058 7。该法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,肿瘤坏死因子A-308基因多态性在不同种族间分布存在着明显的差异。     

微流控芯片流体剪切力和肿瘤坏死因子-α共同作用对大鼠软骨细胞表型的影响

流体剪切力是生物体内普遍存在的一种生物力学形式,是细胞微环境的重要组成部分,对细胞多种生物学行为有重要调节作用。该研究以微流控芯片技术为基础,建立了一种基于流阻原理能同时产生4个不同大小流体剪切力的微流控芯片平台,用以研究低流速的流体剪切力对大鼠原代软骨细胞表型维持的影响。结果表明,流体剪切力可促进软骨细胞的表型维持。还加入了肿瘤坏死因子-α(TNF-α),考察流体剪切力和TNF-α共同作用对软骨细胞表型的影响。结果表明,在剪切力和TNF-α共同作用下,软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达明显下调。该研究为软骨组织工程和骨性关节炎的疾病研究提供有力的研究平台,为骨关节疾病治疗和防治提供了理论依据。     

能抑制TNF-α的小分子

肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF—α）是一种小分子抑制剂,对诸如风湿性关节炎等疾病有关的蛋白质的作用已经确定。目前市售的抑制剂如Enbel、Remicade都属于生物制剂。由Sunesis医药公司的Brain C．Cuningham领导的小组报道,由以二甲基胺为隔离基相联结的三氟甲基苯基吲哚和二甲基色酮能够抑制TNF-α和它的受体之间的链接。     

抗肿瘤药物研究新靶点：缺氧诱导因子-1α*

缺氧是包括肿瘤在内的许多疾病的重要特征,利用缺氧条件来选择性抑制肿瘤生长和演进是一个很有前途的研究方向。随着缺氧诱导因子-1（HIF-1）的发现,在过去15年里在分子和细胞水平上对缺氧有了更加深刻的认识,HIF-1是真核细胞在缺氧条件下进行代谢调控的关键因子,控制众多基因的表达,影响氧的转运、糖摄取、糖酵解和血管生成等。下调HIF-1水平可以作为肿瘤治疗手段。由于细胞内对HIF-1的调控主要通过其α亚基进行,HIF-1α抑制剂成为抗肿瘤药物的研究热点,已经发现的该类抑制剂包括喜树碱类、喹噁啉类、雷帕霉素类、一些甾体化合物、苯氧乙酰氨基苯甲酸类以及白藜芦醇和橙皮苷等天然物质。本文就HIF-1α的结构、功能和以其为靶点的抗肿瘤药物的研究进展做一综述。     

Dorsmerunin A的全合成及其抗炎活性研究

苯并呋喃是研发多种疾病药物的主要来源之一,在合成药物化学领域受到越来越多的关注. Dorsmerunin A是一种从桑科植物中分离出来的具有弱细胞毒活性的苯并呋喃类天然产物.以4-甲氧基水杨醛和2-溴-4'-甲氧基苯乙酮为起始原料,经分子内缩合、还原和脱保护等4步反应,以49%总收率首次完成了DorsmeruninA的全合成.另外,采用小鼠巨噬细胞RAW264.7模型初步测试了DorsmeruninA的体外抗炎活性及其作用机制,结果表明该化合物在浓度为25μmol/L时,能有效抑制NO的生成,且对炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α有显著抑制作用.     

核磁共振研究人肿瘤坏死因子α衍生物a（hTNFαDa）的变性过程

用Ｂｒｕｋｅｒ公司的ＡＭ－６００和ＭＳＬ－３００核磁共振波谱仪分别作了天然态和在不同浓度尿素作用下人肿瘤坏死因子α衍生物ａ（ｈＴＮＦαＤａ）的质子核磁共振实验发现在尿素的作用下，ｈＴＮＦαＤａ的结构发生了变化，当尿素浓度增加到４－６ｍｏｌ／Ｌ时，ｈＴＮＦαＤａ逐渐解聚为单体无规线团。     

新型大黄酸丹皮酚偶联物的合成及抗炎活性

为寻找安全有效的抗骨关节炎药物,利用拼合原理,以不同碳数的烷烃链为连接臂,将均具有抗炎作用的大黄酸和丹皮酚偶联,得到相应的新型大黄酸丹皮酚偶联物(3a～3e),其结构经¹H NMR、¹³C NMR和HR-MS(ESI)表征。采用脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞(RAW264.7)构建细胞炎症模型,RT-qPCR检测炎性因子TNF-α, IL-1β和IL-6的mRNA表达。结果显示：目标化合物能够抑制LPS诱导的炎症因子的表达,具有一定的抗炎活性。     

川芎对大鼠心肌缺血再灌注NF-κB的影响作用

目的探讨川芎治疗心肌缺血再灌注的作用机理。方法将SD大鼠50只,随机分为5组,每组各10只、以及空白组10只。共60只大鼠。即空白对照组(生理盐水20 mL/kg)、模型组(生理盐水20 mL/kg)、川芎高剂量(100 mg/kg)、川芎中剂量(50 mg/kg)、川芎低剂量(25mg/kg)组。采用放免法检测血清TNF-α含量,免疫组化法测定心肌组织中核因子κB的表达。结果川芎对各组及治疗组血清TNF-α含量与正常组比较显著降低(P0.01),NF-κB的活化程度正常组比较显著降低(P0.01)。其中以中剂量治疗组效果最为显著。结论川芎可降低血清中TNF-α含量,减少心肌组织中NF-κB活化程度,达到对心肌缺血再灌注作用。     

PDE-4抑制剂的设计、合成及生物活性研究

依据药效团原理,对已报道的磷酸二酯酶(PDE-4)抑制剂Crisaborole进行结构修饰和改造,设计并合成了7个全新的小分子化合物,其结构经~1H NMR、~(13)C NMR和HRMS确证.研究其对磷酸二酯酶-4A(PDE-4A)的抑制活性、抑制炎症因子TNF-α释放效果以及抗炎活性.结果表明,所设计的7个化合物均表现出良好生物活性,其中一个化合物活性明显优于阳性对照药.     

N-糖链唾液酸连接异构体的质谱分析方法研究进展

蛋白质在翻译过程中、翻译过程后会发生糖基化. 糖基化会以直接或间接的方式影响蛋白质的功能及其相互作用, 并与多种人类疾病有关, 其中, 唾液酸化N-糖链在一些重要的生理和病理过程中发挥关键作用. 已知的唾液酸与相邻单糖之间的连接方式包括α-2,3-、α-2,6-、α-2,8-、α-2,9-连接, 连接方式不同的唾液酸化N-糖链在细胞活动、生命体的生理和病理过程中的功能往往不同. 质谱技术是分析N-糖链的重要工具, 它能够快速和灵敏地检测N-糖链, 通过将色谱技术以及衍生化方法等与质谱联用可以实现对唾液酸化N-糖链及其连接异构体的分离和检测. 本文主要围绕α-2,3-和α-2,6-连接的唾液酸化N-糖链进行综述, 介绍它们的结构和在细胞活动及疾病中不同的功能, 并综述近年来基于质谱的唾液酸化N-糖链的连接异构体分析方法以及这些方法在生物医学领域的应用, 并对未来的生物医学研究提供新的思路和途径.     

肿瘤坏死因子α和γ-干扰素对白血病细胞作用的31PNMR分析

用^31P核磁共振观察了肿瘤坏死因子α（TNF－α）和γ－干扰素（IFN－γ）联合对人淋巴瘤白血病细胞系Molt-4作用后含磷化合物的变化；Molt-4细胞系的^31P谱主要由三磷酸腺苷（ATP）、无机磷（Pi)、磷酸单酯等的共振峰组成；^31P谱显示γ－干扰素、肿瘤坏死因子α及γ－干扰素和肿瘤坏死因子α联合对Molt-4细胞作用后，三磷酸腺式苷的β位磷的共振峰与无机磷的峰高比值（hATP/hPi)不同程度地降低；同时根据Pi的化学位移对Molt-4细胞胞内pH的变化进行了监测。     

高效液相色谱法测定染发剂中α-萘酚

在化妆品行业,α-萘酚作为着色剂被用于一些染发剂中。α-萘酚有致癌、致畸、致突变性等潜在危害性,也是环境污染物。人体接触后可引起烧灼感、咳嗽、头痛、眩晕、呕吐等症状,大量吸收后会引发肾炎、结膜炎、皮炎和血溶性贫血等疾病。我国规定α-萘酚在染发剂中最大浓度不应超过0.5%。因此,如何简便、准确、快速地检测α-萘酚尤为重要。已有相关文献报道了染发剂中α-萘酚的高效液相色谱-紫外检测的测定方法,但因为检测波长选择不当,导致分析方法的灵敏度     

石墨烯介导巨噬细胞膜涂层的制备及对钛种植体防污和免疫调控性能的影响

钛种植体容易受到生物污染和炎症反应的影响,从而导致骨融合不良甚至种植失败.本文通过聚多巴胺将石墨烯固定于钛种植体表面,然后利用石墨烯与M2型巨噬细胞膜之间极强的相互作用力,将M₂型巨噬细胞膜结合到氧化石墨烯层表面,在宏观水平上制备了一种具有生物活性的细胞膜涂层.该天然细胞膜涂层可以有效防止蛋白的非特异性吸附,具有良好的抗生物污染性能.同时,由于天然细胞膜存在高细胞亲和力,修饰上细胞膜涂层的钛种植体表现出良好的生物相容性.此外,采用免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)对促炎因子(iNOS和TNF-α)和抗炎因子(IL-10和IL-1ra)进行了检测.实验结果表明,在炎症环境下,修饰上M₂型巨噬细胞膜涂层的钛种植体可诱导RAW264.7细胞向M₂型极化,具有优异的免疫调控能力.因此,这种依靠石墨烯与磷脂之间相互作用力的细胞膜涂层制备策略为解决钛种植体生物污染和炎症反应等问题提供了一种全新的思路.     

高岭石/苯甲酰胺插层复合物的热分解行为及脱嵌反应动力学

以高岭石/二甲基亚砜为前驱体,利用置换法制备了高岭石/苯甲酰胺插层复合物。XRD和FTIR分析表明苯甲酰胺进入高岭石层间并与其形成新的氢键。采用TG、DSC研究了插层复合物的热分解行为。结果表明复合物在加热过程中发生两步分解,第一步是插层复合物的分解,即插层剂分子于231℃发生脱嵌,第二步为高岭石脱羟基的过程。针对第一阶段的脱嵌反应,采用等转化率法改进后的迭代法、Malek法以及Dollimore法等动力学方法计算得到了完整的动力学三因子:活化能Ea=75.4kJ.mol-1,指前因子A的范围为4.9×1010~8.8×1010s-1,动力学方程为:G(α)=[1-(1-α)1-n]/(1-n),f(α)=(1-α)n。     

共固定化TNF-α/IFN-γ对宫颈癌HeLa细胞的长效抑制作用

利用光化学固定方法,将TNF-α/IFN-γ共同固定在组织培养聚苯乙烯培养孔内,选择最佳固定细胞因子剂量20ng/well,对HeLa细胞行长效性实验研究.培养时间为1d、2d、3d、4d、5d和6d.同时设游离TNF-α+IFN-γ与纯无血清培养对照组.计算TNF-α/IFN-γ共固定药物对HeLa细胞抑制率.并采用荧光显微镜及流式细胞仪行Hoechst 33258染色定性分析和磷脂酰丝氨酸外翻定量分析细胞凋亡.结果表明低剂量20ng/well的共固定细胞因子对HeLa细胞的生长抑制具有时间效应,作用第5d抑制率达到92%,游离细胞因子作用第3d达到最大抑制率76%,第6d抑制率减少到41%.Hoechst 33258细胞形态学研究显示,药物作用6d时,20ng/well共固定细胞因子诱导的凋亡效果比游离细胞因子的更为显著.流式细胞仪磷脂酰丝氨酸外翻定量分析表明作用第6d,20ng/well共固定药物诱导宫颈癌细胞早中期凋亡的比率比同样浓度游离药物凋亡率高14.8%.经光化学固定后低剂量细胞因子TNF-α/IFN-γ具有抑制HeLa细胞生长与诱导HeLa细胞凋亡的活性,并且共固定化细胞因子的抑癌活性和药效持续性比游离细胞因子显著.     

乏氧光学影像探针的设计与应用

氧气在生命活动中具有重要意义, 为需氧生物提供了重要的能量来源, 氧气供应不足会导致组织乏氧. 乏氧往往与炎症、 慢性伤口及肿瘤等多种疾病密切相关, 而组织氧浓度是评估机体健康的重要依据. 光学成像在空间分辨率、 灵敏性和成本方面的巨大优势使其成为炎症、 癌症、 脑部疾病和手术导航的重要影像诊断工具. 本文介绍了数种乏氧响应的光学探针的合成策略, 并展示了不同的乏氧光学探针在肿瘤检测、 炎症监测、 伤口氧含量监测、 治疗响应监测和食品包装检测等方面的应用, 最后探讨了乏氧光学成像的应用前景.     

超氧化物歧化酶催化超氧离子自由基歧化作用的机制

生物氧化不仅为机体提供能量,在氧化过程中也产生与氧有关的超氧离子O_2~-自由基和羟自由基·OH等。这些自由基可激发机体中不饱和脂肪酸邻近双键α-碳上的氢键均裂,形成一系列自由基反应,称之谓脂质过氧化作用。近几年来关于脂质过氧化作用的研究涉及面相当广泛,包括某些疾病的病理过程如肿瘤、感染、炎症反应、自身免疫病、化学中毒、辐射损伤及     

压电免疫传感器用于B因子的测定

B因子是一种不耐热的球蛋白,它参与机体的防御,在炎症过程、细胞和组织损伤中均起重要作用.B因子的检测方法常用的有单扩散法、火箭电泳法和溶血法,前者灵敏度不高,重复性差;后两者操作较复杂^[1,2].     

压电免疫传感器用于B因子测定

B因子是一种不耐热的球蛋白,它参与机体的防御,在炎症的过程、细胞和组织损伤中均起重要作用。B因子的检测方法常用的有单扩散法、火箭电泳法和溶血法,前者灵敏度不高,重复性差;后两者操作较复合^[1,2].因此,寻找一种简单、快速、灵敏且可精确定量的检测方法在临床医学上很重要的价值。压电免疫传感器具有仪器装置简单、灵敏度高、能快速检测、无需标记、可精确定量等优点,已被广泛应用^[3]。聚乙烯亚胺粘附和戊二醛交联法常用于石英晶体电极上抗体的固定^[4]。本文采用这一方法固定B因子抗体,研制了一种新型的传感器,用于B因子的检测,并选用4种解吸剂研究了电极的可重复性。