荧光探针法检测人体代谢中头孢他啶含量

建立了一种快速测定头孢他啶含量的荧光探针法。在pH 4.00的Britton-Robinson缓冲溶液中,曙红Y与十六烷基三甲基溴化铵发生荧光增强反应,再加入头孢他啶,体系荧光强度降低,且降低程度与药品加入量有良好线性关系。在优化实验条件下,线性范围为0.008～0.8 mg/L,检出限为0.0018 mg/L。借此检测了头孢他啶在人体代谢(血清和尿液)中的含量,回收率97.5%～102.6%,相对标准偏差1.9%～2.1%。     

荧光探针法检测血清中阿莫西林含量

建立了水溶性荧光素-十六烷基三甲基溴化铵测定阿莫西林含量的荧光探针法。在pH 8.60的Sфrensen缓冲溶液中,十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)与水溶性荧光素(SF)发生荧光减弱反应,加入阿莫西林后,体系荧光强度增强,且加入量与增强程度呈良好线性关系。在优化的条件下,线性范围为0.006～0.72 mg/L,检出限为0.0018 mg/L。检测阿莫西林在动物血清中的含量,回收率为98.4%～100.8%,相对标准偏差在1.6%～3.2%之间。     

荧光探针法快速测定牛奶中三聚氰胺

在pH 8.40的缓冲溶液中,一定浓度的溴化十六烷基三甲基铵可以使阴离子染料荧光素的荧光强度显著增强,加入一定量的三聚氰胺后,其荧光发生猝灭,且荧光猝灭的程度在一定的范围内与加入的三聚氰胺的量呈良好的线性关系,据此建立了以荧光素作为荧光探针测定三聚氰胺含量的荧光光谱法。优化了实验条件,获得的线性范围为0.025～0.85 mg/L,检出限为0.0019 mg/L。样品回收率为82.9%～87.4%,相对标准偏差为1.9%～4.0%。方法可用于牛奶中三聚氰胺的快速测定。     

阳离子表面活性剂与茜素红的荧光反应及其分析应用

应用荧光光谱法研究了3种阳离子表面活性剂(CS)与茜素红(Alizarin red,AR)间的相互作用.在pH 6.60的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,当CS的浓度较低时,CS的加入使AR的荧光猝灭,而高浓度时却使荧光增强.因此认为低浓度时CS单体与AR形成稳定离子缔合物使体系荧光猝灭,而高浓度时则形成胶束抑制缔合物的形成而表现出胶束的增溶增敏特性.在0.1～30.0 mg/L的质量浓度范围内荧光强度变化与CS浓度呈良好的线性关系,检出限分别为0.018 mg/L(十六烷基三甲基溴化铵,CTMAB)、0.025mg/L(氯化十六烷基吡啶,CPC)和0.032 mg/L(氯化十四烷基二甲基苄铵,Zeph).该方法用于水样中CS含量的测定,回收率为99%～103%.     

蛋白质的曙红Y-中性红逆向能量转移荧光法测定

在pH 2.35的B-R缓冲溶液中,酸性染料曙红Y(EY)与碱性染料中性红(NR)之间由于静电吸引能够发生有效的能量转移,使能量受体NR荧光增强,能量给体EY的荧光猝灭.在该体系中加入人血清白蛋白(HSA),由于竞争作用使得HSA的加入破坏了EY-NR间的能量转移,产生了明显的逆向反应,并且生成HSA-EY络合物,利用该络合物的荧光增加强度与HSA含量间的线性关系建立了一种测定微量血清蛋白的新方法.结果表明,血清蛋白工作曲线线性范围为0.6～12.0 mg/L;方法检出限为0.25 mg/L;6次平行测定相对标准偏差为1.94%～4.58%;回收率为96%～105%.该方法的稳定性好、选择性高,直接用于人血清试样中总蛋白含量的测定,实验结果与常用的双缩脲法基本一致.     

十六烷基三甲基溴化铵增敏荧光光度法测定荧光增白剂CBS-X

研究了不同条件下荧光增白剂CBS-X的荧光光谱,探讨了十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对荧光增白剂CBS-X荧光的增敏机理。建立了在pH=8的Tris-HCl缓冲溶液中,CTAB增敏荧光光度法测定CBS-X含量的新方法。方法的线性范围为0～1.73×10-7 mol/L,相关系数为0.9995,检出限为0.45ng/mL。该方法用于合成洗涤剂中CBS-X的测定,得到满意结果。     

姜黄素-La3+-CTMAB-核酸体系的荧光增强效应及其应用

研究了镧离子(La3+)-姜黄素(CU)-十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)-核酸荧光增强体系.建立了测定核酸的新方法.体系的最优条件为:六次甲基四胺(HMTA)-HCl缓冲溶液(pH 5.80)中,1.00× 10-3 mol/L阳离子表面活性剂CTMAB存在下,姜黄素浓度为2.00×10-5 mol/L,La3+的浓度为1.40×10-4 mol/L时,核酸能增强La3+ -CU络合物的荧光强度,而且体系荧光的增强程度与核酸的加入量在一定范围内呈线性关系.fsDNA,ctDNA和yRNA线性范围分别为7.00×10-4～10.00 mg/L,4.00×10-4～10.00 mg/L和7.00×10-4～10.00 mg/L;检出限分别为0.17,0.02和0.14 μg/L.与已报道的核酸的分析方法相比,本方法具有较宽的线性范围和较高的灵敏度.研究表明,核酸对体系荧光的增强源于DNA主链上PO3-4与CU之间的静电结合,以及通过氢键和疏水力进行的沟槽式结合,为探针分子提供了疏水性的微环境,降低了体系的非辐射能量损失,使体系的荧光强度增加.     

荧光探针碘苷在血清白蛋白同步荧光测定中的应用研究

在最佳实验条件下,碘苷与血清白蛋白相互作用,导致血清白蛋白的内源荧光发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中血清白蛋白的浓度呈线性关系.据此,建立了以碘苷为荧光探针,运用固定波长同步荧光光谱分析测定人血清白蛋白和牛血清白蛋白的新方法.体系的同步荧光强度与人血清白蛋白和牛血清白蛋白分别在1.38～579 mg/L和0.78～585 mg/L范围内呈良好的线性关系,检出限分别为0.612 mg/L和0.358 mg/L.对实际样品进行回收测定,回收率为97%～101%.     

耐尔蓝-十二烷基苯磺酸钠-蛋白质体系的荧光反应及其分析应用

研究了耐尔蓝-十二烷基苯磺酸钠体系的吸收光谱和荧光光谱特性，并以此体系建立了测定蛋白质的新型荧光探针。在优化实验条件下，对人血清白蛋白和γ-球蛋白测定的线性范围均为0．16mg/L，检出限分别为0．020mg/L和0．036mg/L。该方法用于人血清中总蛋白含量的测定，与临床测定结果相吻合。     

以四磺基铝酞菁-牛血清白蛋白为底物的荧光恢复均相法测定胃蛋白酶

酸性介质中,红区荧光探针四磺基铝酞菁(AlS4Pc)的荧光被白蛋白显著猝灭,加入胃蛋白酶后,体系荧光明显回复。基于此现象,建立了荧光恢复均相测定胃蛋白酶的新方法。考察了各种影响因素,在最佳实验条件(pH2.5、反应温度50℃、反应时间1h)下,本方法的线性范围为0.04～4mg/L,检出限为20μg/L。用本方法测定实际样品中胃蛋白酶,取得了满意的结果。     

荧光猝灭法测定壳聚糖含量

在pH 6.3的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中,壳聚糖对荧光素的荧光强度具有明显的猝灭作用,且在一定浓度范围内,其猝灭程度与加入的壳聚糖浓度成线性关系,据此建立了一种新的测定壳聚糖含量的荧光猝灭分光光度法。该方法的回归方程为ΔF=64.02+42.28ρ(mg/L),R2=0.9942,线性范围为0.50~10.0 mg/L,检出限为0.27 mg/L。样品测定的RSD为4.5%(n=6),平均回收率为99.3%。采用该方法可测定复杂样品中的壳聚糖含量。     

一种简单灵敏的盐酸文拉法辛测定方法

四苯硼钠对罗丹明B具有荧光猝灭作用,使其荧光信号强度减弱甚至消失,而盐酸文拉法辛可以跟四苯硼钠反应生成更稳定的疏水性离子缔合物沉淀,使罗丹明B重新释放出来,又使该体系荧光信号强度增强,且荧光信号的增强程度与盐酸文拉法辛的加入量成正比关系,据此建立了一种反荧光猝灭法测定盐酸文拉法辛新方法。以365nm为激发波长,610nm为发射波长,测量了试液和空白液荧光强度之差ΔF。盐酸文拉法辛的质量浓度在2.423～43.94mg/L范围内与△F值呈线性关系,线性回归方程为△F=1.1789ρ-9.158,相关系数R为0.9995,检出限为0.7268mg/L,方法 RSD为0.87%。用本方法对不同厂家生产的盐酸文拉法辛缓释片及盐酸文拉法辛胶囊样品进行测定,测定值与药品标示量基本相符,加标回收率在95%～103%之间。     

曙红-中性红荧光能量转移抑制法测定肝素

在pH 6.65的Britton-Robinson (B-R)缓冲溶液中, 酸性染料曙红(EY)与碱性染料中性红(NR)之间由于静电吸引而能够发生有效的能量转移, 使得能量受体NR荧光增强, 同时能量给体EY的荧光猝灭. 而肝素的加入对该荧光体系间的能量转移产生了明显的抑制作用, 随肝素量的增加EY荧光依次增强, 由此建立了测定微量肝素的新方法. 结果表明, 肝素在0.1～2.0 mg/L范围内与EY的荧光增强程度呈良好的线性关系. 方法检出限0.071 mg/L, 用于肝素钠注射液中肝素钠效价的测定, 6次平行测定相对标准偏差1.4%～3.6%, 回收率95.2%～105.3%.     

基于铽-沙拉沙星配合物的荧光增强测定人血清白蛋白

Tb3+和沙拉沙星(SRFX)反应生成二元配合物,发射Tb3+的特征荧光。人血清白蛋白(HSA)能够增强Tb3+-SRFX配合物的荧光强度,据此,建立了荧光法测定HSA的新方法。在最佳测定条件下,当HSA的浓度在0.50～90.0 mg/L时,Tb3+-SRFX-HSA体系荧光强度的增强和HSA的浓度有良好的线性关系,方法的检出限为0.13 mg/L。用该方法测定了人血清中HSA的含量,回收率在99.2%～99.6%之间。同时对荧光强度增强的机理进行了探讨。     

核黄素化学发光体系测定盐酸赛庚啶

核黄素是一种荧光试剂,本实验发现,核黄素也可以用作化学发光试剂.以核黄素为化学发光试剂, 构建了NCS-核黄素-盐酸赛庚啶化学发光新体系.利用此体系建立了测定盐酸赛庚啶的化学发光分析新方法.方法的线性范围为0.02～1.0 mg/L, 检出限为9.0 μg/L, 对浓度为01 mg/L盐酸赛庚啶溶液进行11次平行测定的相对标准偏差(RSD)为0.8%.此法已用于药品中盐酸赛庚啶含量的测定, 结果与药典测定结果一致.对化学发光反应的机理也进行了初步的探讨.     

牛血红蛋白催化荧光猝灭法测定痕量甲巯咪唑

在NH3·H2O-NH4Cl缓冲溶液中,牛血红蛋白催化H2O2氧化L-酪氨酸产生荧光,甲巯咪唑对该荧光体系具有较强的猝灭作用。据此建立了酶催化荧光猝灭法测定痕量甲巯咪唑的方法。结果表明,甲巯咪唑含量在0.986~14.8μg/L范围内与荧光强度变化值呈线性关系,其线性回归方程为ΔF405 nm=50.923ρ+191.45,相关系数(R²)为0.9945,检出限为为0.32μg/L。方法用于测定药品中甲巯咪唑含量,测定结果的RSD为4.7%,回收率92%~96.3%。     

荧光法测定有机磷农药残留总量及其分析应用

在pH 6.20的Britton-Robinson缓冲溶液中,4,5-二溴荧光素(R)与一定浓度的溴化十六烷基三甲基铵(CTMAB)反应,使其荧光强度剧增,当在R-CTMAB体系中加入有机磷农药后,体系的荧光强度明显降低,且降低程度与有机磷农药的加入量呈良好的线性关系,据此建立了测定有机磷农药残留总量的新方法.在优化实验条件下,线性范围为0.05～0.88 mg/L,检出限为0.041 mg/L.已用于大米、面粉和土壤中有机磷农药残留总量的检测,回收率在87.5%～95.7%之间,相对标准偏差为1.5%～2.3%,符合农药残留量分析的要求.     

槲皮素-Al~(3+)-十六烷基三甲基溴化铵体系荧光光度法测定总黄酮

用荧光法探索了十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)、β-环糊精(β-CD)、聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)4种有序介质,及反应时间、pH等条件对槲皮素-Al 3+体系荧光强度的影响。结果表明:四种有序介质中,CTMAB在酸性介质(pH=6.10)下对槲皮素-Al 3+体系荧光增敏效果最好,在λex/λem=450/539nm处有强荧光峰。据此,建立了一种用CTMAB增敏荧光光度法测定总黄酮含量的新方法,其线性范围为4.0×10-8~1.0×10-5 mol/L,检出限为1.24×10-8 mol/L,相对标准偏差(RSD)为2.26%。方法已用于银杏叶片中黄酮含量的测定。     

β-环糊精增敏荧光猝灭法对粮食样品中L-色氨酸的分析研究

研究了Se(Ⅳ)-丁基罗丹明B与L-色氨酸结合物在β-环糊精(β-CD)介质中的荧光光谱行为.加入L-色氨酸可使Se(Ⅳ)-丁基罗丹明B体系发生荧光猝灭,β-CD的加入导致溶液中荧光猝灭值ΔIF增加,且L-色氨酸的质量浓度与ΔIF呈良好的线性关系,据此建立了荧光猝灭测定L-色氨酸的新方法.优化了实验条件,结果表明:β-CD对测定具有增敏作用,色氨酸的质量浓度在1.0 ～30.0 mg/L范围内与荧光强度呈线性关系,回归方程为ΔIF =399.1ρ(mg/L)+258.9,相关系数r=0.999 3,检出限为0.21 mg/L.将方法用于粮食样品中L-色氨酸的测定,结果令人满意.     

吖啶橙-罗丹明6G能量转移荧光猝灭法定量测定茶多酚

在λex/λem=450/556 nm,十二烷基苯磺酸钠(DBS)存在下,吖啶橙(AO)-罗丹明6G(R6G)间能够发生有效的能量转移,使R6G荧光大大增强。酸性条件下,茶多酚的加入使体系R6G的荧光发生猝灭。利用AO-R6G能量转移荧光猝灭法定量测定茶多酚,提高了测定的灵敏度和选择性。茶多酚含量在0.75~60mg/L范围内与R6G荧光猝灭程度呈良好线性关系,方法检出限为0.35 mg/L。6次平行测定样品相对标准偏差1.36%~2.17%,回收率为93%~107%。该方法用于茶叶样品中茶多酚含量的测定,结果满意。