荧光探针法快速检测苯巴比妥含量

建立了快速测定苯巴比妥含量的方法。在pH 6.0的Clark-Lubs(C-L)缓冲溶液中,向一定浓度十六烷基三甲基溴化铵中加入荧光桃红,体系荧光增强,再加入苯巴比妥,体系荧光强度降低,且药品加入量与降低程度呈良好线性关系。在优化试验的条件下,线性范围是0.008～0.72 mg/L,检出限为0.02 mg/L。由该体系检测了药品在动物血清中的含量,回收率为93.6%～97.3%,相对标准偏差在2.3%～3.2%之间。建立了荧光桃红-十六烷基三甲基溴化铵测定苯巴比妥含量的荧光探针法。     

荧光探针法检测人体代谢中头孢他啶含量

建立了一种快速测定头孢他啶含量的荧光探针法。在pH 4.00的Britton-Robinson缓冲溶液中,曙红Y与十六烷基三甲基溴化铵发生荧光增强反应,再加入头孢他啶,体系荧光强度降低,且降低程度与药品加入量有良好线性关系。在优化实验条件下,线性范围为0.008～0.8 mg/L,检出限为0.0018 mg/L。借此检测了头孢他啶在人体代谢(血清和尿液)中的含量,回收率97.5%～102.6%,相对标准偏差1.9%～2.1%。     

荧光探针法快速测定牛奶中三聚氰胺

在pH 8.40的缓冲溶液中,一定浓度的溴化十六烷基三甲基铵可以使阴离子染料荧光素的荧光强度显著增强,加入一定量的三聚氰胺后,其荧光发生猝灭,且荧光猝灭的程度在一定的范围内与加入的三聚氰胺的量呈良好的线性关系,据此建立了以荧光素作为荧光探针测定三聚氰胺含量的荧光光谱法。优化了实验条件,获得的线性范围为0.025～0.85 mg/L,检出限为0.0019 mg/L。样品回收率为82.9%～87.4%,相对标准偏差为1.9%～4.0%。方法可用于牛奶中三聚氰胺的快速测定。     

阳离子表面活性剂与茜素红的荧光反应及其分析应用

应用荧光光谱法研究了3种阳离子表面活性剂(CS)与茜素红(Alizarin red,AR)间的相互作用.在pH 6.60的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,当CS的浓度较低时,CS的加入使AR的荧光猝灭,而高浓度时却使荧光增强.因此认为低浓度时CS单体与AR形成稳定离子缔合物使体系荧光猝灭,而高浓度时则形成胶束抑制缔合物的形成而表现出胶束的增溶增敏特性.在0.1～30.0 mg/L的质量浓度范围内荧光强度变化与CS浓度呈良好的线性关系,检出限分别为0.018 mg/L(十六烷基三甲基溴化铵,CTMAB)、0.025mg/L(氯化十六烷基吡啶,CPC)和0.032 mg/L(氯化十四烷基二甲基苄铵,Zeph).该方法用于水样中CS含量的测定,回收率为99%～103%.     

荧光法测定有机磷农药残留总量及其分析应用

在pH 6.20的Britton-Robinson缓冲溶液中,4,5-二溴荧光素(R)与一定浓度的溴化十六烷基三甲基铵(CTMAB)反应,使其荧光强度剧增,当在R-CTMAB体系中加入有机磷农药后,体系的荧光强度明显降低,且降低程度与有机磷农药的加入量呈良好的线性关系,据此建立了测定有机磷农药残留总量的新方法.在优化实验条件下,线性范围为0.05～0.88 mg/L,检出限为0.041 mg/L.已用于大米、面粉和土壤中有机磷农药残留总量的检测,回收率在87.5%～95.7%之间,相对标准偏差为1.5%～2.3%,符合农药残留量分析的要求.     

荧光猝灭法测定壳聚糖含量

在pH 6.3的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中,壳聚糖对荧光素的荧光强度具有明显的猝灭作用,且在一定浓度范围内,其猝灭程度与加入的壳聚糖浓度成线性关系,据此建立了一种新的测定壳聚糖含量的荧光猝灭分光光度法。该方法的回归方程为ΔF=64.02+42.28ρ(mg/L),R2=0.9942,线性范围为0.50~10.0 mg/L,检出限为0.27 mg/L。样品测定的RSD为4.5%(n=6),平均回收率为99.3%。采用该方法可测定复杂样品中的壳聚糖含量。     

蛋白质的曙红Y-中性红逆向能量转移荧光法测定

在pH 2.35的B-R缓冲溶液中,酸性染料曙红Y(EY)与碱性染料中性红(NR)之间由于静电吸引能够发生有效的能量转移,使能量受体NR荧光增强,能量给体EY的荧光猝灭.在该体系中加入人血清白蛋白(HSA),由于竞争作用使得HSA的加入破坏了EY-NR间的能量转移,产生了明显的逆向反应,并且生成HSA-EY络合物,利用该络合物的荧光增加强度与HSA含量间的线性关系建立了一种测定微量血清蛋白的新方法.结果表明,血清蛋白工作曲线线性范围为0.6～12.0 mg/L;方法检出限为0.25 mg/L;6次平行测定相对标准偏差为1.94%～4.58%;回收率为96%～105%.该方法的稳定性好、选择性高,直接用于人血清试样中总蛋白含量的测定,实验结果与常用的双缩脲法基本一致.     

姜黄素-La3+-CTMAB-核酸体系的荧光增强效应及其应用

研究了镧离子(La3+)-姜黄素(CU)-十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)-核酸荧光增强体系.建立了测定核酸的新方法.体系的最优条件为:六次甲基四胺(HMTA)-HCl缓冲溶液(pH 5.80)中,1.00× 10-3 mol/L阳离子表面活性剂CTMAB存在下,姜黄素浓度为2.00×10-5 mol/L,La3+的浓度为1.40×10-4 mol/L时,核酸能增强La3+ -CU络合物的荧光强度,而且体系荧光的增强程度与核酸的加入量在一定范围内呈线性关系.fsDNA,ctDNA和yRNA线性范围分别为7.00×10-4～10.00 mg/L,4.00×10-4～10.00 mg/L和7.00×10-4～10.00 mg/L;检出限分别为0.17,0.02和0.14 μg/L.与已报道的核酸的分析方法相比,本方法具有较宽的线性范围和较高的灵敏度.研究表明,核酸对体系荧光的增强源于DNA主链上PO3-4与CU之间的静电结合,以及通过氢键和疏水力进行的沟槽式结合,为探针分子提供了疏水性的微环境,降低了体系的非辐射能量损失,使体系的荧光强度增加.     

荧光素-曙红Y能量转移荧光猝灭法测定微量白蛋白研究

在λex/λem=405/547 nm,于缓冲溶液和表面活性剂存在的情况下,荧光素和曙红Y能够发生有效能量转移,而牛血清白蛋白(BSA)的加入使得曙红Y荧光猝灭,该体系可用于微量蛋白质的测定。系统探讨了荧光素-曙红Y能量转移体系发生荧光猝灭的条件,最佳条件为:2.0 mL pH=3.8的B-R缓冲溶液,0.4 mL 0.05%曲拉通X-100,1.5 mL 1.0×10-4mol/L的荧光素水溶液,2.0 mL 1.0×10-4mol/L的曙红Y水溶液,最佳实验时间为溶液配制完成静置15 min后60 min内,最佳加入顺序为pH=3.8缓冲溶液+荧光素+曙红Y+曲拉通+蛋白质标准溶液或样品。在优化的实验条件下,蛋白质含量在0～2.0μg/mL范围内与荧光猝灭强度呈良好的线性关系。检出限为6.6 ng/mL;测定样品的相对标准偏差(RSD)在±5%以内;样品加标回收率为90.4%～95.3%。该法可用于人血清、牛奶中蛋白质含量的测定。     

保健食品中壳聚糖含量检测新方法的研究

在pH 5.5的B-R(Britton-Robinson)缓冲溶液中壳聚糖对荧光素的吸光度度具有明显的降低作用,且降低程度与加入的壳聚糖浓度成线性关系,据此建立了一种新的测定壳聚糖含量的分光光度法。该方法线性回归方程为A=0.36414-0.04854C,线性范围为15~150 mg/L,相关系数R为0.9911,检出限为9.36 mg/L,平均回收率为99.6%,用荧光光度法做了对照实验,结果一致。采用该方法可测定复杂样品中微量壳聚糖的含量。     

曙红-中性红荧光能量转移抑制法测定肝素

在pH 6.65的Britton-Robinson (B-R)缓冲溶液中, 酸性染料曙红(EY)与碱性染料中性红(NR)之间由于静电吸引而能够发生有效的能量转移, 使得能量受体NR荧光增强, 同时能量给体EY的荧光猝灭. 而肝素的加入对该荧光体系间的能量转移产生了明显的抑制作用, 随肝素量的增加EY荧光依次增强, 由此建立了测定微量肝素的新方法. 结果表明, 肝素在0.1～2.0 mg/L范围内与EY的荧光增强程度呈良好的线性关系. 方法检出限0.071 mg/L, 用于肝素钠注射液中肝素钠效价的测定, 6次平行测定相对标准偏差1.4%～3.6%, 回收率95.2%～105.3%.     

荧光光度法测定阿莫西林

在pH9.40的Tris-盐酸缓冲介质中,氯代十六烷基吡啶(CPC)对阿莫西林的荧光有明显的增敏作用,以274nm和304nm为激发波长(λ_(em))和发射波长(λ_(ex))测定时,其荧光的增强程度与阿莫西林的质量浓度在0.2～87.7mg·L~(-1)范围内呈线性关系,此反应对阿莫西林的检出限(3s/k)为0.026mg·L~(-1)。利用此反应作为测定阿莫西林的方法并应用于注射用阿莫西林钠和阿莫西林胶囊的分析,测定结果与标示值相符,测得回收率分别为100.8%和97.8%,测定结果的相对标准偏差(n=6)分别为2.5%和3.2%。     

荧光光谱法测定奶制品中的三聚氰胺

三聚氰胺能够与荧光素在水溶液中发生作用,使荧光素的荧光强度增强,且在一定浓度范围内,荧光强度与三聚氰胺的浓度成线性关系,据此建立了一种新的测定奶制品中三聚氰胺的荧光分析方法。方法的回归方程为ΔI=178.2ρ(10-6g/L),r=0.9977,线性范围5.00×10-7~1.00×10-5g/L,RSD为1.9%(n=10),检出限为9.85×10-8g/L。采用该方法测定奶粉和液态奶中三聚氰胺的含量,测得的平均回收率分别为95.1%和95.8%。     

吖啶橙-罗丹明6G能量转移荧光猝灭法定量测定茶多酚

在λex/λem=450/556 nm,十二烷基苯磺酸钠(DBS)存在下,吖啶橙(AO)-罗丹明6G(R6G)间能够发生有效的能量转移,使R6G荧光大大增强。酸性条件下,茶多酚的加入使体系R6G的荧光发生猝灭。利用AO-R6G能量转移荧光猝灭法定量测定茶多酚,提高了测定的灵敏度和选择性。茶多酚含量在0.75~60mg/L范围内与R6G荧光猝灭程度呈良好线性关系,方法检出限为0.35 mg/L。6次平行测定样品相对标准偏差1.36%~2.17%,回收率为93%~107%。该方法用于茶叶样品中茶多酚含量的测定,结果满意。     

微流控芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测法测定片剂中盐酸美西律的含量

建立了微流控芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测法测定片剂中盐酸美西律含量的方法,对衍生条件和电泳条件进行了系统的考察。盐酸美西律经异硫氰酸荧光素(FITC)40℃衍生6h,以20 mmol/L硼砂为电泳缓冲溶液,进样30s后,分离电压2000V,可在1 min内完成一次检测。方法的检出限为0.022 mg/L、线性范围0.108～1.079 mg/L、相关系数0.994,加标回收率为99.7%～102.3%,方法适用于盐酸美西律的检测和质量控制。     

荧光素二聚体荧光探针测定卡那霉素的研究

基于卡那霉素对荧光素二聚体具有良好的荧光增强作用,以现场形成的荧光素二聚体作为荧光探针,建立了卡那霉素定量分析的新方法。在碱性条件下（pH=9.0）,当溴化十六烷基三甲基铵（CTAB）浓度为0.4-1.0 mmol/L时,荧光素（FL）在CTAB作用下形成弱荧光现场二聚体,导致荧光猝灭。加入卡那霉素,体系荧光明显增强,且荧光强度与卡那霉素浓度呈良好的线性关系。在优化条件下,卡那霉素的测定线性范围为2.5×10^-3 - 0.1 g/L,检出限（3σ/K）为1.4×10^-4g/L。用于实际样品分析,测定回收率为101%-116%,RSD为1.9%-2.6%。     

水溶性苯胺蓝与十六烷基三甲基溴化铵作用的共振光散射研究

在p H 1.81的缓冲介质中,水溶性苯胺蓝与十六烷基三甲基溴化铵作用并形成离子缔合物,产生以383 nm为特征峰的共振光散射(RLS)增强信号。其RLS增强程度与水溶性苯胺蓝浓度成线性关系,检出限和线性范围分别为1.28 nmol/L和0.013~54.0μmol/L,据此建立了痕量水溶性苯胺蓝的共振光散射分析方法。     

基于半导体聚合物量子点的羧酸酯酶比率荧光传感

建立了以半导体聚合物聚[(9,9-二辛基芴)]量子点(PFO Pdots)为荧光探针的羧酸酯酶(CaE)比率型荧光传感方法.带负电荷的PFO Pdots与带正电荷的聚乙烯亚胺(PEI)通过静电作用形成纳米复合物Pdots@PEI,在440和467 nm处有两个荧光发射峰.在CaE作用下,CaE的底物荧光素二乙酸酯(FDA)水解生成带负电的产物荧光素,此物质与带正电荷的Pdots@PEI之间由于静电作用距离拉近,两者可以发生共振能量转移,导致能量供体Pdots@PEI的荧光强度逐渐减弱,而荧光素的荧光强度逐渐增强.基于Pdots@PEI的荧光减弱和荧光素的荧光增强所构成的荧光强度比率关系,建立了选择性检测CaE的新方法.在最优实验条件下,本方法对CaE检测的线性范围为0.75~50.00 U/L,检出限为0.75 U/L(S/N=3).将本方法用于兔血液中CaE含量的检测,结果令人满意.     

荧光猝灭法测定中草药中痕量钴

在pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液和十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)介质中,钙黄绿素与罗丹明B之间发生能量转移而导致后者的荧光增强(λem581nm)。当在此体系中加入痕量Co2+后,于发射波长581nm处产生荧光猝灭现象。据此提出了荧光猝灭法测定中草药中痕量钴含量。Co2+的质量浓度在4.0×10-4～1.35×10-2g.L-1范围内与反应液荧光强度的降低程度呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为1.8×10-7g.L-1。方法用于中草药样品分析,回收率在97.6%～102%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在0.98%～1.5%之间。     

水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷

利用荧光光谱研究了三磷酸腺苷(ATP)与水溶性阳离子荧光共轭聚合物的相互作用,发现加入ATP后,聚合物的荧光强度被显著猝灭,且猝灭程度与ATP的加入量成正比,据此建立了测定ATP的方法.荧光光谱的激发波长选择395 nm,发射波长为521 nm,激发狭缝宽度为10.0 nm,发射狭缝宽度为10.0 nm.在0 05 mol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH=7.4)中,测定ATP的线性范围为8.0×10-8～1.0×10-5 mol/L; 检出限为2.0×10-8 mol/L; 回收率在93.6%～105.6%之间; 相对标准偏差在2.2%～6.9%之间.本方法用于三磷酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中ATP的测定,获得满意结果.