固相萃取-超高压液相色谱-串联质谱测定水中19种抗生素

应用固相萃取(SPE)及液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,建立了水中痕量(ng/L)四环素类、磺胺类、大环内酯类、喹诺酮类和β-内酰胺类5类共19种抗生素的同时定量检测方法。水样通过HLB萃取小柱富集后,以C18反相色谱柱为分析柱,乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,采用LC-MS/MS进行定量分析。选择电喷雾正电离源(ESI+),多反应监测模式(MRM),内标法定量。19种抗生素在0.5~1 000μg/L范围内均具有良好的线性关系,方法的定量下限(S/N=10,1 000倍浓缩)为0.1~0.5 ng/L。以纯水和河水(黄浦江水)作为基底,13C-咖啡因为内标物,加标质量浓度为20、100 ng/L时,抗生素的平均加标回收率分别为75%~125%和77%~132%,相对标准偏差(RSD)分别为1.7%~6.9%和0.9%~6.5%,表明所建立的测试方法准确可靠。研究结果表明,黄浦江水受到了抗生素污染,共检出15种抗生素,检出的四环素类、磺胺类、大环内酯类、喹诺酮类及β-内酰胺类抗生素污染质量浓度分别为13.0~56.9、12.2~103.4、53.8~84.8、3.1~26.2、16.5~181.6 ng/L。     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定畜禽饮用水中23种抗生素和3种β-受体激动剂

建立了固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱同时测定畜禽饮用水中4类23种抗生素(磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类)和3种β-受体激动剂(克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇)的分析方法。样品经高氯酸调节pH至5.0,加入乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA),HLB固相萃取柱富集,用超高效液相色谱-质谱联用仪分时段多反应监测离子模式分析,外标法定量抗生素,内标法定量β-受体激动剂。23种抗生素和3种β-受体激动剂的空白基质加标回收率为50.7%~104.6%,相对标准偏差(n=3)为2.6%~8.8%。23种抗生素和3种β-受体激动剂的线性关系良好,相关系数均大于0.994,检出限为0.01~0.20 ng/L。通过该方法分析了北京地区36家规模化畜禽养殖场畜禽饮用水中的抗生素和β-受体激动剂,检出了多种抗生素,并对含量进行了定量计算。     

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定环境水样中22种抗生素

抗生素作为环境介质中一种典型的新污染物,在各类环境水样中检出频率高且浓度低。为快速、灵敏、准确地分析各类水体中的抗生素,建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法(SPE-HPLC-MS/MS)同时测定环境水样中4种青霉素类、12种喹诺酮类和6种大环内酯类共22种抗生素的分析方法。针对抗生素特性和样品基质特点优化前处理方法,重点优化固相萃取柱、水样pH值、水样中乙二胺四乙酸二钠(Na₂EDTA)加入量。在200 mL水样中加入0.5 g Na₂EDTA,并调节水样的pH值至3,经HLB固相萃取柱富集净化,以乙腈-0.15%(v/v)甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾电离源,在正离子模式下使用多反应监测模式进行定性定量分析。结果显示,22种抗生素的相关系数(r)≥0.995,呈现良好的线性关系,方法检出限和定量限分别为2.3~10.7 ng/L和9.2~42.8 ng/L,地表水中3个水平下的加标回收率为61.2%~157%,相对标准偏差(RSD)为1.0%~21.9%,废水中3个水平下的加标回收率为50.1%~129%, RSD为1.2%~16.9%。该方法成功用于水库、地表水、污水处理厂出口、畜禽养殖场等不同类型水样中抗生素的同时测定,其中地表水和畜禽养殖废水中大部分抗生素有检出,在地表水中林可霉素检出率为90%,在畜禽养殖废水中氧氟沙星的检出含量最高,为127 ng/L。该方法检出限和回收率满足定量分析要求,且具有富集水样体积少、分析时间短、适用范围广等优势,特别适用于突发环境污染应急监测,同时为摸清新污染物环境赋存底数和新污染物治理与管控提供有力支撑。     

固相萃取-高效液相色谱法测定畜牧粪便中13种抗生素药物残留

建立了固相萃取-反相高效液相色谱法测定畜牧粪便中5种磺胺类、4种四环素类、2种喹诺酮类以及氯霉素和呋喃唑酮的检测方法.采用乙腈和0.01 mol/L草酸作为流动相分离4种四环素类和氯霉素,乙腈和0.025 mol/L醋酸铵作为流动相分离5种磺胺类和其它3种抗生素.结果表明,检测的13种抗生素出峰时间稳定,峰形较好,检出限0.01～0.05 mg/L,定量下限0.03～0.167 mg/L,采用柠檬酸缓冲液酸化的乙腈对猪粪便样品前处理,采用EDTA-McIlvaine提取液对鸡粪便样品前处理,两类样品均通过HLB固相萃取小柱纯化富集,回收率为54%～103%.该方法成功用于天津市4个畜牧养殖基地的20个畜牧粪便样品中抗生素的检测.结果表明,均有不同浓度的抗生素检出,浓度范围0.3～173 mg/kg.     

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定养殖海水中23种抗生素

建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱(SPE-HPLC-MS/MS)同时检测水中6类23种抗生素的分析方法。水样用固相萃取柱富集净化,通过对比水样在不同上样pH、洗脱液用量等条件下的回收率,优化了前处理方法。采用0.1%(v/v)甲酸-1 g/L甲酸铵水溶液和甲醇-乙腈(1:1, v/v)体系作为流动相,经过梯度洗脱进行分离,在HPLC-MS/MS多反应监测模式下进行定性定量分析。结果显示,23种抗生素的方法检出限(MDL)范围为0.1~2.9 ng/L,加标回收率为47.3%~132.6%。采用该方法对东营海水养殖区5个养殖池水样进行了检测,除青霉素类之外的各类抗生素均有检出,其中磺胺增效剂甲氧苄氨嘧啶的检出率达100%,氯霉素类抗生素氟甲砜霉素检出的最高质量浓度达到261.0 ng/L。结果表明,所建立的方法高效、灵敏、可靠,可用于海水中多种抗生素的分析。     

高效液相色谱-串联质谱法同时检测水中17种抗生素

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时检测水中大环内酯类、磺胺类、甲氧苄啶、四环素类、氟喹诺酮类五类共17种抗生素含量的分析方法。水样经Oasis HLB固相萃取小柱富集净化后,以CORTECSTM C18色谱柱(100×4.6mm,2.7μm)分离,2%甲酸+2mmol/L乙酸铵溶液-乙腈为流动相,在电喷雾离子源正离子模式下采用质谱多反应监测模式(MRM)检测。结果表明,各目标化合物在0.50~250ng/mL范围内,线性关系良好(R20.990),检测限为0.01~2.50ng/L;在10和100ng/L添加水平下,17种抗生素的加标回收率为60.6%~125%,相对标准偏差(RSDs,n=4)为0.311%~14.8%。应用该方法测定广州市某河流的水样,除三乙酸竹桃霉素、氯四环素、洛美沙星、恩氟沙星上游未被检出,下游微量检出外,其余13种抗生素均有检出,其中氧四环素的浓度最高,最大值达560ng/L,四环素次之,为540ng/L。     

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定土壤中氟喹诺酮、四环素和磺胺类抗生素

建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时检测土壤中氟喹诺酮类、四环素类和磺胺类18种抗生素的分析方法。土样经含50%乙腈的磷酸盐缓冲液(pH=3)提取后,以SAX-HLB串联小柱净化富集,在HPLC/MS/MS多反应监测模式下进行定性及定量分析。添加浓度为200和50μg/kg时,土壤中氟喹诺酮类、四环素类、磺胺类的加标回收率分别为67.2%～89.0%,62.2%～85.4%和55.8%～97.4%;其相对标准偏差为1.1%～17.2%。以3倍信噪比估算出氟喹诺酮类、四环素类、磺胺类的检出限分别为3.4～8.9μg/kg,0.56～0.91μg/kg和0.07～1.85μg/kg。应用此方法检测6种不同类型土壤样品,结果表明,污灌区土壤中检出有抗生素,浓度为1.72～119.6μg/kg。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定土壤中30种抗生素

土壤基质复杂,土壤中残留的抗生素种类繁多,浓度多为痕量水平,高灵敏度的仪器方法、有效的净化和富集方法、多种类抗生素的同时检测是土壤中抗生素检测的重点和难点。该研究建立了固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定土壤中7类(磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、β-内酰胺类、酰胺醇类和林可酰胺类)30种抗生素的方法。首先,通过参数优化确定最佳质谱条件,选择BEH-C18色谱柱,以0.1%(v/v)甲酸甲醇溶液-0.1%(v/v)甲酸水溶液为流动相,10%(v/v)甲醇水溶液为进样溶剂。然后,通过提取条件(萃取剂种类及体积)和固相萃取条件(上样液pH、淋洗液有机溶剂比例、洗脱液种类及体积)的优化,确定使用10 mL乙腈和Na₂EDTA-McIlvaine缓冲液的混合溶液(1∶1, v/v)为萃取剂,萃取液pH调节至8.0后,采用HLB小柱进行固相萃取,并以10 mL超纯水淋洗净化,最后用10 mL甲醇-乙腈(1∶1, v/v)洗脱目标分析物。在优化的分析条件下,该方法的定量限为0.043~4.04 μg/kg,目标化合物的标准曲线线性关系良好,相关系数在0.992~1.00的范围内,在20、100、200 μg/kg的添加浓度下,大多数目标化合物的加标回收率范围为44.8%~164%,相对标准偏差为0.700%~14.8%。将该方法用于6个实际土壤样品的分析,结果显示在30种抗生素中,17种抗生素有检出,其中12种抗生素的检出率为100%。环丙沙星和诺氟沙星是土壤样品中含量最高的两种抗生素,它们的含量范围分别是13.7~32.1和15.6~43.6 μg/kg。本研究建立的方法简单、快速、溶剂使用量少,能用于土壤样品中痕量水平的7类30种抗生素的同时测定。     

规模化养殖场废水中抗生素种类及残留特征研究

2010年调查了海南省6家规模化养猪场抗生素使用品种及来源,并采集养殖废水样品,用高效液相色谱紫外检测器检测了样品中4种四环素(四环素、土霉素、金霉素和强力霉素)和8种磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺甲噻唑、磺胺噻唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉)的残留浓度水平。结果显示,6家养殖场废水中土霉素、四环素和磺胺嘧啶的检出率及检出浓度较高,其中土霉素检出率为100%,最高浓度为71.75μg/L;四环素检出率为63%,最高检出浓度为24.83μg/L;磺胺嘧啶检出率为83%,最高检出浓度为17.69μg/L。4种四环素类检出总量变化范围为18.25～99.64μg/L,8种磺胺类检出总量变化范围为3.45～24.49μg/L;从养殖规模上看,小规模养殖场抗生素类检出品种较多,检出浓度也较高。     

固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法同时检测禽畜粪便中多种抗生素残留

建立了固相萃取-超高效液相色谱串联质谱(SPE-UPLC/MS/MS)同时测定禽畜粪便中6种磺胺类(SAs)、4种四环素类(TCs)、3种氟喹诺酮类(FQs)、3种大环内酯类(MACs)以及1种硝基呋喃类(NFs)抗生素残留的方法。样品分别由McIlvaine-Na2EDTA缓冲液和有机混合提取液逐次超声提取,合并提取液,以正己烷去脂,过SAX-HLB固相萃取系统富集净化,经氮吹、定容后,以乙腈和0.1%甲酸-水溶液为流动相进行UPLC/MS分离检测,内标法定量。在0.1～1000μg/kg(Dry weight)浓度范围内,所有目标物标准曲线R2均大于0.99,样品加标回收率在42.3%～79.6%之间,相对标准偏差为1.4%～5.4%。方法检出限为0.1～2.0μg/kg,定量下限为0.3～6.6μg/kg。应用本方法检测华北地区多个禽畜养殖基地粪便样品32份,所有抗生素均有不同程度的检出,最高检出浓度为金霉素125μg/kg。     

大辽河水系河水中16种抗生素的污染水平分析

采用固相萃取-液相色谱-串联质谱建立了水中磺胺(SAs)、氟喹诺酮(FQs)、四环素(TCs)和氯霉素(CAPs)4类共16种抗生素的同时定量分析方法。该方法采用正、负离子同时扫描模式,提高了分析速度;同时在固相萃取洗脱步骤中采用两种溶剂(甲醇及含氨水的甲醇)组合对目标抗生素进行洗脱,在减小洗脱溶剂用量的同时又提高了回收率。用此法对大辽河水系20个采样点的河水进行了定量检测。结果表明: 该法对水体中的目标抗生素有较好的灵敏度和富集效果,方法回收率为69.5%～122.6%,检出限为0.05～0.32 ng/L。在大辽河水系河水中共检出4类13种抗生素的残留,其中磺胺甲基异恶唑在所有采样点都有检出;氟喹诺酮类抗生素的局部残留浓度相对较高;四环素和氯霉素的检出频率和检出浓度相对较低。在河流的上游,这4类抗生素的残留水平较低,而在大城市如沈阳、本溪、辽阳的周围残留水平较高。通过对大辽河水系河水中的抗生素污染水平进行系统的分析比较,所得数据说明大辽河水系存在一定程度的抗生素残留污染,今后对周边地区抗生素污染排放需要加强科学管理。     

QuEChERS结合液相色谱-串联质谱法快速测定猪肉中多类兽药残留

采用改进的QuEChERS方法提取和净化猪肉样品,建立了同时测定磺胺类、磺胺类增效剂、β-受体激动剂、四环素类、喹诺酮类、金刚烷胺和性激素共7类35种兽药残留的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。样品经 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸）-Mcllvaine缓冲液-2.5%（体积分数）乙酸乙腈溶液提取,提取液经盐析后取乙腈相,用氨基（NH₂）吸附剂分散固相萃取净化后,在电喷雾离子源正离子多反应监测（MRM）模式下进行测定,基质外标法定量。35种兽药在1.0～50.0 μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996。在3个不同添加水平下的平均回收率为71.8%～113.5%,相对标准偏差为0.6%～9.8%（n=6）,检出限和定量限分别为0.01～1.01 μg/kg和0.04～3.37 μg/kg。该方法操作简单,净化效果好,灵敏度高,适用于猪肉中兽药多残留的同时快速定性、定量分析。     

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中125种兽药残留

采用冷冻脂质过滤,结合分散固相萃取净化的QuEChERS方法,建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中125种兽药残留的检测方法。样品中的11类兽药（硝基咪唑类、苯并咪唑类、磺胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、雄激素类、孕激素类、糖皮质醇类、雌激素类、氯霉素类）用70%（v/v）乙腈-水溶液（含0.1 mol/L EDTA）提取后,提取液在-20℃冷冻处理2 h,再经分散固相萃取法净化,净化液经稀释后,以超高效液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量。结果显示125种兽药的线性相关系数R²≥0.99,定量限范围为2.0~60 μg/kg,回收率在60.4%~119.3%之间,相对标准偏差在0.3%~16.1%之间。该方法前处理简单、准确、成本较低,适用于鸡蛋中兽药残留的高通量快速检测分析。     

高效液相色谱法同时检测蜂蜜中的5类抗生素残留

建立了蜂蜜中氯霉素类、硝基咪唑类、喹诺酮类、磺胺类、四环素类5类共15种抗生素残留同时检测的高效液相色谱分析方法.蜂蜜经pH 2.0的磷酸水溶液溶解后直接用PCX固相萃取小柱净化富集,以乙腈-磷酸溶液(pH 2.5)作流动相,梯度洗脱,紫外检测器在274、315 nm波长下进行检测.15种抗生素在0.2 ～20.0 m...     

QuEChERS结合液相色谱-串联质谱法快速测定奶酪中多类兽药残留

建立了一种快速测定奶酪中大环内酯类、磺胺类、喹诺酮类和四环素类共50种兽药残留的分析方法。方法采用改进后的QuEChERS对奶酪进行前处理。样品在加入Na₂EDTA缓冲液和陶瓷均质子后,在5%(v/v)醋酸乙腈条件下进行振荡提取,氯化钠和无水硫酸钠用于盐析,经C₁₈吸附剂净化后,供液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定。目标化合物经ZORBAX-SB-C₁₈柱梯度分离,在正离子动态多反应监测模式下进行检测。结果表明,奶酪中50种兽药的定量限(LOQ)为0.05~20 μg/kg;在3个添加浓度(20、50、100 μg/kg)下(n=6),平均回收率在70%~120%范围内的比例分别为94%、92%和96%,相对标准偏差(RSD)为1%~14%。对市售的7个样品进行测定,其中两个样品分别检出了微量的罗红霉素和氟甲喹兽药残留。该方法快速简便,适用于奶酪中兽药残留的快速检测和日常监控。     

Multiclass method for the quantification of 92 veterinary antimicrobial drugs in livestock excreta,wastewater, and surface water by liquid chromatography with tandem mass spectrometry

A simple multiresidue method was developed for detecting and quantifying 92 veterinary antimicrobial drugs from eight classes (β‐lactams, quinolones, sulfonamides, tetracyclines, lincomycins, macrolides, chloramphenicols, and pleuromutilin) in livestock excreta and water by liquid chromatography with tandem mass spectrometry. The feces samples were extracted by ultrasound‐assisted extraction with a mixture of acetonitrile/water (80:20, v/v) and edetate disodium, followed by a cleanup using solid‐phase extraction with an amino cartridge. Water samples were purified with hydrophilic–lipophilic balance solid‐phase extraction column. Urine samples were extracted with acetonitrile and edetate disodium. Detection of veterinary antimicrobial drugs was achieved by liquid chromatography with tandem mass spectrometry using both positive and negative electrospray ionization mode. The recovery values of veterinary antimicrobial drugs in feces, urine, and water samples were 75–99, 85–110, and 85–101% and associated relative standard deviations were less than 15, 10, and 8%, respectively. The limits of quantification in feces, urine, and water samples were 0.5–1, 0.5–1, and 0.01–0.05 μg/L, respectively. This method was applied to determine real samples obtained from local farms and provides reliable quantification and identification results of 92 veterinary antimicrobial drugs in livestock excreta and water.     

Simultaneous determination of multi-class antibiotic residues in water using carrier-mediated hollow-fiber liquid-phase microextraction coupled with ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

A method has been developed for carrier-mediated hollow-fiber liquid-phase microextraction (HF-LPME) and enrichment of multiple classes of antibiotics in water samples. Eleven compounds (erythromycin, spiramycin, tilmicosin, sulfathiazole, sulfamethazine, sulfamerazine, oxytetracycline, tetracycline, ciprofloxacin, danofloxacin and enrofloxacin) from four important classes of antibiotics (of the macrolide, sulfonamide, tetracycline and quinolone type) have been simultaneously preconcentrated with one set of HF-LPME conditions, followed by determination by ultra-HPLC combined with electrospray ionization tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). Antibiotics can be determined at ng L^?1 levels using this highly sensitive and selective method. Parameters including immersion time, liquid membrane composition, sample pH, acceptor composition and extraction time were optimized to finally give detection limits in the 10?C250?ng?L^?1 range. Good linearity was achieved, with up to 156 times enrichment over the four classes of antibiotics. This multi-residue method enabled the simultaneous enrichment of all 11 multi-class antibiotics from spiked river water samples, with relative recovery between 79 and 118%.

Automated at-line solid-phase extraction-gas chromatographic analysis of micropollutants in water using the PrepStation

A fully automated at-line solid-phase extraction-gas chromatography procedure has been developed for the analysis of aqueous samples using the PrepStation. The sample extract is transferred from the sample preparation module to the gas chromatograph via an autosampler vial. With flame-ionization detection, limits of determination (S/N=10) of 0.05–0.13 μg/l were obtained for the analysis of HPLC-grade water when modifying the PrepStation by: (i) increasing the sample volume to 50 ml, (ii) increasing the injection volume up to 50 μl, and (iii) decreasing the desorption volume to 300 μl. The HP autosampler had to be modified to enable the automated “at-once” on-column injection of up to 50 μl of sample extract. The amount of packing material in the original cartridge had to be reduced to effect the decrease of the desorption volume. The total set-up did not require any further optimization after having set up the method once. The analytical characteristics of the organonitrogen and organophosphorus test analytes, i.e. recoveries (typically 75–105%), repeatability (2–8%) and linearity (0.09–3.0 μg/l) were satisfactory. The potential of the system was demonstrated by determining triazines and organophosphorus pesticides in river Rhine water at the 0.6 μg/l level using flame-ionization and mass-selective detection. No practical problems were observed during the analysis of more than 100 river water samples.