电脉冲激活猪卵母细胞的研究

通过对猪卵母细胞的电激活进行系统研究,结果表明：对于体外成熟卵母细胞,电场强度为 １ ２５０ Ｖ／ｃｍ ,脉冲时程为４０、６０ μｓ时,效果较好,一次脉冲激活率可达８５．３％ 和８７．１％ ;而对于体内成熟卵母细胞,电场强度为１ ５００ Ｖ／ｃｍ ,脉冲时程为４０、６０ μｓ 时,效果较好,一次脉冲激活率达８５．７％ 和８８．２％ ;增加脉冲次数并不能显著提高激活率,反而使卵母细胞裂解率显著增加;激活液选用０．３ ｍ ｏｌ／ Ｌ甘露醇（含０．１ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｍｇ Ｓ Ｏ４ ）时,添加 ０．１ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｃａ Ｃｌ２ ,获得较好的激活率（８７．８％ ）电脉冲激活卵母细胞后进一步培养,体内和体外成熟卵母细胞的发育率并无显著差异     

采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RaIGDS)Ras结合结构域的空间结构

Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白.利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2 SO4,0.2 mol/L NaAc,0.1 mol/L HEPES,5％ MPD,pH 7.5)中,晶体3天长成可组装大小.利用X-射线晶体衍射技术解析了人RalGDS的Ras结合域(RalGDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人RalGDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同.人RalGDS-RBD通过Glu838和Glu840在RalGDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠RalGDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键.人RalGDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构.     

普通鲤与建鲤MSTN基因比较分析

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是动物肌肉发育和生长过程中的负调控因子。采用RACE和基因组步移分别克隆获得了普通鲤MSTN cDNA基因全序列和MSTN基因组序列;普通鲤MSTN cDNA全长2 188bp,共编码375个氨基酸,提交GenBank获得序列登录号GQ214769.1,普通鲤MSTN基因组序列长为3 690bp,包含3个外显子和2个内含子,获得序列登录号GQ214770.1。聚类分析表明,克隆的鲤MSTN为MSTN1a;将普通鲤MSTN与人工育成品种建鲤MSTNs多层次比较,普通鲤MSTN同建鲤MSTN1a在核苷酸水平上的碱基差异位点分别为G(320)A,G(723)A,G(730)A,G(2121)A,A(2794)G,在蛋白水平仅V(78)I替换,暗示了MSTN1a在育种工作中承受的选择压力较大,研究结果为突变位点与鲤生长性能有可能的关联分析奠定基础。     

小鼠2-细胞期胚胎细胞电融合的研究

为了探索核移植克隆动物技术中的细胞融合参数,进行了小鼠2-细胞期胚胎细胞的电融合试验.直流电场强度为2kV/cm,脉冲时程40μs时,效果较好,可以获得70.5%的融合率和64.5%的发育率,进一步提高电场强度,裂解死亡率也明显提高;采用非电解质溶液(甘露醇)作为融合液时,胚胎细胞的融合率与融合胚的发育均优于电解质融合液(DPBS);在直流电脉冲之前,施加交流电脉冲是必要的,可以显著提高融合率(P＜0.05).     

猪卵核移植的研究

以湖北白猪为受体，杜洛克为供体进行了猪卵核移植的研究．结果表明，半胱氨酸对卵具有保护作用；卵龄对核移植效率有显著影响，以４２～４８ｈ为宜；激活后卵母细胞做受体可提高移核胚的发育率；供体核发育期对移核胚的发育有显著影响．核移植后的重组胚移入受体后，经体内发育得到了５只核移植仔猪．     

卵母细胞的卵龄对猪核移植效率的影响

对核移植中,猪卵母细胞的卵龄对核移植效率的影响进行了研究结果表明：体外成熟培养 ４８ ｈ 的猪卵母细胞最适合作为核受体,其激活率达 ７８．３％ ,并无裂解;去核率高达９０％ ;在作为核受体进行核移植时,融合率为７５％ ;重构胚胎的卵裂率为６４．６％ 卵龄进一步增大,激活率略有增加,但去核率、融合率和卵裂率均下降