玉米kn-1同源盒的高效表达

同源盒基因(homeoboxgenes)在植物,动物,真菌的广泛存在说明这种结构在真核生物进化过程中高度保守,并暗示其具有重要功能.本文将玉米kn-1同源盒插入表达载体pGEM△XbaI,并将形成的重组克隆pGEM△MK转化BL21(DE3)而获得高效表达;表达产物的分子量为29×103,并主要以可溶性蛋白形式存在.Kn-1,Quox-1,OSIH-1间的交叉免疫反应证实三者在蛋白质水平具同源性.而Kn-1同源结构域(Homeodomain)高效表达有助于进一步寻找其靶基因.     

电脉冲激活猪卵母细胞的研究

通过对猪卵母细胞的电激活进行系统研究,结果表明：对于体外成熟卵母细胞,电场强度为 １ ２５０ Ｖ／ｃｍ ,脉冲时程为４０、６０ μｓ时,效果较好,一次脉冲激活率可达８５．３％ 和８７．１％ ;而对于体内成熟卵母细胞,电场强度为１ ５００ Ｖ／ｃｍ ,脉冲时程为４０、６０ μｓ 时,效果较好,一次脉冲激活率达８５．７％ 和８８．２％ ;增加脉冲次数并不能显著提高激活率,反而使卵母细胞裂解率显著增加;激活液选用０．３ ｍ ｏｌ／ Ｌ甘露醇（含０．１ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｍｇ Ｓ Ｏ４ ）时,添加 ０．１ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｃａ Ｃｌ２ ,获得较好的激活率（８７．８％ ）电脉冲激活卵母细胞后进一步培养,体内和体外成熟卵母细胞的发育率并无显著差异     

小鼠2-细胞期胚胎细胞电融合的研究

为了探索核移植克隆动物技术中的细胞融合参数,进行了小鼠2-细胞期胚胎细胞的电融合试验.直流电场强度为2kV/cm,脉冲时程40μs时,效果较好,可以获得70.5%的融合率和64.5%的发育率,进一步提高电场强度,裂解死亡率也明显提高;采用非电解质溶液(甘露醇)作为融合液时,胚胎细胞的融合率与融合胚的发育均优于电解质融合液(DPBS);在直流电脉冲之前,施加交流电脉冲是必要的,可以显著提高融合率(P＜0.05).     

猪卵核移植的研究

以湖北白猪为受体，杜洛克为供体进行了猪卵核移植的研究．结果表明，半胱氨酸对卵具有保护作用；卵龄对核移植效率有显著影响，以４２～４８ｈ为宜；激活后卵母细胞做受体可提高移核胚的发育率；供体核发育期对移核胚的发育有显著影响．核移植后的重组胚移入受体后，经体内发育得到了５只核移植仔猪．     

卵母细胞的卵龄对猪核移植效率的影响

对核移植中,猪卵母细胞的卵龄对核移植效率的影响进行了研究结果表明：体外成熟培养 ４８ ｈ 的猪卵母细胞最适合作为核受体,其激活率达 ７８．３％ ,并无裂解;去核率高达９０％ ;在作为核受体进行核移植时,融合率为７５％ ;重构胚胎的卵裂率为６４．６％ 卵龄进一步增大,激活率略有增加,但去核率、融合率和卵裂率均下降