毛细管区带电泳测定D1蛋白酶的活性及其抑制剂先导化合物的筛选

建立了毛细管区带电泳技术快速测定D1蛋白酶活性及其抑制剂先导化合物的筛选方法。实验选用未涂层熔融石英毛细管(43 cm 5mm)和磷酸盐缓冲溶液(50 mmol/L, pH 3.0)作为分离介质,运行电压18 kV,测定了D1蛋白酶的活性并对部分抑制剂先导化合物进行了筛选。结果表明, ITP26和ITP21两种异噁唑噻唑哌啶类先导化合物对蛋白酶活性具有抑制作用,抑制率分别为26%和13%。     

抗卟啉抗体与卟啉的协同作用

meso -四 (α ,α ,α ,α - 0 -苯乙酰苯 )卟啉诱导的单抗 (MAb)导致meso -四 (α,α ,α ,α - 0 -苯乙酰苯 )卟啉Soret带来巨大红移 ,并且在meso -四 (α ,α ,α ,α - 0 -苯乙酰苯 )卟啉上产生巨大的诱导Cotton效应 (ICD) .借用ICD定量分析meso -四 (α ,α ,α ,α - 0 -苯乙酰苯 )卟啉同抗体的结合 ,表明在抗体超过meso -四 (α ,α ,α ,α - 0 -苯乙酰苯 )卟啉的情况下 ,既有 1∶1结合 ,又有 2∶1结合〔结合位点 :meso -四 (α ,α ,α ,α - 0 -苯乙酰苯 )卟啉〕     

稀土离子诱导钙调蛋白构象变化后的单克隆抗体制备

采用单克隆抗体技术研究了三价稀土离子与钙调蛋白作用后对其与靶分子识别能力的影响。牛脑钙调蛋白经2，4－二硝基氟苯修饰后再结合三价的铕离子，然后免疫Balb/c小鼠。经过3次免疫后在小鼠血清中检测到相应的抗体，抗体效价为1：12000；用杂交瘤细胞技术制备现一株抗钙调蛋白的单克隆抗体细胞株2C3；酶联免疫吸附法（ELISA）测定结果证实钙调蛋白结合稀土离子前后对该抗体的识别能力存在显著差异，表明该抗体可以用于进一步研究金属离子对钙调蛋白构象变化及其对靶分子识别的影响。     

圆二色谱和紫外可见光谱研究抗体-卟啉的相互作用

圆二色谱（CD）和紫外可见光谱（UV－VIS）可用来研究单克隆抗体（McAb)－卟啉之间的相互作用，卟啉形成McAb－卟啉复合物，在Soret带区域最大吸收峰有显著红移和增色现象，在350－450nm区域，形成复合物时能检测诱导的CD光谱。CD光谱遵守朗伯－比尔定律，显示等吸收行为。McAb－卟啉复合物的紫外可见吸收及诱导的CD光谱在PH6－11的范围内保持不变，说明复合物异常稳定，也说明McAb－卟啉结合位点之间疏水相互作用是主要因素。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶1的研究Ⅱ.酶学性质和荧光光谱研究(续Ⅰ)

测得了长白山白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶 1的最适反应的pH范围为 7.0～ 8.0 ,且与酶反应底物对甲苯磺酰-L -精氨酸甲酯 (TAME)的反应无明显的最适应反应温度 .荧光光谱的研究结果表明 :该酶的酪氨酸残基的荧光被色氨酸残基的荧光所掩盖 ;同步荧光光谱结果表明 :当发射波长与激发波长差Δλ分别为 2 0nm和 75nm时 ,精氨酸酯酶 1的荧光光谱分别由酪氨酸 (Tyr)和色氨酸 (Trp)残基所贡献 ,且处于亲水性环境中 ;精氨酸酯酶 1的荧光发射强度受溶液酸度变化的影响 .I- ,Acr和NBS对精氨酸酯酶 1的荧光淬灭结果表明这种酶中含有多个色氨酸残基 ,且处于不同的微环境中。     

人工模拟加卤酶 Ⅰ.半抗原合成、表征和生物活性测定

卟啉衍生物;酶联免疫吸附法;人工模拟加卤酶 Ⅰ.半抗原合成、表征和生物活性测定     

长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的荧光光谱

利用荧光光谱系统研究了长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶Ａ２的荧光特性。研究结果表明：当发射波长与激发波长差为２０ｎｍ和７５ｎｍ时,ＰＬＡ２的同步荧光分别主要由酷氨酸（Ｔｙｒ）残基和色氨酸（Ｔｒｐ）残基所贡献。缓冲溶液的酸度变化能够明显影响ＰＬＡ２氨基酸侧链的电荷分布,从而改变ＰＬＡ２的荧光发射强度。了子Ｃａ＾２＋一方面能增强ＰＬＡ２的荧光强度,另一方面也能够加快ＰＬＡ２与底物二棕樟酰磷脂酰胆碱（ＤＰＰＣ）     

采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RaIGDS)Ras结合结构域的空间结构

Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白.利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2 SO4,0.2 mol/L NaAc,0.1 mol/L HEPES,5％ MPD,pH 7.5)中,晶体3天长成可组装大小.利用X-射线晶体衍射技术解析了人RalGDS的Ras结合域(RalGDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人RalGDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同.人RalGDS-RBD通过Glu838和Glu840在RalGDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠RalGDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键.人RalGDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构.     

用荧光光谱和紫外-可见差谱研究抗体-卟啉的相互作用

meso-四 (α,α,α,α-O-苯乙酰苯 )卟啉与其单克隆抗体 1 F2结合后 ,产生显著的增色效应 ,反映了卟啉与抗体之间刚性紧密的结合 ,在抗体中的抗原结合部位存在芳香族氨基酸 .用同步荧光光谱结合荧光猝灭法得到抗体抗原结合部位的芳香族氨基酸主要为色氨酸和酪氨酸 ,但酪氨酸的残基数要少于色氨酸 .卟啉与抗体的结合比为 1∶ 1 ,解离常数 (2 .0 84± 0 .2 46)× 1 0 - 1 0 mol/L,可见卟啉与 Mc Ab1 F2有很高的亲和力 .     

抗meso-四(α,α,α,α-O-苯乙酰苯)卟啉抗体的酶学性质研究

利用小分子ｍｅｓｏ－四(α,α,α,α－Ｏ－苯乙酰苯)卟啉作为全抗原免疫小鼠,通过细胞融合等技术制备了单克隆抗体(ＭｃＡｂ)１Ｆ２,利用高效液相色谱(ＨＰＬＣ)、基质辅助激光解吸飞行时间质谱(ＭＡＬＤＩ/ＴＯＦＭＳ)证明纯化得到的单抗是很纯的．ＭｃＡｂ１Ｆ２的保留时间是２．６３ ｍｉｎ,亚型为ＩｇＧ２ａ,相对分子量为１５６ ６７８．８．ＭｃＡｂ １Ｆ２－卟啉复合物形成时,卟啉Ｓｏｒｅｔ带最大吸收峰从４０８ｎｍ红移到４１６ｎｍ,并有增色效应,说明ＭｃＡｂ１Ｆ２－卟啉是刚性且紧密结合．抗体酶稳定性很高,但比活力只有４．６８７ ５ Ｕ/ｍｇ,为天然酶ＨＲＰ的１．８９９%．抗体酶的Ｋｍ＝２０．２９ ｍｍｏｌ/Ｌ,ｋｃａｔ＝３９６．８２ ｍｉｎ－１,ｋｃａｔ/Ｋｍ＝１．９５５ ７×１０４Ｌ·ｍｏｌ－１·ｍｉｎ－１．