分光光度法测定微乳液中脂肪酶的酶活

通过对胶束酶学对传统脂肪酶酶活测定的改进,建立了适合于油包水微乳液体系中脂肪酶酶活测定的分光光度方法。与传统方法相比,本法克服了底物乳化液难配制、不稳定等缺点,无需进行在pH缓冲溶液体系中的酸碱滴定,提高了酶活测定的准确性。     

一种简易的尿素酶pH电极

酶电极最初以制备测定葡萄糖的电极而取名。只要将一层固定化酶膜包在特殊的离子选择性电极外面,就作成了酶电极。近年已制备了测定多种化合物的酶电极,将有可能在工业、临床、环境监测分析中得到广泛应用。尿素是肾、肝功能的重要指标。故曾有人制备了以铵离子选择性电极和CO_2选择性电极为基础的尿素酶电极用于测定尿素,但受到K~+、Na~+离子的干扰,后来又制备出只对NH_3     

水中汞量的酶法测定

提出用酶催化动力学光度法测定汞，是基于乳酸脱氢酶催化丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的反应，汞离子对于酶催化的抑制作用原理，通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸吸光度的变化率得出其酶促反应速度，对应于汞而制得标准曲线。检出限为0、18μg／L。讨论了pH值和共存离子对测定的影响。     

固定化过氧化物酶在过氧化物测定中的应用

采用聚丙烯酰胺凝胶迭氮法固定了辣根过氧化物酶，其作为催化剂用于荧光法测定过氧化物，并探讨了固定酶测定过氧化物的最佳条件，如溶液pH值、温度、反应时间、荧光剂用量等。结果表明：酶固定化后，反应pH值范围变宽，为pH5.0-7.0和7.5-9.0，最佳pH为7.8左右；酶的热稳定性与储存稳定性也都得到提高，在室温下便可用固定酶进行长时间测定，且可较长时间保存。采用固定酶制成的酶柱用于HPLC测定过氧化物，固定酶可反复使用，简化了测定操作，并降低了成本。     

以OT为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

以玻碳电极为工作电极研究了邻联甲苯胺(OT)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶(HRP)及其标记物的方法。HRP能够催化H2O2氧化OT,其反应产物在玻碳电极上-0.58V(vs.Ag/AgCl)左右被还原产生一个灵敏的还原峰,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大,借助此还原电流可以测定HRP,并进而可用于以HRP为标记物的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究,在最佳实验条件下测定游离HRP的线性范围是2.0×10-9～4.0×10-8g/mL,检出限为1.6×10-9g/mL;测定游离的酶标记物(IgG HRP),稀释范围为1∶2000～1∶400000,最大稀释比为1∶400000。     

以对氨基联苯为底物伏安法测定辣根过氧化物酶

伏安酶联免疫分析法是将伏安法与酶联免疫分析法相结合的一种分析方法,以测定标记酶的活性为基础,进而应用到各种模式的酶联免疫分析中,已经应用于植物病毒血清学的检测和动物病毒抗原抗体的测定等多个领域.辣根过氧化物酶(HRP)的测定对免疫学和组织化学的研究及临床疾病诊断具有重要的意义和广泛的应用前景.本文提出了以对氨基联苯为底物的伏安酶联免疫分析新体系,建立了测定HRP的伏安酶联免疫分析新方法.     

蛋白质顺序测定的策略

近年来蛋白质顺序测定在自动化、微量化与策略方面都有显著的进展。用DNA顺序分析技术间接地测定蛋白质顺序的策略已被广泛地采用,它能加快但不能代替蛋白质的顺序测定。质谱技术测定蛋白质顺序的途径也有了可喜的突破。高效液相色谱分离肽技术的发展、限制性酶切及各种选择性的化学与酶的降解方法的出现,为蛋白质顺序测定提供了更多可选用的工具。     

不同供氢底物用于测定H2O2的酶催化动力学研究

研究了牛血红蛋白(hemoglobin,Hb)作为过氧化物模拟酶,以酸性铬蓝K、罗丹明B、亚甲基蓝不同供氢底物测定H2O2的酶催化反应体系的催化特性和反应条件。探讨了采用不同底物测定时的催化反应机理。用于雨水中H2O2含量的测定,结果满意。     

过氧化物模拟酶催化荧光反应性能的研究——FeTMPvP-HVA-H_2O_2体系

本文研究了moso-四(N-甲基-3-吡啶基)卟啉和铁的络合物作为辣根过氧化物酶的模拟酶催化过氧化氢氧化高香草酸的荧光反应的性能。拟订了用模拟酶催化测定H_2O_2和葡萄糖的荧光测定方法。其检出下限分别为1.1×10~(-7)mol/LH_2O_2和0.2μgml~(-1)葡萄糖。对血清中葡萄糖的含量进行了测定,结果令人满意。通过动力学研究,比较了该模拟酶与辣根过氧化物酶及其它模拟酶催化活性的相对大小。     

大豆中脲酶活力的玻璃电极法测定

本文用玻璃电极电位法研究了大豆及脲酶制剂中脲酶活力的测定和酶的反应动力学，测定了米氏常数ＫＭ以及酶催化反应最大速度ｒｍ，方法快捷简便。     

两种形貌的介孔SiO2对纤维素内切酶吸附性能的研究

以EDTA2-、SO42-作为反离子分别合成了具有管状和圆盘状结构的介孔SiO2,并测定了2种介孔SiO2焙烧至不同温度时的表面积、孔体积参数,及其等电点;通过752分光光度计在550nm处测定纤维素内切酶的吸光度,研究了2种形貌的介孔SiO2对纤维素内切酶的吸附性能,同时测定了固定酶的活性。结果表明,管状和圆盘状结构的介孔SiO2对纤维素内切酶的吸附等温线分别为Ⅱ和Ⅰ型;介孔SiO2焙烧至700℃时,两者皆为Ⅱ型;至850℃时,前者转化为Ⅰ型,而后者转化为Ⅴ型。吸附等温线类型与介孔SiO2的结构、等电点以及酶分子尺寸与介孔尺寸的相匹配有关。酶经过介孔SiO2吸附固定后,稳定性明显提高;其中,管状结构的介孔SiO2对酶具有最大的负载量,但固定酶的活性却较低。     

鱼翅中硫酸软骨素的酶解-高效液相色谱法测定

建立了一种测定鱼翅中硫酸软骨素的酶解－高效液相色谱方法；该法利用在一定条件下硫酸软骨素能被硫酸软骨素酶ABC定量酶解成软骨素二糖，通过高效液相色谱法测定软骨素二糖的量来计算硫酸软骨素的含量。     

以2-磷酸抗坏血酸酯为底物检测碱性磷酸酯酶的微分脉冲伏安法

提出以2_磷酸抗坏血酸酯为碱性磷酸酯酶(ALP)底物微分脉冲伏安法测定ALP的方法 ;2_磷酸抗坏血酸酯在ALP的催化作用下发生水解反应生成抗坏血酸 ,抗坏血酸在玻碳电极上 +0.40V(vsAg/AgCl)被氧化而产生一个灵敏的氧化峰 ,氧化峰电流随着酶浓度的增大而增大 ,借助此氧化峰电流可以测定ALP ,进而可用于以ALP为标记酶的酶免疫分析 ;用微分脉冲伏安法对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究 ,建立了以2_磷酸抗坏血酸酯为底物的伏安酶联免疫分析新体系 ,测定游离ALP的线性范围是0.4～2.0×103 U/L,检测限为0.3U/L,对游离的IgG_ALP的测定最大稀释比为1∶200000。     

一种高灵敏度测定血红蛋白的荧光分析法

建立了以双水杨醛邻苯二亚胺为酶催化氧化底物,血红蛋白(Hb)作为过氧化物模拟酶,在Tween80介质中的酶催化反应测定血红蛋白的方法,并探讨了反应机理。讨论了利用本体系测定Hb的最佳条件,结果表明:在优化的条件下,Hb浓度在 5. 0×10-10 ~5. 0×10-8 mol/L范围内呈良好的线性关系,方法的检出限为 2. 6×10-11 mol/L。本方法与其它测定Hb方法相比具有更高的灵敏度。     

镧对Rhizoctonia solani的毒力及其致病酶活性的影响

采用琼脂平板生长速率法及液体培养基培养测定了La对立枯丝核病菌(Rhizoctoniasolani)的抑制作用和毒力,并测定了其对病菌胞外的果胶酶、蛋白酶和纤维素酶等几种致病酶的活性的影响。结果表明,随着La浓度升高,对病菌菌丝生长的抑制作用增强,固体培养上所测定的对病菌的EC50和EC95分别为171.9和667.7mg·L-1;在液体培养基中所测定的EC50和EC95分别为111 4和500 7mg·L-1。在一定浓度范围内,La提高了单位量菌丝所产生3种致病酶的活性,但由于对菌丝生长量的强烈抑制,使病菌胞外3种致病酶的总量或总活性受到抑制,减低了病菌的致病力。     

磷酸苯酯-碱性磷酸酯酶伏安酶联免疫分析新体系的研究

研究了以磷酸苯酯为底物微分脉冲伏安法测定碱性磷酸酯酶 (ALP)的方法。磷酸苯酯在ALP的催化作用下水解生成苯酚 ,苯酚在玻碳电极上 0 .70V(vs.Ag/AgCl)左右产生氧化电流 ,氧化电流随着酶浓度的增大而增大 ,借助此氧化电流可以测定ALP ,并进而可用于以ALP为标记酶的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究 ,测定游离ALP的线性范围是 0 .0 6U/L～ 1 .0× 1 0 3U/L ,检出限为 0 .0 6U/L     

葡萄糖氧化酶电极的研制和血清中葡萄糖的测定

葡萄糖氧化酶电极是研究得最多的酶电极之一。本文以牛血清白蛋白-戊二醛为交联剂,将葡萄糖氧化酶固定于醋酸纤维膜上,自制氧电极作电化学敏感元件,研制成葡萄糖氧化酶电极,并用流动注射法分析血清中葡萄糖量,线性响应范围10~(-6)—10~(-3)M,每张酶膜可连续测定400次血样,用该电极测定血清中葡萄糖,所得结果与酶光度法一致。     

一类酶反应底物的光化学荧光研究

研究了对位取代酚类酶反应底物的光化学荧光反应机理，指出光子不仅可以取代过氧化物酶，而且可以取代氧化剂（Ｈ_２Ｏ_２）。用于测定多种酶反应底物，结果满意。     

酶络合物的计量数和离解常数的测定

在酶学和络合物化学的研究中,经常会遇到一个重要的问题,即如何测定酶络合物中酶蛋白和金属离子、酶和底物或金属离子和配体等相互之间的数量关系,以及所形成的络合物的稳定性。这对于了解酶络合物的形成、结构和络合物的成键本质等方面都有很大的意义。     

OAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白

本文提出邻氨基酚 (OAP)-H2O2-辣根过氧化物酶（HRP）伏安酶联免疫分析体系并用于人血清中甲胎蛋白(αFP)的测定。该方法是将HRP催化H2O 2 氧化 OAP 的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物(邻苯醌亚胺)在滴汞电极上的还原反应相偶合, 在BR缓冲溶液中, 在-0.87 V (vs.SCE) 左右产生灵敏的极谱波。根据测定标记在甲胎蛋白抗体上的HRP的量, 求得发生免疫反应的αFP的含量。该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为1.25～400 mg/L。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定, 并与酶联免疫吸附测定光度法(ELISA)进行对照,二者相关性很好。